一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法与流程

本发明属于生物技术和动物饲养，具体涉及一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法。

背景技术：

1、尽管在林麝粪便生理参数的测定方面已有研究，但这些研究仅限于生理状态的测定及评价，尚未应用于种群种质质量的鉴定及遴选。林麝的种质质量是其优良性状的集合，涉及行为、形态、生理免疫等多个层面，而适应特定环境的能力是种质质量的重要组成部分。自2018年建立的西藏边坝县林麝养殖基地（海拔3700米），从低海拔林麝养殖场调运林麝总计170只，首次100只，死亡70只，第二次调运70只，死亡7只，总计折损77只，引种调运的高海拔林麝群体初步适应过程的死亡率为45.3%，存活数（不含新生）93只，饲养林麝种群经历高寒缺氧环境并建立初步适应的过程产生了近半的折损，因此改变了高海拔林麝群体的种质结构，形成了稳定种群，但林麝对高原环境的适应能力尚未得到充分研究。

2、林麝具有胆怯、机警、高生理应激的生物学特征，对环境变化极为敏感，高海拔缺氧和寒冷环境对其构成巨大挑战。目前，缺乏从生理途径鉴定林麝适应能力的研究，而简单的行为观测和形态特征无法准确反映林麝对高原环境的适应状态。

技术实现思路

1、本发明旨在提供一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，通过采用非损伤性的新鲜粪便取样方法，测定林麝粪便中的皮质醇、甲状腺素和免疫球蛋白a三项生理免疫参数，实现了对高原饲养林麝种质质量的科学鉴定及遴选。

2、为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

3、一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，包括如下步骤：

4、s1、采集新鲜粪便：在高海拔和低海拔的林麝养殖基地采集林麝的新鲜粪便；

5、s2、提取粪便激素和免疫球蛋白a：提取粪便中的皮质醇、甲状腺素和免疫球蛋白a；

6、s3、测定浓度：采用酶联免疫吸附法测定粪便中皮质醇、甲状腺素和免疫球蛋白a的浓度，同时测定粪便样品含水量，根据含水量将浓度结果转化为每克粪便中所含皮质醇、甲状腺素和免疫球蛋白a含量；

7、s4、分组比较：将高海拔和低海拔饲养林麝的皮质醇、甲状腺素和免疫球蛋白a三项生理免疫参数分为高含量组、中等含量组、低含量组，并计算各组所占比例；

8、s5、鉴定：分别基于皮质醇、甲状腺素和免疫球蛋白a的含量，遴选出低敏感、高能量代谢和高肠道免疫力林麝个体；

9、s6、遴选出适于高原的林麝个体。

10、优选的，步骤s1中，在高海拔和低海拔的林麝养殖基地采集林麝的新鲜粪便，分别采集55只和34只，每两天采集一次，共采集10次，在-20℃条件下保存。

11、优选的，步骤s2中，所述提取皮质醇和甲状腺素的提取液为浓度为90%的乙醇溶液，所述免疫球蛋白a提取液为1×pbs溶液。

12、优选的，步骤s4中，采用迭代法计算每只林麝粪便中皮质醇、甲状腺素和免疫球蛋白a的含量基值，粪便中皮质醇、甲状腺素和免疫球蛋白a三项生理免疫参数的测定值表示为平均值±标准误。

13、优选的，步骤s5中，基于皮质醇含量，遴选出低敏感的林麝个体，包括如下步骤：

14、a1、采用独立样本t检验方法校验高海拔和低海拔林麝的皮质醇总体水平的差异性；

15、a2、采用单因素方差分析方法校验高海拔和低海拔林麝皮质醇的高含量组、中等含量组、低含量组之间的差异性；

16、a3、采用卡方检验高海拔和低海拔林麝皮质醇的高含量组、中等含量组、低含量组所占比例的差异性；

17、a4、在低海拔饲养林麝群体，以中等含量和低含量皮质醇平均值±标准误为鉴定标准，遴选出低敏感的林麝个体，分别编号为hc1、hc2、hc3…hcn，hc代表中低皮质醇水平，n代表某一个体。

18、优选的，步骤s5中，基于甲状腺素含量，遴选出高能量代谢的林麝个体，包括如下步骤：

19、b1、采用独立样本t检验方法校验高海拔和低海拔林麝的甲状腺素总体水平的差异性；

20、b2、采用单因素方差分析方法校验高海拔和低海拔林麝甲状腺素的高含量组、中等含量组、低含量组之间的差异性；

21、b3、采用卡方检验高海拔和低海拔林麝甲状腺素的高含量组、中等含量组、低含量组所占比例的差异性；

22、b4、在低海拔饲养林麝群体，以高含量和中等含量甲状腺素平均值±标准误为鉴定标准，遴选出高能量代谢的林麝个体，分别编号为ht1、ht2、ht3…htn，ht代表高中甲状腺素水平，n代表某一个体。

23、优选的，步骤s5中，基于免疫球蛋白a含量，遴选出高肠道免疫力的林麝个体，包括如下步骤：

24、c1、采用独立样本t检验方法校验高海拔和低海拔林麝的免疫球蛋白a总体水平的差异性；

25、c2、采用单因素方差分析方法校验高海拔和低海拔林麝免疫球蛋白a的高含量组、中等含量组、低含量组之间的差异性；

26、c3、采用卡方检验高海拔和低海拔林麝免疫球蛋白a的高含量组、中等含量组、低含量组所占比例的差异性；

27、c4、在低海拔饲养林麝群体，以高含量和中等含量免疫球蛋白a平均值±标准误为鉴定标准，遴选出高肠道免疫力的林麝个体，分别编号为ha1、ha2、ha3…han，ha代表高中免疫球蛋白a水平，n代表某一个体。

28、优选的，步骤s6中，遴选出适于高原的林麝个体，方法如下：适于高原的林麝个体=（hc1、hc2…hcn）∩（ht1、ht2…htn）∩（ha1、ha2…han），hc代表中低皮质醇水平，ht代表高中甲状腺素水平，ha代表高中免疫球蛋白a水平，n代表某一个体。

29、与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果：

30、本发明公开了一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，通过采用非损伤性的新鲜粪便取样方法，测定粪便中的皮质醇、甲状腺素和免疫球蛋白a三项生理免疫参数，科学鉴定及遴选高原饲养林麝种质质量。这种方法避免了对林麝造成生理性损伤，提高了样本采集的成功率和效率，使评估过程更加客观和公正。通过比较高原与低海拔饲养林麝的生理免疫特征，本发明量化评估了高原饲养林麝的生理状态，发现高海拔饲养林麝的皮质醇和甲状腺素水平显著高于低海拔饲养林麝，而免疫球蛋白a水平差异不显著，为遴选适应高原环境的林麝个体提供了科学依据。

31、本发明的应用显著降低了从低海拔区域调运至高海拔区域的林麝死亡率，减少了经济损失，并促进了高原林麝种群的稳定增长。此外，本研究首次从生理免疫参数途径建立鉴定林麝种质质量及遴选适宜高原地区饲养林麝种群的方法，为高原饲养林麝的科学管护和产业发展提供了科学依据，具有重要的实际应用价值和广阔的市场前景。

32、下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

技术特征：

1.一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，其特征在于，步骤s1中，在高海拔和低海拔的林麝养殖基地采集林麝的新鲜粪便，分别采集55只和34只，每两天采集一次，共采集10次，在-20℃条件下保存。

3.根据权利要求1所述的一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，其特征在于，步骤s2中，所述提取皮质醇和甲状腺素的提取液为浓度为90%的乙醇溶液，所述免疫球蛋白a提取液为1×pbs溶液。

4.根据权利要求1所述的一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，其特征在于，步骤s4中，采用迭代法计算每只林麝粪便中皮质醇、甲状腺素和免疫球蛋白a的含量基值，粪便中皮质醇、甲状腺素和免疫球蛋白a三项生理免疫参数的测定值表示为平均值±标准误。

5.根据权利要求1所述的一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，其特征在于，步骤s5中，基于皮质醇含量，遴选出低敏感的林麝个体，包括如下步骤：

6.根据权利要求1所述的一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，其特征在于，步骤s5中，基于甲状腺素含量，遴选出高能量代谢的林麝个体，包括如下步骤：

7.根据权利要求1所述的一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，其特征在于，步骤s5中，基于免疫球蛋白a含量，遴选出高肠道免疫力的林麝个体，包括如下步骤：

8.根据权利要求1所述的一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，其特征在于，步骤s6中，遴选出适于高原的林麝个体，方法如下：适于高原的林麝个体=（hc1、hc2…hcn）∩（ht1、ht2…htn）∩（ha1、ha2…han），hc代表中低皮质醇水平，ht代表高中甲状腺素水平，ha代表高中免疫球蛋白a水平，n代表某一个体。

技术总结
本发明公开了一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，属于生物技术和动物饲养技术领域。该方法包括如下步骤：采集林麝新鲜粪便；提取粪便激素和免疫球蛋白A；测定粪便激素和免疫球蛋白A的浓度；将三项生理免疫参数分为高含量组、中等含量组、低含量组，并计算各组所占比例；遴选出低敏感、高能量代谢和高肠道免疫力林麝个体；遴选出适于高原的林麝个体。本发明公开了一种适于高原饲养林麝种质质量鉴定及遴选方法，通过采用非损伤性的新鲜粪便取样方法，测定林麝粪便中三项生理免疫参数，实现了对高原饲养林麝种质质量的科学鉴定及遴选。

技术研发人员：王一晨,许连城,陈晓毅,蓝贤娜,张浩楠,李亦欣,骆正伟,刘梓君,胡德夫
受保护的技术使用者：漳州片仔癀药业股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/30