一种采用高效液相色谱法检测药用辅料胭脂红含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药品检验领域，涉及药用辅料的分析测定方法兽医学检验领域。具体 涉及胭脂红含量的测定方法。
【背景技术】
[0002] 近年来，有关药品的质量标准已得到了较大的完善，而有关药用辅料的质量控制 标准还多数停留相对落后的层次上。由于药用辅料质量的优劣直接关系到药物制剂在体 内的安全性和有效性，药用辅料的质量控制标准的研究与提高迫在眉睫。胭脂红是常用的 人工合成色素之一，在药学领域主要用作胶囊壳的着色剂等，收载于中国医药行业标准YY 0145-93。该标准中采用三氯化钛滴定法测定含量，操作繁琐费时，测定结果误差较大。本 试验在参考相关文献（1~3)的基础上，对其含量测定方法进行了研究，建立了药用辅料胭 脂红的高效液相含量测定方法。
[0003] 目前，国内外对胭脂红的研究主要集中在其作为饲料着色剂方面，而对于胭脂红 检测方法方面的研究甚少，主要有分光光度计法、薄层色谱法以及高效液相色谱法等。但这 些方法操作过程较繁琐，不适合对大批量样品进行检测。亟需建立一种准确、高效、安全的 高效液相色谱法（HPLC法），用于检测药用辅料胭脂红残留，为保障药品安全提供技术支 持。因此，研究通过对待测样品的前处理和色谱条件的筛选、优化，旨在建立胭脂红残留的 HPLC法检测技术。
【发明内容】
[0004] 高效液相色谱是利用高压输液泵驱使流动相通过装填固定相的色谱柱，由于混合 物中各组分在性质和结构上有差异，与固定相发生作用的大小也有差异，因此在同一推动 力的作用下，不同组分在固定相中的滞留时间不同，从而按照先后顺序从固定相中流出，达 到对物质进行分离的效果，并进行定量分析和定性分析的方法。
[0005] 本发明包括以下步骤： (1)样品预处理 精密吸取胭脂红标准溶液lmL至10mL容量瓶中，加水制成每lmL含50 μ g的溶液即 得对照品溶液。取本品约〇. lg，精密称定，置l〇〇mL容量瓶中，加水适量溶解，并稀释至刻 度，摇匀，精密量取lmL置20mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以0. 45 μ m微孔滤膜过 滤，即得供试溶液。
[0006] (2)用高效液相色谱仪（型号为Waters 2695)，紫外检测器（型号为Waters 2487 )和 Agilent Zorbax SB_C18 (250mm X 4. 6mm，5ym)色谱柱作为试验仪器检测，记 录色谱图，内标峰高（Hi)与胭脂红峰高（Hs)，用标准曲线换算浓度。
[0007] 根据权利要求1所述的胭脂红含量的测定方法，其特征在于该方法是Agilent 2〇1^&1313-(]18(25〇111111\4.6111111，5以111)为色谱柱，波长为 33311111，流速为1.〇1111^/111；[11，流 动相为甲醇-0· 02mol*L 1乙酸铵溶液（30 : 70)，柱温为35°C，进样量为50yL。
[0008] 根据权利要求1所述的加丽素红含量的测定方法，其特征在于该方法是Symmetry C18 5ym，3.9X150mm为色谱柱，波长为475nm,流速为l.OmL /min,流动相为甲醇：水 =95 : 5,柱温为30°C，进样量为50yL。
[0009] 本发明的有益效果是：本发明应用高效液相色谱法检测药用辅料胭脂红含量具有 较好的准确度与精密度。
【具体实施方式】
[0010] 下面将详细说明本发明的【具体实施方式】： 1.仪器与试剂： 仪器： Waters 2695高效液相色谱仪（带DAD检测器） 试剂： 食用合成色素胭脂红标准溶液（〇.500mg*mL 1，批号：GBW( E) 100004a 09001，由计 量科学研究院提供）；胭脂红（批号：20100901，20100902,20100903,由某生产企业提供）； 甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
[0011] 2.方法与结果 色谱条件与系统适用性试验 米用 A Agilent Zorbax SB_C18 (250mm X 4. 6mm，5ym)为色谱柱，波长为 333nm，流 速为l.OmL /min，流动相为甲醇-0. 02mol *L 1乙酸铵溶液（30 : 70)，柱温为35°C，进 样量为50 μ L，理论板数以胭脂红峰计应不低于4000。在此色谱条件下，精密吸取空白溶 剂、对照品溶液和供试品溶液10 μ L，注入液相色谱仪。
[0012] 标准曲线的制作 精密吸取胭脂红对照品溶液（50^·ιΛ _1 ) 1、5、10、15、20^，注入 高效液相色谱仪，测定，得峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量（μ g)为横坐标，绘制标 准曲线，得回归方程为：Y = 3536. 9X + 21.753, r = 0.9999 ( η =5)。结果表明，胭月旨 红在0.050~1.000 μ g范围内线性关系良好。
[0013] 精密度试验 精密吸取供试品溶液10 μ L，在上述色谱条件下分别进样6次，胭脂红峰面积积分值的 RSD为0.9%( η = 6)。结果表明：仪器精密度良好。
[0014] 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、1、5、10、15、20、2处进行测定其峰面积，其1?0为1.1%( η = 6)。结果表明供试品溶液在24h内稳定。
[0015] 重复性试验 取胭脂红样品，按上述供试品溶液的配制方法制备6份样品，在上述色谱条件下进样 测定，平均含量为93. 12%，RSD为0. 8%( η = 6)。结果表明：该方法重复性好。
[0016] 回收率试验 取已知含量（93. 12%)的胭脂红样品约0. 05g共6份，精密称定，置于100mL容量 瓶中，加水适量溶解后定容至刻度，摇匀。精密量取lmL置10mL容量瓶中，分别精密加入 100 μ g · mL _ 1胭脂红标准溶液（精密吸取胭脂红标准溶液5mL至25mL容量瓶中，加水 制成每lmL含100 μ g的溶液）5mL，加水定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液，按色谱条件测 定胭脂红含量，计算回收率，结果平均回收率为99. 0%，RSD为1. 6%( η = 6)。
[0017] 样品含量测定 取样品3批，按供试品溶液制备方法制备，依法测定并计算，见表1。
[0018]表 1
【主权项】
1. 胭脂红含量的测定方法，其特征在于将待测样品预处理后，用高效液相色谱检测，包 括以下步骤： 样品预处理 (1)精密吸取胭脂红标准溶液lmL至10mL容量瓶中，加水制成每lmL含50 μ g的溶液 即得对照品溶液；取本品约〇. lg，精密称定，置l〇〇mL容量瓶中，加水适量溶解，并稀释至 刻度，摇匀，精密量取lmL置20mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以0. 45 μ m微孔滤膜过 滤，即得供试溶液； (2)用高效液相色谱仪（型号为Waters 2695)，紫外检测器（型号为Waters 2487 )和Agilent Zorbax SB_Cls (250mm X 4. 6mm，5ym)色谱柱作为试验仪器检测，记录色 谱图，内标峰高（Hi)与胭脂红峰高（Hs)，用标准曲线换算浓度。2. 根据权利要求1所述的胭脂红含量的测定方法，其特征在于该方法是Agilent 2〇1^&1313-(]18(25〇111111\4.6111111，5以111)为色谱柱，波长为 33311111，流速为1.〇1111^/111；[11，流 动相为甲醇-〇· 〇2mol*L 1乙酸铵溶液（30 : 70)，柱温为35°C，进样量为50yL。
【专利摘要】本发明属于药品检验领域，涉及药用辅料的分析测定方法。具体涉及胭脂红含量的测定方法。该方法是采用采用AgilentZorbaxSB-C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，以甲醇-0.02mol·L-1乙酸铵溶液(30∶70)为流动相；流速为1.0mL·min-1；检测波长为333nm；柱温为35℃。对样品进行5个添加剂量水平的回收率试验，回收率为95.3%～99.5%，平均回收率为99.0%，相对标准偏差（RSD）为1.6%。回收率大于80%，胭脂红线性范围为0.050～1.000μg，r=0.9999，结果表明该方法简单、准确，可作为药用辅料胭脂红的质量控制方法。
【IPC分类】G01N30/02, G01N30/06
【公开号】CN105572240
【申请号】CN201410618435
【发明人】杜霞, 洪霞, 张淑雅
【申请人】镇江先创生物科技有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2014年11月6日