一种提高麻痹性贝类毒素单克隆抗体耐酸性的修饰方法与流程

本发明属于生物，具体涉及一种提高麻痹性贝类毒素单克隆抗体耐酸性的修饰方法。

背景技术：

1、麻痹性贝类毒素（psp）是一类由特定贝类产生的剧毒化合物，其检测对于确保食品安全至关重要。在开发针对麻痹性贝类毒素的免疫检测试剂盒过程中，一个关键的技术挑战在于毒素的提取过程。由于麻痹性贝类毒素通常需要酸性条件进行提取，提取液中的酸性成分往往会对后续检测中使用的单克隆抗体造成不利影响。具体来说，麻痹性贝类毒素单克隆抗体在低ph值（即过酸环境）下，其结构中的天门冬氨酸和谷氨酸羧基会发生质子化，导致蛋白质携带大量正电荷。这种电荷状态会引发静电排斥作用，进而降低蛋白质的稳定性，使其更容易发生变性，最终影响抗体与抗原的结合能力，甚至导致抗体完全失活。

2、传统上，为了克服这一问题，研究人员尝试了多种方法，但往往效果有限，无法满足实际应用中对抗体稳定性和活性的高要求。因此，寻找一种能够有效提高麻痹性贝类毒素单克隆抗体耐酸性的方法，成为提升免疫检测试剂盒性能和可靠性的关键。

3、近年来，抗体修饰技术取得了显著进展，为改善抗体的理化性质和生物活性提供了新的途径。其中，通过特定的化学修饰手段改变抗体表面的电荷状态，进而提高其在不同环境条件下的稳定性，已成为研究热点。而现有技术中并无采用抗体修饰技术提高麻痹性贝类毒素单克隆抗体耐酸性的相关记载。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种提高麻痹性贝类毒素单克隆抗体耐酸性的修饰方法，其有效提高了麻痹性贝类毒素单克隆抗体在低ph环境下的稳定性。

2、本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

3、本发明提供了一种提高麻痹性贝类毒素单克隆抗体耐酸性的修饰方法，包括以下步骤：

4、（1）将麻痹性贝类毒素单克隆抗体加入含有1-羟基苯并三唑的dmf溶液中；

5、（2）加入偶联试剂及β-氨基乙磺酸水溶液，搅拌反应；

6、（3）再加入偶联试剂，继续反应；

7、（4）反应完成后，在磷酸盐缓冲溶液中离心透析，即得阴离子化的麻痹性贝类毒素抗体。

8、进一步的，在步骤（1）中，所述1-羟基苯并三唑的浓度为50-500 mmol。

9、进一步的，在步骤（2）中，所述偶联试剂为10-30mmol的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，所述β-氨基乙磺酸水溶液的浓度为10-30mmol，ph值为4-7。

10、进一步的，在步骤（3）中，所述偶联试剂为28mmol的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。

11、进一步的，在步骤（4）中，所述磷酸盐缓冲溶液的ph为7.0。

12、本发明还提供了一种利用所述的修饰方法所制得的阴离子化的麻痹性贝类毒素抗体。

13、本发明还提供了一种所述的阴离子化的麻痹性贝类毒素抗体在制备免疫检测试剂盒中的应用，所述阴离子化的麻痹性贝类毒素抗体能够提高所述免疫检测试剂盒的稳定性。

14、有益效果

15、本发明通过磺酸基修饰羧基的方法，有效提高了麻痹性贝类毒素单克隆抗体在低ph环境下的稳定性。这解决了在酸提取麻痹性贝类毒素过程中，酸对抗体稳定性造成的不良影响。修饰后的抗体在ph6-7的范围内保持了良好的活性，尽管在ph5以下抗体的活性有所损失，但在整个实验ph范围内，修饰后的抗体活力保持均优于未修饰的抗体。特别是在ph6.0时，修饰后的抗体活力较ph7.0时下降较少，显示出较强的耐酸性。由于麻痹性贝类毒素需要酸提取，而修饰后的抗体具有更好的耐酸性，因此可以应用于开发更稳定、更可靠的免疫检测试剂盒，提高检测结果的准确性和可靠性。该修饰方法不仅适用于麻痹性贝类毒素单克隆抗体，还可以为其他需要在酸性环境下使用的抗体提供有益的参考和借鉴，从而拓宽抗体的应用范围。

技术特征：

1.一种提高麻痹性贝类毒素单克隆抗体耐酸性的修饰方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的提高麻痹性贝类毒素单克隆抗体耐酸性的修饰方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述1-羟基苯并三唑的浓度为50-500 mmol。

3.如权利要求1所述的提高麻痹性贝类毒素单克隆抗体耐酸性的修饰方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述偶联试剂为10-30mmol的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，所述β-氨基乙磺酸水溶液的浓度为10-30mmol，ph值为4-7。

4.如权利要求1所述的提高麻痹性贝类毒素单克隆抗体耐酸性的修饰方法，其特征在于，在步骤（3）中，所述偶联试剂为28mmol的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。

5.如权利要求1所述的提高麻痹性贝类毒素单克隆抗体耐酸性的修饰方法，其特征在于，在步骤（4）中，所述磷酸盐缓冲溶液的ph为7.0。

6.一种利用权利要求1-5任一项所述的修饰方法所制得的阴离子化的麻痹性贝类毒素抗体。

7.如权利要求6所述的阴离子化的麻痹性贝类毒素抗体在制备免疫检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述阴离子化的麻痹性贝类毒素抗体能够提高所述免疫检测试剂盒的稳定性。

技术总结
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高麻痹性贝类毒素单克隆抗体耐酸性的修饰方法，包括以下步骤：将麻痹性贝类毒素单克隆抗体加入含有1‑羟基苯并三唑的DMF溶液中；加入偶联试剂及β‑氨基乙磺酸水溶液，搅拌反应；再加入偶联试剂，继续反应；反应完成后，在磷酸盐缓冲溶液中离心透析，即得阴离子化的麻痹性贝类毒素抗体。本发明通过磺酸基修饰羧基的方法，有效提高了麻痹性贝类毒素单克隆抗体在低pH环境下的稳定性。这解决了在酸提取麻痹性贝类毒素过程中，酸对抗体稳定性造成的不良影响。

技术研发人员：苏捷,李聪,黄奕雯,陈火荣,朱志煌,张涵
受保护的技术使用者：福建省水产研究所（福建水产病害防治中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/12/19