一种基于纳米酶信号放大的检测装置及其使用方法和应用

本发明属于蛋白检测，具体涉及一种基于纳米酶信号放大的检测装置及其使用方法和应用。

背景技术：

1、泪液作为体液之一，含有丰富的生物分子信息，如蛋白质、核酸和代谢产物。这些成分的变化可以反映眼部疾病以及一些系统性疾病的生物学变化和病理机制。通过对泪液中的生物标志物进行检测，对于疾病的及时治疗和控制具有重要意义。尽管泪液蛋白对眼部疾病的诊断和检测意义重大，但由于泪液量有限，收集足量且保质的泪液蛋白仍面临着挑战。目前，国内收集泪液蛋白用于疾病诊断和蛋白组学分析多采用毛细吸管和schirmer试纸在下睑结膜囊泪阜处收集泪液标本，但操作困难且对泪膜刺激较大。除了采样方面的困难，对采集泪液的洗脱也会对结果产生影响。

技术实现思路

1、针对现有技术中收集泪液标本存在的操作困难、对泪膜刺激较大以及采集泪液的洗脱也会对结果产生影响的问题，本发明提供了一种基于纳米酶信号放大的检测装置及其使用方法和应用。

2、本发明采用的技术方案如下：

3、一种基于纳米酶信号放大的检测装置，包括可置入眼部内的基体，所述基体上设置有可容纳泪液的微腔，所述微腔内设置有捕获平台；

4、所述捕获平台包括透明薄膜，所述透明薄膜上连接有可与待测物特异性结合的捕获抗体；

5、还包括检测探针，所述检测探针的制备原料包括具有类过氧化物酶活性的纳米酶和可对待测物进行特异性检测的检测抗体。

6、采用该技术方案后，本发明制作了可置于眼内的基体，并在基体上设置带有捕获平台的微腔，当将基体带入眼内后泪液会自动进入到微腔内与捕获平台上的捕获抗体接触并结合，然后再利用检测探针与捕获抗体上的待测物结合，然后利用检测探针的显色反应即可检测出泪液中是否含有待测物及可以对待测物的含量进行检测。因此采用本发明提供的检测装置实现了对泪液中待测物的无创、稳定和精准检测。

7、作为优选，所述透明薄膜为表面具有活性酯的透明薄膜。

8、采用该技术方案后，具有活性酯的透明薄膜可以通过表面的活性酯与抗体上自带的氨基结合，从而将透明薄膜与捕获抗体连接。

9、作为优选，所述透明薄膜为聚乙烯膜、聚氨酯膜、聚丙烯膜、聚碳酸酯膜中的一种。

10、采用该技术方案后，聚乙烯膜、聚氨酯膜、聚丙烯膜、聚碳酸酯膜结构稳定，易进行表面改性的特性。

11、作为优选，所述检测探针由具有类过氧化物酶活性的纳米酶和可对待测物进行特异性检测的检测抗体偶联得到。

12、作为优选，所述纳米酶为一锅法合成的au2pt纳米酶。

13、采用该技术方案后，au2pt纳米酶活性好，催化效率高。而采用一锅法的合成方法较为简单。

14、作为优选，纳米酶的粒径为10-500nm。

15、采用该技术方案后，粒径越小，比表面积越大，活性越高，因此纳米酶的粒径选择为10-500nm。

16、作为优选，所述微腔设置有数个，每个所述微腔内均设置有捕获平台。

17、采用该技术方案后，微腔设置有数个，增大捕获效率，避免偶然性，提高检测精准度。

18、作为优选，所述基体为接触镜。

19、采用该技术方案后，利用可放入眼内的接触镜作为基体，降低引起使用者的反抗情绪的机率。

20、一种基于纳米酶信号放大的检测装置的使用方法，包括以下步骤：

21、步骤a：将制备好的基体置于眼眶内，使基体与眼球接触；

22、步骤b：泪液进入到基体上的微腔内，通过微腔内的捕获平台捕获待测物；

23、步骤c：将基体从眼眶中取出，去掉基体上多余的液体，并对基体进行洗涤；

24、步骤d：向捕获平台上加入检测探针并进行孵育；

25、步骤e：孵育结束后进行洗涤；

26、步骤f：向捕获平台上加入纳米酶底物显色液进行显色反应；

27、步骤g：显色反应结束后加入显色终止液。

28、一种基于纳米酶信号放大的检测装置在检测人体泪液蛋白方面的应用。

29、综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

30、本发明制作了可置于眼内的基体，并在基体上设置带有捕获平台的微腔，当将基体带入眼内后泪液会自动进入到微腔内与捕获平台上的捕获抗体接触并结合，然后再利用检测探针与捕获抗体上的待测物结合，然后利用检测探针的显色反应即可检测出泪液中是否含有待测物及可以对待测物的含量进行检测。因此采用本发明提供的检测装置实现了对泪液中待测物的无创、稳定和精准检测。同时本发明也可以在各个微腔内放置用于捕获不同待测物的捕获平台，实现同时对多种待测物进行检测，提高检测效率。

技术特征：

1.一种基于纳米酶信号放大的检测装置，其特征在于：包括可置入眼部内的基体，所述基体上设置有可容纳泪液的微腔，所述微腔内设置有捕获平台；

2.根据权利要求1所述的一种基于纳米酶信号放大的检测装置，其特征在于：所述透明薄膜为表面具有活性酯的透明薄膜。

3.根据权利要求2所述的一种基于纳米酶信号放大的检测装置，其特征在于：所述透明薄膜为聚乙烯膜、聚氨酯膜、聚丙烯膜、聚碳酸酯膜中的一种。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种基于纳米酶信号放大的检测装置，其特征在于：所述检测探针由具有类过氧化物酶活性的纳米酶和可对待测物进行特异性检测的检测抗体偶联得到。

5.根据权利要求1-3任一项所述的一种基于纳米酶信号放大的检测装置，其特征在于：所述纳米酶为一锅法合成的au2pt纳米酶。

6.根据权利要求4所述的一种基于纳米酶信号放大的检测装置，其特征在于：纳米酶的粒径为10-500nm。

7.根据权利要求1-3任一项所述的基于纳米酶信号放大的检测装置，其特征在于：所述微腔设置有数个，每个所述微腔内均设置有捕获平台。

8.根据权利要求1-3任一项所述的基于纳米酶信号放大的检测装置，其特征在于：所述基体为接触镜。

9.一种如权利要求1-8任一项所述的基于纳米酶信号放大的检测装置的使用方法，其特征在于：包括以下步骤：

10.一种如权利要求1-8任一项所述的基于纳米酶信号放大的检测装置在检测人体泪液蛋白方面的应用。

技术总结
本发明公开了一种基于纳米酶信号放大的检测装置及其使用方法和应用，属于蛋白检测技术领域。本发明解决了收集泪液标本存在的操作困难、对泪膜刺激较大以及采集泪液的洗脱也会对结果产生影响的问题。本发明制备了具有微腔的基体，并对用于嵌入基体的透明薄膜进行表面改性，并固定捕获抗体以制备捕获平台，并将改性后的透明薄膜嵌入其中；将具有类过氧化物酶活性的纳米酶通过羧基活化的方式与检测抗体偶联，制备了纳米酶增强的检测探针；将所述检测探针加至与待测物接触过的捕获平台孵育后洗涤；然后加入供氢底物和过氧化物进行显色反应，待充分反应后加入终止液终止显色反应。本发明具有无创、稳定和精准检测泪液中蛋白的性能。

技术研发人员：白惟依,庄伟华,胡文闯,马可,李晴,胡杰,唐建超
受保护的技术使用者：四川大学华西医院
技术研发日：
技术公布日：2024/12/12