一种抗药抗体样本预处理方法与流程

本发明涉及生物检测，尤其涉及一种抗药抗体样本预处理方法。

背景技术：

1、抗药抗体(ada，anti-drugantibody)是指人体免疫系统产生的抗体，针对外源性药物(如生物药物)进行免疫反应。这些抗体可能会影响药物的疗效和安全性，因此对抗药抗体进行检测至关重要。除了开发灵敏度高，特异性强的ada检测方法外；还需要考虑当样品中存在高浓度药物时，抗药抗体是否能被检出。因此在生物分析方法开发过程中提高抗药抗体的药物耐受性是十分必要的，被认为是分析方法开发领域的一个重大挑战。鉴于此，开发一种提高抗药抗体耐药性的全自动酸解离前处理方法具有非常重要的意义。

2、实际样品中若存在大量的游离药物，游离药物可以与抗药抗体结合，从而影响ada的检测，降低ada的检出率；常用的解决方法是利用酸解离的原理，通过对样品进行酸化处理，将游离药物与抗药抗体解离开，从而达到检测ada的目的。

3、中国专利cn117849327a公开了一种用于检测苏金单抗抗药性抗体的样品预处理方法及其应用，通过酸解液对样品进行二次酸解处理，可以有效降低样品中游离il-17a的干扰，解决了游离il-17a影响苏金单抗抗药性抗体检测的问题。

4、但是现有技术中的抗药抗体耐药性还需进一步提升。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种抗药抗体样本预处理方法，能够有效提升抗药抗体的耐药性，优化检测效率。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种抗药抗体样本预处理方法，包括以下步骤：

4、s1、采用生物素标记抗原对磁珠进行包被，得到包被后的磁珠；

5、s2、将包被后的磁珠进行洗涤，得到洗涤后的磁珠；

6、s3、将抗药抗体样本与酸化剂1混合，进行第一酸解处理，得到酸化样本；

7、s4、在所述酸化样本中加入tris-hcl，然后与所述洗涤后的磁珠混合，孵育，得到结合了抗药抗体样本的磁珠；

8、s5、将结合了抗药抗体样本的磁珠与酸化剂2混合，进行第二酸解处理，然后去除磁珠，得到处理后的抗药抗体样本；

9、所述酸化剂1中含有乙酸；

10、所述酸化剂2中含有甘氨酸。

11、优选的，所述酸化剂1中乙酸的终浓度为100～500mm。

12、优选的，所述酸化剂2中甘氨酸的终浓度为0.1～0.5m。

13、优选的，所述步骤s3～s5采用全自动多功能生物配体分离提取仪完成。

14、优选的，所述将包被后的磁珠进行洗涤采用的洗涤剂中含有甘氨酸。

15、优选的，所述第一酸解处理的时间为20～40min。

16、优选的，第二酸解处理的时间为20～40min。

17、优选的，所述步骤s4中孵育的时间为40～80min。

18、本发明还提供了上述抗药抗体样本预处理方法在电化学发光法检测抗药抗体中的应用；

19、优选的，所述抗药抗体为重组人生长激素的抗药抗体。

20、本发明还提供了一种电化学发光法检测抗药抗体的方法，包括以下步骤：

21、采用上述方法对抗药抗体样本进行预处理，得到预处理后的抗药抗体样本；

22、将生物素标记抗原包被至酶标板，进行洗涤、封闭；

23、加入tris-hcl和预处理后的抗药抗体样本，孵育后进行洗涤；

24、加入sulfo-tag标记抗原，孵育后进行洗涤；

25、加入读板液，进行读板，记录ecl值。

26、本发明的有益效果：

27、本发明提供的抗药抗体样本预处理方法结合了特定的酸解步骤，同时利用了磁珠比表面积大、高捕获效率的特点，对抗药抗体样本进行预处理，实现了抗药抗体样本耐药性的有效提升，显著提升了检测效率。

28、本发明提供的抗药抗体样本预处理方法进一步结合采用了全自动多功能生物配体分离提取仪，避免了现有方法存在的回收率低、耐药性差、耗时长的问题，不仅自动化程度更高，还极大的缩短了抗药抗体样本的前处理时间，提高了样本的耐药性及检测效果。

技术特征：

1.一种抗药抗体样本预处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的抗药抗体样本预处理方法，其特征在于，所述酸化剂1中乙酸的终浓度为100～500mm。

3.根据权利要求1所述的抗药抗体样本预处理方法，其特征在于，所述酸化剂2中甘氨酸的终浓度为0.1～0.5m。

4.根据权利要求1～3任一项所述的抗药抗体样本预处理方法，其特征在于，所述步骤s3～s5采用全自动多功能生物配体分离提取仪完成。

5.根据权利要求1所述的抗药抗体样本预处理方法，其特征在于，所述将包被后的磁珠进行洗涤采用的洗涤剂中含有甘氨酸。

6.根据权利要求1所述的抗药抗体样本预处理方法，其特征在于，所述第一酸解处理的时间为20～40min。

7.根据权利要求1所述的抗药抗体样本预处理方法，其特征在于，第二酸解处理的时间为20～40min。

8.根据权利要求1所述的抗药抗体样本预处理方法，其特征在于，所述步骤s4中孵育的时间为40～80min。

9.权利要求1～8任一项所述的抗药抗体样本预处理方法在电化学发光法检测抗药抗体中的应用；

10.一种电化学发光法检测抗药抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

技术总结
本发明提供了一种抗药抗体样本预处理方法，属于生物检测技术领域。本发明提供的抗药抗体样本预处理方法结合了特定的酸解步骤，同时利用了磁珠比表面积大、高捕获效率的特点，对抗药抗体样本进行预处理，实现了抗药抗体样本耐药性的有效提升，显著提升了检测效率。本发明提供的抗药抗体样本预处理方法进一步结合采用了全自动多功能生物配体分离提取仪，避免了现有方法存在的回收率低、耐药性差、耗时长的问题，不仅自动化程度更高，还极大的缩短了抗药抗体样本的前处理时间，提高了样本的耐药性及检测效果。

技术研发人员：岑小波,赖力,肖媛媛,马贵东
受保护的技术使用者：成都华西海圻医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2025/4/10