一种预测家禽种蛋受精率的方法
【专利说明】[0001] -种预测家禽种蛋受精率的方法 一、技术领域： 本发明设及的是畜牧业领域中家禽养殖技术，具体设及的是利用精子穿过卵黄膜产生 的微孔数预测家禽种蛋受精率的方法。
[000引二、【背景技术】： 鸡蛋是人们生活中不可缺少的食品，随着人民生活水平的提高，鸡蛋的需要量不断增 加，运对于家禽养殖企业来讲是机遇，具有规模的家禽养殖企业应运而生。家禽养殖企业的 生产过程中要对种蛋进行解化，种蛋解化率的高低影响企业的生产效益，不论是蛋鸡还是 肉鸡的繁育都需要保证种蛋解化率持续保持较高水平，否则会造成重大生产事故和严重的 经济损失。一批种蛋入解前，目前通常不对该批次的种蛋受精情况进行预测，运就存在着种 蛋受精率不高的情况下，仍进行种蛋入解的现象，从而难W保证种蛋的高解化率。
[000引S、
【发明内容】
： 本发明的目的是提供一种预测家禽种蛋受精率的方法，运种预测家禽种蛋受精率的方 法用于评价种蛋受精质量，避免低受精率批次的种蛋入解的问题。
[0004] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：运种预测家禽种蛋受精率的方法： (1)轻轻打开种蛋蛋壳的纯端，将蛋内容物轻轻倒出，避免将卵子划破；利用蛋黄分离 器分开卵子和卵清蛋白； 似在盛有质量百分比浓度为l%NaCl溶液的烧杯中，浸泡卵子3分钟，除去多余的卵 清蛋白； (3) 转移步骤（2)处理后的卵子到一个培养皿中，用手轻轻转动卵子使胚盘区域正好 朝上放置，用解剖针在非胚盘区域偏下穿刺，形成几个小桐，降低内部卵黄压力； (4) 用小剪刀，沿胚盘周围距离胚盘边缘至少1cm的区域将该部分卵黄膜切下，在质 量百分比浓度为l%NaCl溶液中清洗干净，除去全部卵黄后得到卵黄膜； (5)将步骤（4)分离得到的卵黄膜放置在载玻片上，滴入数滴l%NaCl，用解剖针轻轻 将卵黄膜展平，避免形成皱權； (6) 用吸管吸走化C1液体，滴入3~5滴20%福尔马林溶液； (7) 10-20秒后，用吸管吸走福尔马林溶液，加入几滴Schiff'S溶液，使卵黄膜充分染 色，控制染色时间，W免染色太深，影响观察； (8) 在卵黄膜上加上盖玻片，在100倍光学显微镜下观察经过精卵互作之后形成的微 孔数量，微孔直径为10~30ul;统计每个卵黄膜上胚盘区域1. 35mm2面积内微孔数量； (9) 重复步骤（1)-(8)，对每批次的种蛋逐个统计每个卵黄膜上胚盘区域1.35mm2面积 内微孔数量，来预测本批次种蛋受精情况；若种蛋卵黄膜上微孔数平均为5,则种蛋的受精 率为70%左右；若微孔数低于0. 5,则种蛋受精率接近于零。
[0005] 上述方案步骤巧）中，在载玻片上滴入质量百分比浓度为3%的多聚甲醒，用盖玻 片封闭，可W实现长期保存。
[0006] 上述方案步骤巧）中，卵黄膜上的微孔数和种蛋受精率的回归曲线方程如下： CN105116120A 呪明巾 2/3 页
其中，y是种蛋受精率，X是种蛋卵黄膜上的微孔数，该回归曲线的沪=0.9目。
[0007] 有益效果： 1、本发明通过观察种蛋卵黄膜上的微孔数，能够较准确预测种蛋的受精率。给母鸡 输入一定数量的精子后，精子利用顶体反应穿过卵黄膜，在内卵黄膜上形成许多微孔，受精 后，未穿过卵黄膜的精子集中在外卵黄膜上。内卵黄膜中屯、有一着色较深的圆形区域即是 胚盘位置，胚盘区域1. 35mm2的范围内分布大量微孔，微孔直径为10~30ul。微孔数可W 代表进入母鸡输卵管的精子数，并且与母鸡所产种蛋的受精率显著相关，通过抽测种蛋卵 黄膜上因精子穿过产生的微孔数，可间接预测该批次种蛋的受精率，为采精困难或精液质 量不稳定的家禽种蛋解化提供决策建议，避免低受精率批次的种蛋入解。
[0008] 2、本发明操作简单、快速，容易上手，所需费用较低，能够利用小样本较准确地预 测某批次种蛋的受精率，保障入解蛋受精率在较高水平，降低解化产业的风险成本。
[0009] 四、【附图说明】： 图1是卵黄膜微孔数中位数与种蛋受精率的关系图。
[0010] 五、【具体实施方式】： 下面对本发明做进一步的说明： 运种预测家禽种蛋受精率的方法： (1)轻轻打开种蛋蛋壳的纯端，将蛋内容物轻轻倒出，避免将卵子划破；利用蛋黄分离 器分开卵子和卵清蛋白； 似在盛有质量百分比浓度为l%NaCl溶液的烧杯中，浸泡卵子3分钟，除去多余的卵 清蛋白； (3) 转移步骤（2)处理后的卵子到一个培养皿中，用手轻轻转动卵子使胚盘区域正好 朝上放置，用解剖针在非胚盘区域偏下穿刺，形成几个小桐，降低内部卵黄压力； (4) 用小剪刀，沿胚盘周围距离胚盘边缘至少1cm的区域将该部分卵黄膜切下，在质 量百分比浓度为l%NaCl溶液中清洗干净，除去全部卵黄，得到卵黄膜； (5) 将步骤（4)分离得到的卵黄膜放置在载玻片上，滴入数滴l%NaCl，用解剖针轻轻 将卵黄膜展平，避免形成皱權； (6) 用吸管吸走化C1液体，滴入3~5滴20%福尔马林溶液； (7) 10-20秒后，用吸管吸走福尔马林溶液，加入几滴Schiff'S溶液，使卵黄膜充分染 色，控制染色时间，W免染色太深，影响观察； (8) 在卵黄膜上加上盖玻片，在100倍光学显微镜下观察经过精卵互作之后形成的微 孔数量，微孔直径为10~30ul;统计每个卵黄膜上胚盘区域1. 35mm2面积内微孔数量； (9) 重复步骤（1)-(8)，对每批次的种蛋逐个统计每个卵黄膜上胚盘区域1.35mm2面积 内微孔数量，来预测本批次种蛋受精情况；若种蛋卵黄膜上微孔数平均为5,则种蛋的受精 率为70%左右；若微孔数低于0. 5,则种蛋受精率接近于零。
[0011] 实例证明： 34周龄的白来航鸡，母鸡为150只，公鸡4只。经精液质量测定，公鸡精液质量良好，精 子密度在40XlOVmL左右。4只公鸡的精液混合稀释，每只母鸡人工输入0. 05血精液，其 含有的精子数量为20Xl〇6。人工输精48小时后开始收集种蛋。将每天所产种蛋随机分成 等量两份，一份进行精卵质膜互作实验，另一份进行机器解化测定种蛋的真实受精率，检测 种蛋的实际受精效果。种蛋收集直到种蛋的受精率为零为止。
[0012] 随着授精后天数的延长，卵黄膜上的微孔数和真实受精率的关系如下：
注：微孔数目是每个卵黄膜胚盘区域1. 35mm2面积内的微孔数量 经过SAS软件的C0RR过程分析，上述数据的卵黄膜上微孔数目的中位数与种蛋受精率 存在显著的相关关系（K0. 05);利用SAS软件的REG过程，拟合出卵黄膜上的微孔数和种蛋 受精率的回归曲线（图1，图中横坐标为微孔数目的中位数，纵坐标是对应的受精率)，方程 如下：
其中，y是种蛋受精率，X是种蛋卵黄膜上的微孔数，该回归曲线的及2 。从拟合 曲线方程可W得出，全群平均受精率54. 7%对应微孔中位数为2. 6;如果卵黄膜上微孔数的 中位数为5,则受精率为70%左右；若微孔数低于0.5个，则受精率急剧下降接近于零左右。
[0013] 禽种蛋受精过程中，精子能够在卵黄膜上产生多个微孔，用眼科手术剪刀分离胚 盘区域约1. 5平方厘米的卵黄膜，用解剖针将卵黄膜平铺于载玻片上，使用20%福尔马林 溶液固定，Schiff'S溶液染色后，于100倍光学显微镜下可观察到微孔数目。微孔直径为 10~30ym，大多数微孔集中在胚盘区域1. 35mm2的范围内。经过统计分析发现，受精鸡蛋 卵黄膜上微孔数目与鸡蛋受精率呈显著的相关关系，通过观察种蛋卵黄膜上的微孔数，能 够较准确预测种蛋的受精率。如果抽测一批种蛋卵黄膜上微孔数平均为5,则该批种蛋的受 精率为70%左右；若微孔数低于0. 5,则种蛋受精率接近于零。该方法能够快速、准确地预 测种蛋受精率，从而评价种蛋受精质量，评估种鸡的精液质量，避免低受精率批次的种蛋入 解，进而降低家禽养殖业生产风险，提高经济效益，为生产决策提供依据。
【主权项】
1. 一种预测家禽种蛋受精率的方法，其特征在于：这种预测家禽种蛋受精率的方法： (1) 轻轻打开种蛋蛋壳的钝端，将蛋内容物轻轻倒出，避免将卵子划破；利用蛋黄分离 器分开卵子和卵清蛋白； (2) 在盛有质量百分比浓度为l%NaCl溶液的烧杯中，浸泡卵子3分钟，除去多余的卵 清蛋白； (3) 转移步骤（2)处理后的卵子到一个培养皿中，用手轻轻转动卵子使胚盘区域正好 朝上放置，用解剖针在非胚盘区域偏下穿刺，形成几个小洞，降低内部卵黄压力； (4) 用小剪刀，沿胚盘周围距离胚盘边缘至少lcm的区域将该部分卵黄膜切下，在质 量百分比浓度为l%NaCl溶液中清洗干净，除去全部卵黄后得到卵黄膜； (5)将步骤（4)分离得到的卵黄膜放置在载玻片上，滴入数滴l%NaCl，用解剖针轻轻 将卵黄膜展平，避免形成皱褶； (6) 用吸管吸走NaCl液体，滴入3~5滴20%福尔马林溶液； (7) 10-20秒后，用吸管吸走福尔马林溶液，加入几滴SchifT's溶液，使卵黄膜充分染 色，控制染色时间，以免染色太深，影响观察； (8) 在卵黄膜上加上盖玻片，在100倍光学显微镜下观察经过精卵互作之后形成的微 孔数量，微孔直径为10~30ul;统计每个卵黄膜上胚盘区域1. 35mm2面积内微孔数量； (9) 重复步骤（1)-(8)，对每批次的种蛋逐个统计每个卵黄膜上胚盘区域1.35mm2面积 内微孔数量，来预测本批次种蛋受精情况；若种蛋卵黄膜上微孔数平均为5,则种蛋的受精 率为70%左右；若微孔数低于0. 5,则种蛋受精率接近于零。2. 根据权利要求1所述的预测家禽种蛋受精率的方法，其特征在于：所述的步骤（5) 中，在载玻片上滴入质量百分比浓度为3%的多聚甲醛，用盖玻片封闭。3. 根据权利要求1所述的预测家禽种蛋受精率的方法，其特征在于：所述的步骤（9) 中，卵黄膜上的微孔数和种蛋受精率的回归曲线方程如下：其中，y是种蛋受精率，x是种蛋卵黄膜上的微孔数，该回归曲线的炉=0.98。
【专利摘要】本发明涉及的是一种预测家禽种蛋受精率的方法，这种预测家禽种蛋受精率的方法：(1)分开种蛋的卵子和卵清蛋白；(2)用1%NaCl溶液浸泡卵子，除去卵清蛋白；(3)在卵子非胚盘区域偏下穿刺，形成几个小洞；(4)沿胚盘周围距离胚盘边缘至少1cm的区域将该部分卵黄膜切下，得到卵黄膜；(5)将卵黄膜滴入1%NaCl并展平；(6)吸走NaCl液体，滴入20%福尔马林溶液；(7)10-20秒后，吸走福尔马林溶液，加入几滴Schiffˊs溶液染色；(8)在光学显微镜下观察经过精卵互作之后形成的微孔数量；(9)重复步骤(1)-(8)，对每批次的种蛋逐个统计微孔数量，若种蛋卵黄膜上微孔数平均为5，则种蛋受精率为70%左右；若微孔数低于0.5，则种蛋受精率接近于零。本发明能够较准确预测种蛋的受精率。
【IPC分类】G01N33/08, G06F19/00
【公开号】CN105116120
【申请号】CN201510477460
【发明人】刘胜军, 张莹, 刘勃麟
【申请人】黑龙江八一农垦大学
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年8月7日