一种游离脂肪酸含量的测定方法和应用

本发明属于食品检测，具体地，涉及一种游离脂肪酸含量的测定方法和应用。

背景技术：

1、酸价是反映食用油脂中游离脂肪酸(ffa)总含量的食品安全指标，可以根据游离脂肪酸含量判断油脂新鲜度和氧化程度，游离脂肪酸含量越高，品质越差。同时，游离脂肪酸水平作为粮食作物储存品质判定的重要标准之一也愈发受到人们的重视。因储存不当而产生劣变的稻谷、豆类作物，其中的游离脂肪酸含量会显著升高，因此游离脂肪酸含量也成为了判断稻谷、豆类作物早期品质劣变的一个灵敏标志。目前国内外酸价测定的标准技术是酸碱滴定技术，现行的稻谷游离脂肪酸含量标准判定方法(gb/t 20569-2006稻谷储存品质判定规则)也是使用酸碱滴定法。这种方法操作简便，但却存在以下一些缺点：1.实验方法对操作人员要求较高，滴定终点难以判断，受限于设备其结果精度也很有限；2.滴定方法耗费的样品数量较多，对于小剂量的样品，其测试效果不是很好；3.滴定过程耗时较长，不利于进行大批量的检测。

2、铜皂络合比色法是一种可以特异性测定油脂中长链游离脂肪酸含量的检测方法，在多种油脂的检测中都有所应用。传统铜皂络合比色法的技术原理为：将含有游离脂肪酸的试样溶于烃类溶剂作为有机相，用含有吡啶和铜离子的络合离子染色液作为水相，进行液－液双相反应，反应过程中水相中的络合离子会与有机相中的各种游离脂肪酸发生反应，形成三位一体的(吡啶－铜离子－脂肪酸根离子)铜皂络合物，该三元铜皂络合物易溶于有机相并且会显现出特殊的靛蓝色，在700nm波长附近有特征吸收峰，该吸收峰强度与铜皂络合物的浓度符合朗伯－比尔定律，从而可以准确定量，进而推算出游离脂肪酸的浓度。该方法相较于酸碱中和滴定法更加简便快捷，但也存在有改进的空间。传统铜皂络合比色法在测量混合种类的脂肪酸时中短碳链长度的脂肪酸显色强度会明显弱于长碳链脂肪酸，这会带来显著的测量误差。针对上述的不足，亟需提出一种改进新型的铜皂络合比色法应用于测定粮油食品中游离脂肪酸含量。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种游离脂肪酸含量的测定方法。

2、本发明的第二个目的在于提供所述测定方法的应用。

3、本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

4、本发明首先提供一种游离脂肪酸含量的测定方法，包括将待测样品脂肪酸提取溶液与铜皂显色液、有机相溶液混合反应后进行测定；所述铜皂显色液为含有吡啶衍生物和铜盐的混合水相溶液，所述吡啶衍生物为吡啶的4-位被c2～c6直链烷基取代的吡啶衍生物，所述有机相溶液为与铜皂显色液互不相溶的无色有机相溶液。

5、本发明中使用连接有碳链的吡啶衍生物替代传统铜皂络合比色法中的吡啶，研究发现吡啶衍生物在游离脂肪酸检测中比吡啶具有更好、更灵敏的显色效果，同时对短链脂肪酸的显色效果更好，可以缩小传统铜皂络合比色法测量混合种类的脂肪酸时中短碳链长度的脂肪酸显色强度会明显弱于长碳链脂肪酸带来的测量误差。

6、进一步地，所述反应后进行测定的具体测定过程和现有铜皂络合比色法中的一致，即测定反应后的溶液在710nm处吸光度值，并代入事先绘制的标准工作曲线，计算获得游离脂肪酸含量。

7、优选地，所述标准工作曲线为以油酸作为标准品制备已知不同浓度的标准溶液进行测定后，以测得吸光度值为纵坐标，油酸摩尔浓度为横坐标绘制得到。

8、进一步地，所述吡啶衍生物选自为4-乙基吡啶、4-丁基吡啶或4-己基吡啶中任一种。

9、优选地，所述吡啶衍生物为4-丁基吡啶。

10、进一步地，所述待测样品脂肪酸提取液溶液为使用有机溶剂从含脂肪酸的待测样品中提取游离脂肪酸得到。

11、优选地，所述样品选自食用油脂、油脂制品、含油食品、油料作物或稻谷。

12、优选地，所述样品选自植物油、豆类作物或稻谷。

13、优选地，所述样品为芝麻油、黄豆或稻谷。

14、优选地，所述有机溶剂选自环己烷或乙醇。

15、优选地，所述样品为稻谷时，使用乙醇提取样品中游离脂肪酸。使用乙醇提取稻谷样品中的游离脂肪酸，与现行的稻谷储存品质判定规则(gb/t 20569-2006)规定相同，避免由于提取溶剂不同导致提取得到的样品中存在的差异，减少后续检测带来的误差，使结果更贴近国标检测标准。同时，使用乙醇提取相较于环己烷等溶剂毒性更小，同时更经济，对环境也更友好。

16、进一步地，所述铜盐选自醋酸铜。

17、进一步地，所述铜皂显色液的ph为7.0～7.2。

18、优选地，所述铜皂显色液为使用醋酸钠调节ph。

19、优选地，所述铜皂显色液的配制方法为在0.05mol/l的醋酸铜溶液中添加吡啶衍生物至其浓度达到0.1mol/l，利用无水醋酸钠调节溶液ph至7.0～7.2。

20、进一步地，所述有机相溶液选自环己烷、正己烷或异辛烷。

21、作为一种优选的可实施方式，所述游离脂肪酸含量的测定方法包括以下步骤：

22、s1.使用有机溶剂提取待测样品中的游离脂肪酸，获得待测样品脂肪酸提取液溶液；

23、s2.将待测样品脂肪酸提取溶液与铜皂显色液、有机相溶液混合反应，离心取上清液测定710nm处吸光值；其中，所述铜皂显色液为含有吡啶衍生物和铜盐的混合水相溶液，所述吡啶衍生物为吡啶的4-位被c2～c6直链烷基取代的吡啶衍生物，所述有机相溶液为与铜皂显色液互不相溶的无色有机相溶液；

24、s3.将s2所得吸光值代入以油酸为标准品绘制的标准工作曲线，获得待测样品脂肪酸提取液溶液中总游离脂肪酸浓度所相当的油酸摩尔质量浓度，再计算得到待测样品中游离脂肪酸含量。

25、本发明还提供上述任一所述方法在评价粮油食品储藏品质中的应用。

26、进一步地，所述粮油食品选自食用油脂、油脂制品、含油食品、油料作物或稻谷。

27、优选地，所述粮油食品选自植物油、豆类作物或稻谷。

28、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

29、本发明提供了一种游离脂肪酸含量的测定方法，包括将待测样品脂肪酸提取溶液与铜皂显色液、有机相溶液混合反应后进行测定；所述铜皂显色液为含有吡啶衍生物和铜盐的混合溶液。相较于传统铜皂络合比色法中使用的吡啶，本发明中的使用吡啶衍生物在游离脂肪酸检测中具有更好、更灵敏的显色效果，同时对短链脂肪酸的显色效果更好，可以缩小传统铜皂络合比色法测量混合种类的脂肪酸时中短碳链长度的脂肪酸显色强度会明显弱于长碳链脂肪酸带来的测量误差，更有利于在粮油食品储藏品质评价测定游离脂肪酸中进行应用。

技术特征：

1.一种游离脂肪酸含量的测定方法，其特征在于，包括将待测样品脂肪酸提取溶液与铜皂显色液、有机相溶液混合反应后进行测定；所述铜皂显色液为含有吡啶衍生物和铜盐的混合水相溶液，所述吡啶衍生物为吡啶的4-位被c2～c6直链烷基取代的吡啶衍生物，所述有机相溶液为与铜皂显色液互不相溶的无色有机相溶液。

2.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于，所述吡啶衍生物选自为4-乙基吡啶、4-丁基吡啶或4-己基吡啶中任一种。

3.根据权利要求2所述测定方法，其特征在于，所述吡啶衍生物为4-丁基吡啶。

4.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于，所述待测样品脂肪酸提取液溶液为使用有机溶剂从含脂肪酸的待测样品中提取游离脂肪酸得到。

5.根据权利要求4所述测定方法，其特征在于，所述样品选自食用油脂、油脂制品、含油食品、油料作物或稻谷。

6.根据权利要求4所述测定方法，其特征在于，所述有机溶剂选自环己烷或乙醇。

7.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于，所述铜盐选自醋酸铜。

8.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于，所述有机相溶液选自环己烷、正己烷或异辛烷。

9.权利要求1～8任一所述测定方法在评价粮油食品储藏品质中的应用。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述粮油食品选自食用油脂、油脂制品、含油食品、油料作物或稻谷。

技术总结
本发明公开了一种游离脂肪酸含量的测定方法和应用。所述测定方法包括将待测样品脂肪酸提取溶液与铜皂显色液、有机相溶液混合反应后进行测定；所述铜皂显色液为含有吡啶衍生物和铜盐的混合溶液。相较于传统铜皂络合比色法中使用的吡啶，本发明中的使用吡啶衍生物在游离脂肪酸检测中具有更好、更灵敏的显色效果，同时对短链脂肪酸的显色效果更好，可以缩小传统铜皂络合比色法测量混合种类的脂肪酸时中短碳链长度的脂肪酸显色强度会明显弱于长碳链脂肪酸带来的测量误差，更有利于在粮油储藏品质评价测定游离脂肪酸中进行应用。

技术研发人员：程度,陈清华,刘军民
受保护的技术使用者：中山大学
技术研发日：
技术公布日：2025/4/17