一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法与流程

本发明涉及药物化学成分分析检测，具体为一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法。

背景技术：

1、n-亚硝胺是一类含亚硝基的基因毒性物质，化学通式为r1(r2)n-n＝o。在已知的亚硝胺中，n-亚硝基二甲胺(ndma)和n-亚硝基二乙胺(ndea)会导致肝癌和鼻窦癌等疾病，已被国际癌症研究机构定为2a类致癌物。美国环境保护署综合风险信息系统级国际癌症研究机构将ndma、ndea、n-亚硝基甲基乙胺(nmea)、n-亚硝基吡咯烷(npyr)、n-亚硝基吗啉(nmor)、n-亚硝基哌啶(npip)、n-亚硝基正丙胺(ndpa)、n-亚硝基二苯胺(ndpha)和n-亚硝基正丁胺(ndba)评定为可能得人体致癌物。药品中亚硝胺化合物杂质污染引起了药品监管机构和公众的广泛关注，如缬沙坦原料、盐酸二甲双胍制剂等检测出了ndma杂质。

2、目前，药品中亚硝胺杂质的定量分析方法主要有gc-ms法、gc-ms/ms法和lc-ms/ms法，然而目前的这些方法存在取样量多，使用试剂多，精度差等问题。

技术实现思路

1、(一)解决的技术问题

2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，解决了上述背景技术中提出的问题。

3、(二)技术方案

4、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

5、根据本发明的第一方面，提供了一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，包括以下步骤：

6、(1)标准储备液的制备：吸取亚硝胺化合物混标溶液于容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配置成1.00μg/ml的标准储备液；

7、(2)标准系列储备液的制备：吸取标准储备液于容量瓶中，加入不同体积的甲醇，定容成具有浓度梯度的标准系列储备液；

8、(3)将标准系列储备液分别注入气相色谱-质谱联用仪进行检测，获取相应的亚硝胺化合物的标准质量色谱图，以亚硝胺化合物的定量离子对峰面积为纵坐标，以标准系列储备液中亚硝胺化合物的浓度为横坐标，得到标准工作曲线；

9、(4)样本提取：称取感冒药剂并提取，将提取液进行涡旋、超声、震荡、离心并过滤，得到净化样本；

10、(5)将净化样本注入气相色谱-质谱联用仪中获取净化样本的质量色谱图，若净化样本的质量色谱图中存在与标准质量色谱图对应的色谱峰，则带入标准工作曲线中，获取净化样本中的亚硝胺化合物的种类及含量。

11、优选的，步骤(1)中，所述亚硝胺化合物包括n-亚硝基二甲胺、n-亚硝基甲基乙基胺、n-亚硝基二乙胺、n-亚硝基二丙胺、n-亚硝基二丁胺、n-甲基-n-亚硝基苯胺、n-亚硝基-n-乙基苯胺、n-亚硝基哌啶、n-亚硝基吡咯烷、n-亚硝基吗啉、n-亚硝基二苯胺、n-亚硝基二苄基胺。

12、优选的，所述气相色谱-质谱联用仪的色谱柱为db-waxetr毛细管色谱柱。

13、优选的，所述气相色谱-质谱联用仪的升温程序为：50℃进样保持1min，以10℃/min升温至160℃保持1min，以40℃/min升温至250℃保持7.25min。

14、优选的，所述气相色谱-质谱联用仪的载气为氦气，采用恒流模式，载气流量为1.2ml/min。

15、优选的，所述气相色谱-质谱联用仪的进样口温度为250℃，传输线温度为260℃，进样体积为1μl，采用不分流进样模式。

16、优选的，所述气相色谱-质谱联用仪的质谱条件为：离子源为ei源，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃，em电压为70ev，溶剂延迟为5min，碰撞气为氮气，扫描模式为dmrm模式。

17、优选的，所述溶剂选自二氯甲烷。

18、优选的，所述标准工作曲线如下：

19、ndma：y＝11349x-299，相关系数为0.999；

20、nmea：y＝10050x+154，相关系数为0.999；

21、ndea：y＝5890x+22.3，相关系数为0.998；

22、ndpa：y＝7372x+107，相关系数为0.999；

23、ndba：y＝6280x+436，相关系数为0.999；

24、nmpha：y＝83099x+5291，相关系数为0.999；

25、nepha：y＝27340x+2033，相关系数为0.999；

26、npip：y＝8437x+339，相关系数为0.999；

27、npyr：y＝4269x+93.8，相关系数为0.999；

28、nmor：y＝7167x+283，相关系数为0.999；

29、ndpha：y＝33230x+1905，相关系数为0.999；

30、ndbza：y＝3778x+428，相关系数为0.999。

31、优选的，所述亚硝胺化合物的检测限为0.3～0.6μg/kg，所述亚硝胺化合物的定量限为1.0～2.0μg/kg。

32、(三)有益效果

33、本发明提供了一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法。具备以下有益效果：

34、(1)本方案提供的一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，通过采用气相色谱-质谱联用仪对感冒药中的亚硝胺类化合物进行检测，检测精度高，速度快，结果准确，有效降低假阳性。

35、(2)本方案提供的一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，取样量少，有机试剂使用种类少，前处理简单，重现性高。

36、(3)本方案提供的一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，在0.2～4.0ng·ml-1范围内，可对12中亚硝胺类化合物进行定量测定，12中亚硝胺类化合物的离子对峰面积与浓度线性关系良好，相关系数均大于0.99，本申请的检测方法检出限为0.3～0.6μg/kg，定量限为1.0～2.0μg/kg，对感冒药进行加标回收试验，平均加标回收率为81～102％，测定结果的相对标准偏差为1.7～4.9％(n＝6)。

技术特征：

1.一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述亚硝胺化合物包括n-亚硝基二甲胺、n-亚硝基甲基乙基胺、n-亚硝基二乙胺、n-亚硝基二丙胺、n-亚硝基二丁胺、n-甲基-n-亚硝基苯胺、n-亚硝基-n-乙基苯胺、n-亚硝基哌啶、n-亚硝基吡咯烷、n-亚硝基吗啉、n-亚硝基二苯胺、n-亚硝基二苄基胺。

3.根据权利要求1所述的一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于：所述气相色谱-质谱联用仪的色谱柱为db-waxetr毛细管色谱柱。

4.根据权利要求1所述的一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于：所述气相色谱-质谱联用仪的升温程序为：50℃进样保持1min，以10℃/min升温至160℃保持1min，以40℃/min升温至250℃保持7.25min。

5.根据权利要求1所述的一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于：所述气相色谱-质谱联用仪的载气为氦气，采用恒流模式，载气流量为1.2ml/min。

6.根据权利要求1所述的一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于：所述气相色谱-质谱联用仪的进样口温度为250℃，传输线温度为260℃，进样体积为1μl，采用不分流进样模式。

7.根据权利要求1所述的一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于：所述气相色谱-质谱联用仪的质谱条件为：离子源为ei源，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃，em电压为70ev，溶剂延迟为5min，碰撞气为氮气，扫描模式为dmrm模式。

8.根据权利要求7所述的一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于：所述溶剂选自二氯甲烷。

9.根据权利要求1所述的一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于：所述标准工作曲线如下：

10.根据权利要求1所述的一种基于气相色谱-串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于：所述亚硝胺化合物的检测限为0.3～0.6μg/kg，所述亚硝胺化合物的定量限为1.0～2.0μg/kg。

技术总结
本发明提供一种基于气相色谱‑串联质谱法测定感冒药中亚硝胺类化合物的检测方法。检测方法包括以下步骤：(1)标准储备液的制备；(2)标准系列储备液的制备；(3)将标准系列储备液注入气相色谱‑质谱联用仪进行检测，获取相应的亚硝胺化合物的标准质量色谱图，以亚硝胺化合物的定量离子对峰面积为纵坐标，以标准系列储备液中亚硝胺化合物的浓度为横坐标，得到标准工作曲线；(4)样本提取；(5)将净化样本注入气相色谱‑质谱联用仪中获取净化样本质量色谱图，若净化样本的质量色谱图中存在与标准质量色谱图对应的色谱峰，带入标准工作曲线中，获取净化样本中的亚硝胺化合物的种类及含量。本发明的检测方法精度高，速度快，结果准确。

技术研发人员：吴红苗,杜赛,高何刚
受保护的技术使用者：绍兴市疾病预防控制中心
技术研发日：
技术公布日：2025/1/2