出口蔬菜中多种植物生长调节剂的同时测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于化学分析检测领域，具体涉及一种出口蔬菜中17种植物生长调节剂 的同时测定方法。
【背景技术】
[0002] 蔬菜不仅是多种维生素及钾、镁、钙、磷、铁等矿物质和膳食纤维的主要供给来源， 并且是植物化学成分如类胡萝卜素、植物多酚等抗氧化剂的重要来源，对增强体内抗氧化 防御系统及营养修复基因、纠正基因弱点起着重要的作用。为了能通过化学调控改变蔬菜 生长、发育的固有模式，有效改善蔬菜生产状况，提高蔬菜产量和品质，植物生长调节剂已 广泛应用于蔬菜生产中。近年来，植物生长调节剂在蔬菜上的广泛应用，给使用者带来了一 定的经济效益。但是，蔬菜中残留的植物生长调节剂同样也给人们的健康带来了安全隐患， 例如生殖和内分泌系统紊乱、免疫功能障碍、癌症以及其他潜在的疾病。那么在既需要保障 农业的经济利益的同时，又需要保护消费者的身体健康，对蔬菜中植物生长调节剂残留的 检测成为了一项必要的工作，不仅有助于监督食品安全也可以对植物生长调节剂施用提供 一定依据。
[0003] 目前，国内外有关植物生长调节剂残留的检测方法主要有酶联免疫法（ELISA)、离 子色谱法（1C)、气相色谱法（GC)、气相色谱-质谱法（GC-MS)、高效液相色谱法（HPLC)和液 相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS)。采用ELISA易产生假阳性，运用GC和GC-MS时通常要进 行衍生化的复杂操作，HPLC的灵敏度较低且难以实现确证分析，而液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS)可对多组分同时进行定性和定量分析，且具有专属性强、选择性好、灵敏度高等 优势，弥补了前述方法的不足，LC-MS/MS所具备的一系列优势，决定了它广泛的应用前景。
【发明内容】
[0004] 鉴于此，本发明的目的是提供一种出口蔬菜中多种植物生长调节剂的同时测定 方法，采用UHPLC-QTRAP可同时检测出待测蔬菜中的17种植物生长调节剂，包括赤霉素、 吲哚-3- 丁酸、对氯苯氧乙酸、阿维菌素、胺鲜酯、莠去津、西玛津、6-苄氨基嘌呤、2, 4-二 氯苯氧乙酸、氯吡苯脲、助壮素、矮壮素、多效唑、烯效唑、脱落酸、噻苯隆、对氟苯氧乙酸。 UHPLC-QTRAP既保留LC-MS/MS较好的选择性与灵敏度，也可作为线性离子肼增强二级碎片 离子定性功能。
[0005] 本发明方法具体包括如下步骤：
[0006] 1)提取
[0007] 加入蔬菜匀浆与含1% (v/v)乙酸的乙腈溶液于离心管中，按每lg蔬菜匀浆与 2mL含1% (v/v)乙酸的乙腈溶液的比例，水平振荡lOmin，再按每lg蔬菜勾衆加入0. 5g氯 化钠的比例加入氯化钠于离心管中，再次涡旋混匀lmin，5000r/min离心3min，吸取上清液 I于离心管中，待净化；
[0008] 2)净化样本
[0009] 将十八烷基硅烷键合硅胶和无水硫酸镁按重量比1:5加入所述装有上清液I的 离心管中，祸旋混勾2min，5000r/min离心3min，吸取上清液II于旋蒸瓶中；
[0010] 3)浓缩
[0011] 将旋蒸瓶置于40°C以下水浴中旋蒸浓缩至净干，加入lmL含1% (v/v)乙酸的乙 腈，涡旋振荡，溶解旋蒸瓶中残渣，滤膜过滤后，供UHPLC-QTRAP测定；
[0012] 4)UPLC-MS/MS测定，测定条件如下：
[0013] 色谱柱：C18 ;
[0014] 流动相：乙腈-2mmol/L乙酸铵缓冲液，梯度洗脱；
[0015] 各化合物的参考保留时间及质谱参数见表1，其中带*代表定性离子和定量离子；
[0016] 柱温：4(TC;
[0017] 流速：0? 3mL/min;
[0018] 进样量：10yL;
[0019] 预运行时间：1.Omin;
[0020] 正离子模式总运行时间：5min;
[0021] 负离子模式总运行时间：6min;
[0022] 获得UHPLC-QTRAP图；
[0023] 表1十七种植物生长调节剂的参考保留时间及质谱参数
[0024]
【主权项】
1.出口蔬菜中多种植物生长调节剂的同时测定方法，其特征在于，包括如下步骤： 1) 提取 加入蔬菜匀浆与含1%乙酸的乙腈溶液于离心管中，按每Ig蔬菜匀浆与2mL含1%乙 酸的乙腈溶液的比例，水平振荡IOmin，再按每Ig蔬菜匀浆加入0. 5g氯化钠的比例，加入氯 化钠于离心管中，祸旋混勾lmin，5000r/min离心3min，吸取上清液I于离心管中，待净化； 2) 净化样本 将十八烷基硅烷键合硅胶和无水硫酸镁按重量比1:5加入所述装有上清液I的离心 管中，祸旋混勾2min，5000r/min离心3min，吸取上清液II于旋蒸瓶中； 3) 浓缩 将旋蒸瓶置于40°C以下水浴中旋蒸浓缩至净干，加入ImL含1 %乙酸的乙腈，涡旋振 荡，溶解旋蒸瓶中残渣，滤膜过滤后，供UHPLC-QTRAP测定； 4. UHPLC-QTRAP测定，测定条件如下： 色谱柱：C18 ; 流动相：乙腈-2mmol/L乙酸铵缓冲液，梯度洗脱； 各化合物的参考保留时间及质谱参数见表1，其中带*代表定性离子和定量离子； 柱温：40°C ; 流速：〇. 3mL/min ; 进样量：10yL; 预运行时间：1. Omin ; 正离子模式总运行时间：5min ; 负离子模式总运行时间：6min ; 获得 UHPLC-QTRAP 图； 表1十七种植物生长调节剂的参考保留时间及质谱参数
5)结果计算 用色谱数据处理机或按公式（1)计算试样中植物生长调节剂的含量，计算结果须扣除 空白值；
式中： Xi一一待测试样中待测物质的含量，单位为毫克每千克； Ci一一从UHPLC-QTRAP图上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每毫升； V一一样液最终定容体积，单位为毫升； m一一最终样液所代表的待测试样质量，单位为克。
2.根据权利要求2所述出口蔬菜中多种植物生长调节剂的同时测定方法，其特征在 于：步骤4)中所述梯度洗脱的洗脱程序如下： 正离子模式：
3.根据权利要求1所述出口蔬菜中多种植物生长调节剂的同时测定方法，其特征在 于：步骤3)所述滤膜选用0. 22 y m亲油性尼龙66膜。
【专利摘要】本发明公开了一种出口蔬菜中多种植物生长调节剂的同时测定方法。包括提取、净化、浓缩和超高效液相色谱-三重四级杆/复合线性离子肼质谱(UHPLC-QTRAP)测定等步骤，该方法可同时测定赤霉素、吲哚-3-丁酸、对氯苯氧乙酸、阿维菌素、胺鲜酯、莠去津、西玛津、6-苄氨基嘌呤、2,4-二氯苯氧乙酸、氯吡苯脲、助壮素、矮壮素、多效唑、烯效唑、脱落酸、噻苯隆、对氟苯氧乙酸17种植物生长调节剂。本发明提供的出口蔬菜中多种植物生长调节剂的同时测定方法具有步骤简便、耗时短、准确度和精密度高的优点。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104820034
【申请号】CN201510238783
【发明人】曹淑瑞, 李贤良, 唐柏彬, 郗存显, 周雪, 张雷
【申请人】重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年5月12日