一种硫离子的检测方法
【专利摘要】本发明公开一种硫离子的检测方法，通过罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球(RB?CSM)充分吸收Au(III)后，在RB?CSM复合材料的表面构建Au(ш)?S氧化还原反应，在RB?CSM表面生成了金纳米粒子，通过金纳米粒子与罗丹明B之间的荧光共振能量转移(FRET)，实现了对S2?的痕量检测，同时为S2?的检测提供了一种新的思路与方法。
【专利说明】
_种硫禹子的检测方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种硫离子的检测方法，具体涉及一种将接枝罗丹明B的壳聚糖纳米微球作为荧光探针检测硫离子的方法。
【背景技术】
[0002]随着社会经济的发展和人类活动的加剧，环境污染也在日益增加，大气污染和水污染便是最突出的两个问题。硫化氢作为一种毒性气体，不仅污染大气，而且溶于水之后易形成含硫废水，因此，已经严重威胁到人类的健康和身存环境。
[0003]硫化氢(H2S)气体是一种有毒有害的还原性可燃性气体。多存在于工业废气以及自然界中的H2S气体，有着一股被人们一贯称之为“臭鸡蛋味”的气味。服气体不仅能对人类的身体健康造成威胁，还会对环境空气质量造成严重的污染。如若不慎长期暴露于含有H2S气体的环境中，将会对人体组织与机制造成极大的损伤，严重者甚至会死亡。除此之外，H2S已经成为继一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)之后的第三个气体信号分子，内源性H2S在哺乳动物体内广泛存在，并在心血管系统、神经系统、消化系统、呼吸系统和内分泌系统等发挥重要的生理功能。但是，到目前为止，硫化氢在人体的许多生理和病理过程中的作用机理尚不明确，所以，能够灵敏、可靠地检测出生理样品以及活细胞中硫化氢的含量，将有助于理解硫化氢在致病过程中的作用机制。
[0004]其次，研究表明硫化氢溶于水之后，在饮用水中硫化氢的浓度即使小于0.07mg/m3时，也会对饮用水的水质造成一定的影响。当水中硫化氢浓度达到0.15mg/m3时，会对新投入河塘的鱼苗生长定产生的影响，同时也会对河塘周围植物的根系产生一定的毒害作用。硫化氢不仅具有毒性，其溶液呈酸性且具有腐蚀性，可导致管道、罐类等设备发生硫化物应力开裂、氢鼓泡、氢致开裂等，导致栗类叶轮腐蚀磨损加快及出现腐蚀性气孔等问题。
[0005]现有材料大部分在检测硫离子(S2—)时灵敏度不高，而且难于回收再利用。因此，开发设计一种可以检测低浓度H2S或硫离子的新型检测材料是非常必要的。
【发明内容】
[0006]本发明提供了罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球在检测硫离子中的应用，所述罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球按照中国专利CN104785222A中的方法制备得到。
[0007]本发明还提供了一种硫离子的检测方法，通过罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球(RB-CSM)充分吸收Au(III)后，在RB-CSM复合材料的表面构建Au(Hi)-S氧化还原反应，在RB-CSM表面生成了金纳米粒子，通过金纳米粒子与罗丹明B之间的荧光共振能量转移(FRET)，实现了对S2—的痕量检测，同时为S2—的检测提供了一种新的思路与方法。
[0008]本发明采取的技术方案为:
[0009]罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球在检测硫离子中的应用。所述罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球的制备方法如下:
[0010](I)制备壳聚糖纳米微球
[0011]量取3.75ml的戊二醛于50ml容量瓶中，用I，4_二氧六环定容至刻度线，配制成戊二醛一I，4_二氧六环溶液备用;称取0.1g壳聚糖，溶解于12ml 3%的乙酸溶液得到壳聚糖乙酸溶液，溶解完全混匀;将80ml的液体石蜡、4ml表面活性剂span-80与1.0g助表面活性剂硬脂酸镁室温搅拌I小时后，逐滴加入上述壳聚糖乙酸溶液，混合溶液继续搅拌I小时后，逐滴滴加2ml已配置好的戊二醛溶液，40°C油浴6小时，将得到的产物先4000rpm低速离心去除粒径较大的壳聚糖微球，然后再将清液8000rpm再次离心，得到较小颗粒的壳聚糖微球，并依次用石油醚、乙醇和去离子水洗涤三遍得到壳聚糖纳米微球。
[0012](2)制备罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球(RB-CSM)
[0013]取步骤(I)制备的壳聚糖纳米微球1.0g超声分散在50ml去离子水中备用，称取0.05g罗丹明B、0.25gEDC、0.2g NHS溶解于50ml去离子水中，磁力搅拌活化半小时，倒入超声分散在去离子水中的壳聚糖纳米微球，磁力搅拌48小时后离心分离，用去离子水洗涤至离心后上层清液透明为止，得到罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球。
[0014]本发明还提供了一种硫离子的检测方法，所述检测方法包含以下步骤:
[0015]A.配置多组罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球金离子复合溶液:分别将罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球水溶液与氯金酸水溶液混合，加入0.5?I mLPBS缓冲溶液，并用稀盐酸调节溶液PH为4.5?5.5，反应20?30分钟；
[0016]B.分别向步骤A得到的溶液中加入不同浓度的S2—溶液，所述S2—溶液的终浓度在0.16nmol/L?1.6umoL/L浓度范围内，并用去离子水稀释至5mL，搅拌反应40?50分钟；
[0017]C.测量上述各组溶液的荧光强度；
[0018]罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球与氯金酸的终浓度分别为0.04g/L和0.19X 10—6?ΙΟΧΙΟΛιοΙ.L—S所述氯金酸的终浓度优选为3.8X10—6mol/L。
[0019]所述PBS缓冲溶液的PH为4.5?5.5，在此方法中PBS缓冲溶液的作用是为使体系的PH比较稳定，排除PH对检测过程产生干扰。
[0020]进一步地，所述步骤A中，用用I X 10—4?I X 10—3mol.L—1浓度的稀盐酸调节溶液PH为5.3，调节PH至5.3的原因是体系中的AuCl4—和硫离子的存在状态受体系PH影响较大，在pH较低时，体系内H+的浓度较大，比较容易和S2—形成H2S分子，随着pH的增大，游离态的S2—的越来越多，粹灭效率越大。当pH>5.3时，RB-CSN纳米复合材料表面的AuClf易和溶液中的0H—形成氢氧化物沉淀，游离态的S2—无法将与该沉淀反应生成金纳米粒子。
[0021]所述步骤8中，硫离子溶液的浓度分别为0.161111101/1、0.41111101/1、0.72醒01/1、0.8nmol/L、1.6nmol/L、4nmol/L、6nmol/L、8nmol/L、20nmol/L、36nmol/L、40nmol/L、72nmol/L、80nmol/L、1.6 X 102nmol/L、4.0 X 102nmol/L、6.0 X 102nmol/L、8.0 X 102nmol/L、1.6 X 103nmol/Lo
[0022]所述检测方法具体包含以下步骤:
[0023]A.配置多组罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球金离子复合溶液:分别将0.5mL浓度为
0.4g/L的罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球水溶液与0.05mL浓度为3.8 X 10—4mol/L氯金酸水溶液混合，并加入PH为5.3的0.5mLPBS缓冲溶液，并用浓度为I X 10—4?I X 1^mol.L—1的稀盐酸调节溶液PH为5.3，反应20分钟；
[0024]B.分别向步骤A得到的溶液中加入不同浓度的S2—溶液，S2—溶液的终浓度分别为0.16nmol/L、0.4nmol/L、0.72nmol/L、0.8nmol/L、1.6nmol/L、4nmol/L、6nmol/L、8nmol/L、20nmol/L、36nmol/L、40nmol/L、72nmol/L、80nmol/L、1.6 X 102nmol/L、4.0 X 102nmol/L、6.0X 102nmol/L、8.0 X 102nmol/L、1.6 X 103nmol/L，并用去离子水稀释至5mL，搅拌反应40分钟；
[0025]C.测量上述各组溶液的荧光强度。
[0026]所述罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球金离子复合溶液的荧光强度随着S2—浓度的增加而逐渐降低，当S2—浓度达到36nmol/L，荧光猝灭效率高达90%;当S2—浓度超过36nmol L—1后，体系的荧光强度随着S2—浓度的增大而逐渐回升，且当S2—浓度达到1.6μπι01 L—S荧光回升效率高达98 %。
[0027]本发明所提供的硫离子的检测方法简单易行，所需设备简单，且检测硫离子的荧光材料罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球具有高灵敏、快响应、低成本、易于回收再利用等优良性能。
【附图说明】
[0028]图1为罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球的合成路径示意图；
[0029]图2为罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球的SEM图；
[0030]图3为罗丹明B(a)、壳聚糖分子(b)、壳聚糖微球(CSM)(C)和罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球(RB-CSM) (d)的红外光谱图；
[0031]图4为Au(III)/RB-CSM体系在(pH 5.0)溶液中随32—浓度增加(从上到下:01111101/1、0.16nmol/L、0.4nmol/L、0.72nmol/L、0.8nmol/L、1.6nmol/L、4nmol/L、6nmol/L、8nmol/L、20nmOl/L、36nmOl/L)荧光强度逐渐减弱的荧光光谱图，其中，RB-CSM的浓度为0.04g/L，Au(III)浓度为4.0 X 10—6H1l.L—1;右上角的点线图中的荧光强度数值是580nm波长处对应的荧光强度数值；
[0032]图5为Au(III)/RB-CSM体系在(pH 5.0)溶液中随32—浓度增加(从下到上:40醒01/L、72nmol/L、80nmol/L、1.6 X 102nmol/L、4.0 X 102nmol/L、6.0 X 102nmol/L、8.0 X 102nmol/1^、1.6\103醒01/1)荧光强度逐渐增强的荧光光谱图，其中，1^-051的浓度为0.048/1，八11(III)浓度为4.0 X 10—6mol.L—1;右上角的点线图中的荧光强度数值是580nm波长处对应的荧光强度数值；
[0033]图6为罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球检测S2—示意图；
[0034]图7为RB-CSM(a)，Au(III)/RB-CSM(b)，RB-CSM/Au(III)中加入1nmolL—1 S2—(c)，RB-CSM/Au(III)中加入l.0ymol L-1 S2—(d)，S2—(e)，Au(III) (f)的紫外吸收图，其中RB-CSM的浓度为0.04g L^Au(III)的浓度为4.0X10—5mol L-S
[0035]图8为金纳米粒子的紫外吸收图(a)及RB-CSM的荧光图(b);
[0036]图9为RB-CSM中加入不同浓度的Au(III)(0.19X10—6?1X10—6mol.L—O的荧光图；
[0037]图10为RB-CSM中加入不同浓度的硫离子((a)Oymol L—\ (b)0.0lymol L-McH.0μπιο? L—1 和(d)100ymol L—1 的荧光图。
【具体实施方式】
[0038]实施例1
[0039]—种硫离子的检测方法，所述检测方法包含以下步骤:
[0040]A.配置多组罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球金离子(Au(III)/RB-CSM)复合溶液:分别将0.5mL浓度为0.4g/L的罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球水溶液与0.05mL浓度为3.8 X
I(TV) I/L氯金酸水溶液混合，并加入PH为5.3的0.SmLI3BS缓冲溶液，并用浓度为I X 10—4?IX 10—3m0l.L—1的稀盐酸调节溶液PH为5.3，反应20分钟；
[0041 ] B.分别向步骤A得到的溶液中加入不同浓度的S2—溶液，S2—溶液的终浓度分别为0.16nmol/L、0.4nmol/L、0.72nmol/L、0.8nmol/L、1.6nmol/L、4nmol/L、6nmol/L、8nmol/L、20nmol/L、36nmol/L、40nmol/L、72nmol/L、80nmol/L、1.6 X 102nmol/L、4.0 X 102nmol/L、6.0X 102nmol/L、8.0 X 102nmol/L、1.6 X 103nmol/L，并用去离子水稀释至5mL，搅拌反应40分钟；
[0042]C.测量上述各组溶液的荧光强度。
[0043]上述反应中，罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球的制备方法为:
[0044](I)制备壳聚糖纳米微球
[0045]量取3.75ml的戊二醛于50ml容量瓶中，用I，4_二氧六环定容至刻度线，配制成戊二醛一I，4_二氧六环溶液备用;称取0.1g壳聚糖，溶解于12ml 3%的乙酸溶液得到壳聚糖乙酸溶液，溶解完全混匀;将80ml的液体石蜡、4ml表面活性剂span-80与1.0g助表面活性剂硬脂酸镁室温搅拌I小时后，逐滴加入上述壳聚糖乙酸溶液，混合溶液继续搅拌I小时后，逐滴滴加2ml已配置好的戊二醛溶液，40°C油浴6小时，将得到的产物先4000rpm低速离心去除粒径较大的壳聚糖微球，然后再将清液8000rpm再次离心，得到较小颗粒的壳聚糖微球，并依次用石油醚、乙醇和去离子水洗涤三遍得到壳聚糖纳米微球。
[0046](2)制备罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球(RB-CSM)
[0047]取步骤(I)制备的壳聚糖纳米微球1.0g超声分散在50ml去离子水中备用，称取0.05g罗丹明B、0.25gEDC、0.2g NHS溶解于50ml去离子水中，磁力搅拌活化半小时，倒入超声分散在去离子水中的壳聚糖纳米微球，磁力搅拌48小时后离心分离，用去离子水洗涤至离心后上层清液透明为止，得到罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球。
[0048]罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球的合成路径如图1所示。
[0049]罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球(RB-CSM)的表征:
[0050]RB-CSM的扫描电镜图如图2所示。从扫描电镜图中可以看出，所合成的RB-CSM的粒径大约在2μηι?4μηι，形貌规整，粒径比较均一。
[0051 ] 壳聚糖，交联壳聚糖微球(CSM)，罗丹明B(RB)，和RB-CSM的红外表征图如图3所示。根据红外光谱图，2929cm—1处是壳聚糖分子的脂肪族碳氢伸缩振动峰，3469cm—1处宽而强的吸收峰是由N-H和O-H的伸缩振动及分子间氢键引起的，896cm—1是辦唐苷键的吸收峰;交联后的壳聚糖微球整体的吸收峰的位置无大的改变，只是在1625cm—1处形成了 C = N的吸收峰，表明交联剂戊二醛的醛基与壳聚糖的氨基发生了交联反应。和纯的罗丹明B的吸收峰相比，1707cm—1处的羧基的吸收峰消失了，相反，在1647cm—1处主要是酰胺I带的仲酰胺伸缩振动峰，而由N-H弯曲振动及C-N的伸缩振动所形成的酰胺Π带及ΙΠ带的峰分别在1540cm—\1396cm—1处，这些表明罗丹明B已经成功的接枝到壳聚糖微球上。
[0052]荧光测试结果:
[0053]加入了不同浓度硫离子之后的罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球金离子复合溶液的荧光测试结果如图4和图5所示，从图4可以看出，0.04g L—1 RB-CSM的溶液在580nm处有很强的荧光，加入3.8 X 10—6mol L—1 HAuCl4后，由于RB-CSM表面大量带正电荷的氨基和Au(III)之间有很强的静电吸引作用，生成了复合物Au(III)/RB-CSM，体系的荧光强度会有所下降(13 %)。然而，加入微量的S2—(H2S)后，Au( III )/RB-CSM体系的荧光强度急剧猝灭，且Au(III)/RB-CSM体系的荧光强度随着S2—浓度(0.16?36nmol L—O的增加而逐渐降低，当S2一浓度达到36nmol L—1，猝灭效率高达90%。但是，当S2—浓度超过36nmol L—1后，体系的荧光强度随着S2—浓度的增大而逐渐回升，且当S2—(H2S)浓度达到1.6μπι01 L—S荧光回升效率高达98%，如图5所示。
[0054]其检测机理图如图6所示。
[0055]同时，我们研究了S2—(H2S)对RB-CSM荧光强度的影响，实验结果(如图10)表明S2—(H2S)并不影响RB-CSM荧光强度。因此，主要是由于S2—(H2S)与Au(III)之间发生了氧化还原反应，生成了金纳米粒子，且这种金纳米粒子与荧光基团RB之间发生了荧光共振能量转移(FRET)，从而导致Au (III) /RB- CSM体系的荧光急剧下降。
[0056]机理探讨:
[0057]为了研究体系荧光猝灭的机理，本实验继续研究了相关的紫外对比图谱。从图7中可以看出，RB-CSM(a)在580nm处有一个很强的紫外吸收峰，与RB-CSM纯溶液相比，Au(III)/RB-CSM的紫外特征峰(b)的位置和强度没有太大的变化。然而，向Au (111 )/RB-CSM体系中加入微量硫离子(1nmol L—工)之后，在520nm处出现了新的紫外特征吸收峰(c)，即金纳米粒子表面等离子体共振吸收峰。
[0058]这一现象与之前的文献所报道的一致。在检测时，之所以有这样高的猝灭效率，主要是因为溶液中的硫离子(S2—)将RB-CSM的表面的Au(III)还原成了金纳米粒子，金纳米粒子具较强的猝灭特性，能与罗丹明B之间发生能量转移、电荷转移的作用(从图8可以看出，金纳米粒子的紫外吸收与罗丹明B的荧光发射图有很大一部分发生了重叠，因而金纳米粒子和罗丹明B之间存在荧光共振能量转移(FRET))，当体系的硫离子超过一定浓度(1.Ομπιο?L—O后，金纳米粒子的等离子体共振吸收峰就消失了(d)(图7)，这是因为体系中过量的硫离子会继续和金纳米粒子反应生成Au2Sm米粒子。这便可以解释体系荧光回升的原因。
[0059]实施例2
[0060]一种硫离子的检测方法，所述检测方法包含以下步骤:
[0061]A.配置多组罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球金离子复合溶液:分别将0.5mL浓度为0.4g/L的罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球水溶液与0.05mL浓度为3.8 X 10—4mol/L氯金酸水溶液混合，并加入PH为5.0的0.6mLPBS缓冲溶液，并用浓度为I X 10—4?I X 1^mol.L—1的稀盐酸调节溶液PH为5.0，反应20分钟；
[0062]B.分别向步骤A得到的溶液中加入不同浓度的S2—溶液，S2—溶液的终浓度分别为0.16nmol/L、0.4nmol/L、0.72nmol/L、0.8nmol/L、1.6nmol/L、4nmol/L、6nmol/L、8nmol/L、20nmol/L、36nmol/L、40nmol/L、72nmol/L、80nmol/L、I.6 X 102nmol/L、4.0 X 102nmol/L、6.0X 102nmol/L、8.0 X 102nmol/L> I.6 X 103nmol/L，并用去离子水稀释至5mL，搅拌反应45分钟；
[0063]C.测量上述各组溶液的荧光强度。经测量，荧光强度的变化趋势同实施例1 JPAu(III)/RB-CSM体系的荧光强度随着S2—浓度(0.16?36rnnol L—1)的增加而逐渐降低，当S2一浓度超过36nmol L—1后，体系的荧光强度随着S2—浓度的增大而逐渐回升。
[0064]罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球的制备方法同实施例1。
[0065]实施例3
[0066]—种硫离子的检测方法，所述检测方法包含以下步骤:
[0067]A.配置多组罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球金离子复合溶液:分别将0.5mL浓度为0.4g/L的罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球水溶液与0.05mL浓度为3.8 X 10—4mol/L氯金酸水溶液混合，并加入PH为5.5的0.8mLPBS缓冲溶液，并用浓度为I X 10—4?I X 1^mol.L—1的稀盐酸调节溶液PH为4.8，反应25分钟；
[0068]B.分别向步骤A得到的溶液中加入不同浓度的S2—溶液，S2—溶液的终浓度分别为0.16nmol/L、0.4nmol/L、0.72nmol/L、0.8nmol/L、1.6nmol/L、4nmol/L、6nmol/L、8nmol/L、20nmol/L、36nmol/L、40nmol/L、72nmol/L、80nmol/L、1.6 X 102nmol/L、4.0 X 102nmol/L、6.0X 102nmol/L、8.0 X 102nmol/L、1.6 X 103nmol/L，并用去离子水稀释至5mL，搅拌反应50分钟；
[0069]C.测量上述各组溶液的荧光强度。经测量，荧光强度的变化趋势同实施例UPAu(III)/RB-CSM体系的荧光强度随着S2—浓度(0.16?36nmol L—O的增加而逐渐降低，当S2一浓度超过36nmol L—1后，体系的荧光强度随着S2—浓度的增大而逐渐回升。
[0070]罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球的制备方法同实施例1。
[0071]所加入氯金酸的终浓度可在0.19X 10—6?10X 10—V)1.L—1范围内进行调整，在此范围内体系都具有很强的荧光背景，如图9所示，【具体实施方式】参加实施例4和5。
[0072]实施例4
[0073]—种硫离子的检测方法，所述检测方法包含以下步骤:
[0074]A.配置多组罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球金离子复合溶液:分别将0.5mL浓度为0.4g/L的罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球水溶液与0.05mL浓度为1.9 X 10—5mol/L氯金酸水溶液混合，并加入PH为4.8的0.8mLPBS缓冲溶液，并用浓度为I X 10—4?I X 1^mol.L—1的稀盐酸调节溶液PH为4.5，反应30分钟；
[0075]B.分别向步骤A得到的溶液中加入不同浓度的S2—溶液，S2—溶液的终浓度分别为0.16nmol/L、0.4nmol/L、0.72nmol/L、0.8nmol/L、1.6nmol/L、4nmol/L、6nmol/L、8nmol/L、20nmol/L、36nmol/L、40nmol/L、72nmol/L、80nmol/L、1.6 X 102nmol/L、4.0 X 102nmol/L、6.0X 102nmol/L、8.0 X 102nmol/L、1.6 X 103nmol/L，并用去离子水稀释至5mL，搅拌反应43分钟；
[0076]C.测量上述各组溶液的荧光强度。经测量，荧光强度的变化趋势同实施例UPAu
(III)/RB-CSM体系的荧光强度随着S2—浓度(0.16?36nmol L—O的增加而逐渐降低，当S2一浓度超过36nmol L—1后，体系的荧光强度随着S2—浓度的增大而逐渐回升。
[0077]罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球的制备方法同实施例1。
[0078]实施例5
[0079]—种硫离子的检测方法，所述检测方法包含以下步骤:
[0080]A.配置多组罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球金离子复合溶液:分别将0.5mL浓度为
0.4g/L的罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球水溶液与0.05mL浓度为1.0 X 10—3mol/L氯金酸水溶液混合，并加入PH为5.2的0.5mLPBS缓冲溶液，并用浓度为I X 10—4?I X 1^mol.L—1的稀盐酸调节溶液PH为5.2，反应25分钟；
[0081 ] B.分别向步骤A得到的溶液中加入不同浓度的S2—溶液，S2—溶液的终浓度分别为0.16nmol/L、0.4nmol/L、0.72nmol/L、0.8nmol/L、1.6nmol/L、4nmol/L、6nmol/L、8nmol/L、20nmol/L、36nmol/L、40nmol/L、72nmol/L、80nmol/L、1.6 X 102nmol/L、4.0 X 102nmol/L、6.0X 102nmol/L、8.0 X 102nmol/L、1.6 X 103nmol/L，并用去离子水稀释至5mL，搅拌反应47分钟；
[0082]C.测量上述各组溶液的荧光强度。经测量，荧光强度的变化趋势同实施例UPAu(III)/RB-CSM体系的荧光强度随着S2—浓度(0.16?36nmol L—O的增加而逐渐降低，当S2一浓度超过36nmol L—1后，体系的荧光强度随着S2—浓度的增大而逐渐回升。
[0083]罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球的制备方法同实施例1。
[0084]上述参照实施例对硫离子的检测方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球在检测硫离子中的应用。2.一种硫离子的检测方法，其特征在于，所述检测方法包含以下步骤: A.配置多组罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球金离子复合溶液:分别将罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球水溶液与氯金酸水溶液混合，加入0.5?ImLPBS缓冲溶液，并用稀盐酸调节溶液PH为4.5?5.5，反应20?30分钟； B.分别向步骤A得到的溶液中加入不同浓度的S2 —溶液，所述S2 —溶液的终浓度在0.16nmol/L?1.6umoL/L浓度范围内，并用去离子水稀释至5mL，搅拌反应40?50分钟； C.测量上述各组溶液的荧光强度； 罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球与氯金酸的终浓度分别为0.04g/L和0.19 X 10—6?10 X10—6mol.L—1O3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述氯金酸的终浓度为3.8X 10—V)l/L04.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述PBS缓冲溶液的PH为4.5?5.5。5.根据权利要求2-4任意一项所述的检测方法，其特征在于，所述步骤A中，用IX 10—4?1X10—3Hi0I.L—1浓度的稀盐酸调节溶液PH为5.3。6.根据权利要求2-4任意一项所述的检测方法，其特征在于，所述步骤B中，硫离子溶液的终浓度分别为0.16nmol/L、0.4nmol/L、0.72nmol/L、0.8nmol/L、1.6nmol/L、4nmol/L、6nmol/L、8nmol/L、20nmol/L、36nmol/L、40nmol/L、72nmol/L、80nmol/L、1.6X102nmol/L、4.0X 102nmol/L、6.0 X 102nmol/L、8.0X 102nmol/L、1.6X 103nmol/Lo7.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法具体包含以下步骤: A.配置多组罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球金离子复合溶液:分别将0.5mL浓度为0.4g/L的罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球水溶液与0.05mL浓度为3.8 X 10—4mol/L氯金酸水溶液混合，并加入PH为5.3的0.5mLPBS缓冲溶液，并用浓度为I X 10—4?I X 1^mol.L—1的稀盐酸调节溶液PH为5.3，反应20分钟； B.分别向步骤A得到的溶液中加入不同浓度的S2-溶液，S2-溶液的终浓度分别为0.16nmol/L、0.4nmol/L、0.72nmol/L、0.8nmol/L、1.6nmol/L、4nmol/L、6nmol/L、8nmol/L、20nmol/L、36nmol/L、40nmol/L、72nmol/L、80nmol/L、1.6 X 102nmol/L、4.0 X 102nmol/L、6.0X 102nmol/L、8.0 X 102nmol/L、1.6 X 103nmol/L，并用去离子水稀释至5mL，搅拌反应40分钟； C.测量上述各组溶液的荧光强度。8.根据权利要求2或7所述的检测方法，其特征在于，所述罗丹明B修饰的壳聚糖纳米微球金离子复合溶液的荧光强度随着S2—浓度的增加而逐渐降低，当S2—浓度达到36nmol/L，猝灭效率高达90% ;当S2—浓度超过36nmol L—1后，体系的荧光强度随着S2—浓度的增大而逐渐回升，且当S2—浓度达到I.6ym01 L—1，荧光回升效率高达98 %。
【文档编号】G01N21/64GK105866078SQ201610188101
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年3月24日
【发明人】刘金水, 刘文秀, 高亚芳
【申请人】安徽师范大学