一种组织纤维化的检测方法

本发明属于生物医学检测，具体涉及一种组织纤维化的检测方法。

背景技术：

1、纤维化可发生在多种器官中，其主要病理变化为器官组织内纤维结缔组织的增生和实质细胞的减少。如果这种状况持续进展，可能导致器官结构的破坏、功能减退，甚至衰竭，严重威胁人类健康和生命。纤维化涉及的疾病包括肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化等。成纤维细胞转变为肌成纤维细胞，并表达分泌α-平滑肌肌动蛋白(α-sma)，这在组织中沉积是评估组织纤维化的一个重要指标。

2、目前，评估组织纤维化的主要方法是通过组织学染色分析，包括masson染色、天狼星红染色、免疫组织化学和免疫荧光染色等，用以评估α-sma的表达。这些方法能够对组织进行形态学分析，并对纤维化程度进行半定量分析，但无法实现精确定量分析。α-sma的表达检测可以通过免疫组化、免疫荧光和免疫印迹等方法进行半定量分析，而精确定量分析则需要通过酶联免。

技术实现思路

1、本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种组织纤维化的检测方法。

2、本发明的另一目的在于提供四面体dna纳米材料在制备组织纤维化检测试剂盒中的应用。

3、本发明的技术方案如下：

4、一种组织纤维化的检测方法，包括如下步骤：

5、(1)用经明胶溶液预处理的裸金电极捕获待检测的样品；

6、(2)加入抗α-sma的一抗与步骤(1)中捕获的待检测的样品中的α-sma反应；

7、(3)再加入抗上述一抗的二抗与上述待检测细胞上结合的一抗进行反应，该二抗具有生物素标记；

8、(4)加入链霉亲和素与结合了上述一抗的二抗上的生物素进行反应；

9、(5)加入四面体dna纳米材料和二氯三(1,10-邻二氮杂菲)钌(ii)水合物进行反应，然后进行ecl检测，获得α-sma表达信号，从而对组织纤维化程度进行检测；

10、上述四面体dna纳米材料由如seq id no.01所示的ta、如seq id no.02所示的tb、如seq id no.03的tc和如seq id no.04所示的td通过碱基互补配对杂交自主装而成。

11、在本发明的一个优选实施方案中，所述明胶溶液的浓度为0.1％。

12、在本发明的一个优选实施方案中，所述样品为经多聚甲醛固定的细胞或石蜡包埋组织切片。

13、在本发明的一个优选实施方案中，所述ta、tb、tc和td的摩尔比为1:1:1:1。

14、在本发明的一个优选实施方案中，所述四面体dna纳米材料和二氯三(1,10-邻二氮杂菲)钌(ii)水合物的摩尔比为2:1。

15、四面体dna纳米材料在制备组织纤维化检测试剂盒中的应用，所述四面体dna纳米材料由如seq id no.01所示的ta、如seq id no.02所示的tb、如seq id no.03的tc和如seqid no.04所示的td通过碱基互补配对杂交自主装而成。

16、在本发明的一个优选实施方案中，所述ta、tb、tc和td的摩尔比为1:1:1:1。

17、在本发明的一个优选实施方案中，所述组织纤维化检测试剂盒中还包括裸金电极、明胶溶液、抗α-sma的一抗、生物素标记的抗该一抗的二抗、链霉亲和素和二氯三(1,10-邻二氮杂菲)钌(ii)水合物，其采用的检测方法为权利要求1至5中任一项所述的检测方法。

18、进一步优选的，所述明胶溶液的浓度为0.1％。

19、在本发明的一个优选实施方案中，所述组织纤维化检测试剂盒的检测对象为为经多聚甲醛固定的细胞或石蜡包埋组织切片。

20、本发明的有益效果是：

21、1、本发明能够在不破坏组织和细胞结构的情况下，直接检测组织细胞中α-sma的表达，无需匀浆细胞和组织。

22、2、本发明能够对细胞和组织的α-sma表达进行精确定量，从而评估组织纤维化的程度。其结果的准确性与传统的免疫印迹、免疫组织化学染色、免疫荧光染色和masson染色具有良好的一致性，且相较于传统的masson染色和免疫组织化学染色方法，本发明的操作更为简便。

23、3、本发明具有高灵敏度，需要的样本细胞量很少，最少仅需10个细胞即可进行检测和定量，从而使得定量数据更加可靠和精确，为组织纤维化的研究和诊断提供了一种高效、灵敏的新工具。

技术特征：

1.一种组织纤维化的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的一种组织纤维化的检测方法，其特征在于：所述明胶溶液的浓度为0.1％。

3.如权利要求1所述的一种组织纤维化的检测方法，其特征在于：所述样品为经多聚甲醛固定的细胞或石蜡包埋组织切片。

4.如权利要求1所述的一种组织纤维化的检测方法，其特征在于：所述ta、tb、tc和td的摩尔比为1:1:1:1。

5.如权利要求1所述的一种组织纤维化的检测方法，其特征在于：所述四面体dna纳米材料和二氯三(1,10-邻二氮杂菲)钌(ii)水合物的摩尔比为2:1。

6.四面体dna纳米材料在制备组织纤维化检测试剂盒中的应用，其特征在于：所述四面体dna纳米材料由如seq id no.01所示的ta、如seq id no.02所示的tb、如seq id no.03的tc和如seq id no.04所示的td通过碱基互补配对杂交自主装而成。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述ta、tb、tc和td的摩尔比为1:1:1:1。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述组织纤维化检测试剂盒中还包括裸金电极、明胶溶液、抗α-sma的一抗、生物素标记的抗该一抗的二抗、链霉亲和素和二氯三(1,10-邻二氮杂菲)钌(ii)水合物，其采用的检测方法为权利要求1至5中任一项所述的检测方法。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述明胶溶液的浓度为0.1％。

10.如权利要求6至9中任一项所述的应用，其特征在于：所述组织纤维化检测试剂盒的检测对象为为经多聚甲醛固定的细胞或石蜡包埋组织切片。

技术总结
本发明公开了一种组织纤维化的检测方法，包括如下步骤：(1)用经明胶溶液预处理的裸金电极捕获待检测的样品；(2)加入抗α‑SMA的一抗与步骤(1)中捕获的待检测的样品中的α‑SMA反应；(3)再加入抗上述一抗的二抗与上述待检测细胞上结合的一抗进行反应，该二抗具有生物素标记；(4)加入链霉亲和素与结合了上述一抗的二抗上的生物素进行反应；(5)加入四面体DNA纳米材料和二氯三(1,10‑邻二氮杂菲)钌(II)水合物进行反应，然后进行ECL检测，获得α‑SMA表达信号，从而对组织纤维化程度进行检测。本发明能够在不破坏组织和细胞结构的情况下，直接检测组织细胞中α‑SMA的表达，无需匀浆细胞和组织。

技术研发人员：张莹,黄菲,潘晓娴,许艳芳,谢群芳
受保护的技术使用者：福建医科大学附属第一医院
技术研发日：
技术公布日：2025/3/3