基于顶空固相微萃取和盐析结合的烟草挥发物检测方法与流程

本发明属于烟草检测，涉及一种基于顶空固相微萃取和盐析结合的烟草挥发物检测方法。

背景技术：

1、烟草制品的香气均来自烟叶，尤其是经过两次或多次发酵后卷制而成雪茄烟叶。香气成为评价其感官的重要指标，品质好的雪茄基本上没有烟的味道，反而会呈现出甜香、坚果香、咖啡香等特点。因此对烟叶中挥发物（或香气物质）的检测显得尤为重要。

2、雪茄烟叶香气萃取报导多数的还是利用有机溶剂萃取的方法，如cn102565233a中公开了一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法，其采用甲醇-氯仿混合溶剂超声提取烟粉中挥发性的物质，这种方法使用的有机溶剂毒性较大、前处理方式较复杂、操作不便且成本较高。

技术实现思路

1、本发明提供了一种基于顶空固相微萃取（hs-spme）和盐析结合的烟草挥发物检测方法，其操作简单快速、成本低，采用hs-spme方法进行提取，不引入有机溶剂干扰、检测效率及灵敏度高。

2、为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：一种基于顶空固相微萃取和盐析结合的烟草挥发物检测方法，包括以下步骤：

3、s1、将样品烟叶抽去主脉，干燥后制成粉末；

4、s2、将烟叶粉末至于顶空瓶，加入内标化合物，随后加入沸腾的饱和盐溶液，插入提前老化的微萃取纤维，水浴萃取吸附，萃取完成后将微萃取纤维插入gc-ms注射口解析附；

5、s3、采用gc-ms进行挥发性物质的定性及定量处理。

6、可选地，所述的烟草为烟草鲜叶或烟草制品。烟草制品优选雪茄烟或香烟。

7、可选地，s1中粉末如果不立刻使用，需要放在冰箱中储存，冰箱的温度为-20~-80℃。其中原料为鲜叶时控制在-80℃，烟叶制品储存温度控制在-20℃。

8、可选地，所述内标化合物为环己酮。

9、可选地，所述盐溶液为饱和盐溶液，盐具体为nacl、cuso4或nahso3。

10、可选地，所述盐溶液为饱和nahso3溶液。

11、可选地，微萃取纤维使用前，微萃取纤维使用前，将其在250℃老化处理30min；水浴萃取吸附时温度60-70℃，时间为40-55 min；解析附温度为230℃，时间为3-5 min。

12、可选地，gc-ms检测时，gc条件：进样口温度230℃，载气为高纯氦气，柱流量1.0ml/min，柱箱40℃，不分流进样；升温程序60℃保持2 min，随后以4℃/min升至260℃，260℃保持5 min。

13、可选地，gc-ms检测时，ms条件：电子轰击离子源，电子能量70 ev，离子源温度230℃，质量扫描范围35-400 m/z。

14、本发明还涉及所述检测方法在烟草香气提取中的应用。

15、本发明具有以下有益效果：

16、1、本发明在烟草中挥发物提取时，利用顶空固相微萃取，同时结合盐析技术，通过加入沸腾的饱和盐溶液，增加水相的密度与极性，起到增加精油析出的作用，提高萃取效率，此外，选择nahso3溶液时，由于nahso3有很好的抑制酶活性的作用，可以显著抑制鲜叶香气提取过程中酶活性，保证香气不在提取过程中发生转化，能够缩短浸提时间、增加所能检测到的挥发物种类与浓度。该提取不使用有机溶剂，挥发性物质的测定时不会带来有机溶剂的干扰，且微萃取纤维可重复利用100-120次，即意味着微萃取纤维可以萃取100-120个样品，大大节约萃取的成本，操作简便、安全性高。

17、2、本发明提供的方法对烟叶中挥发物检测全面，使用gc-ms技术，可以非靶向的检测和分析烟叶中大部分挥发性物质，gc-ms检测灵敏度高，对于某些含量少但阈值低的重要香气物质也能有较好的响应，尤其适用于雪茄烟叶中挥发性物质的测定，也可用于香烟烟丝或其他烟草的挥发性物质检测。

技术特征：

1.一种基于顶空固相微萃取和盐析结合的烟草挥发物检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的烟草为烟草鲜叶或烟草制品。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：s1中粉末备用时储存在冰箱中，冰箱的温度为-20-80℃。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述内标化合物为环己酮。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述盐溶液中的盐为nacl、cuso4或nahso3。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：所述盐溶液为nahso3。

7. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：微萃取纤维使用前，将其在250℃老化处理30min；水浴萃取吸附时温度60-70℃，时间为40-55 min；解析附温度为230℃，时间为3-5 min。

8. 根据权利要求1~7任意一项所述的检测方法，其特征在于，gc-ms检测时，gc条件：进样口温度230℃，载气为高纯氦气，柱流量1.0 ml/min，柱箱40℃，不分流进样；升温程序60℃保持2 min，随后以4℃/min升至260℃，260℃保持5 min。

9. 根据权利要求1~7任意一项所述的检测方法，其特征在于，gc-ms检测时，ms条件：电子轰击离子源，电子能量70 ev，离子源温度230℃，质量扫描范围35-400 m/z。

10.权利要求1~9任意一项所述检测方法在烟草香气提取中的应用。

技术总结
本发明属于烟草检测技术领域，具体公开了一种基于顶空固相微萃取和盐析结合的烟草挥发物检测方法。包括以下步骤：S1、将样品烟叶抽去主脉，干燥后制成粉末，密封后在冰箱储存备用；S2、将烟叶粉末至于顶空瓶，加入内标化合物，随后加入沸腾盐溶液，插入提前老化的微萃取纤维，水浴萃取吸附，萃取完成后将微萃取纤维插入GC‑MS注射口解析附；S3、采用GC‑MS进行挥发性物质的定性及定量处理。其采用HS‑SPME方法进行提取，不引入有机溶剂干扰，操作简单快速、成本低，检测灵敏度高，检测效率高。

技术研发人员：虞昕磊,袁跃斌,李志豪,王祥勇,韩志彪,刘刚,周敬涛,李浩,张华安,徐原,高宁,倪德江,王大爱,赵刚,田明品
受保护的技术使用者：湖北省烟草公司宜昌市公司
技术研发日：
技术公布日：2025/3/20