一种肺癌血清标志物及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种肺癌血清标志物，该标志物为异柠檬酸脱氢酶2。异柠檬酸脱氢酶2在肺癌Ⅰ期病人的血清中含量增加，可以对被检者是否患有肺癌进行初步确定。该肿瘤标志物在肺癌Ⅰ期病人手术后血清含量降低，可以作为肺癌病人手术治疗的候选标志物。
【专利说明】
一种肺癌血清标志物及其应用
技术领域
[0001 ]本发明属于生物医学领域，具体涉及一种肺癌血清标志物及其应用。
【背景技术】
[0002]肿瘤标记物是肿瘤细胞产生和释放的某种物质，常以抗原、酶、激素等代谢产物的形式存在于肿瘤细胞内或宿主体液中，根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。肿瘤标记物在临床上主要用于对原发肿瘤的发现、肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断、肿瘤治疗效果的观察和评价以及肿瘤复发和预后的预测等。可通过生物化学反应、放免法、酶免法、电化学发光等方法检测。
[0003]异梓檬酸脱氢酶2(isocitrate dehydrogenase 2，IDH2)是细胞代谢途径中参与三羧酸循环的酶，位于染色体15q26.1，亚细胞定位于线粒体基质。其生理功能是正向催化异柠檬酸氧化产生α_酮戊二酸，同时还原NADP+产生NADPH<JDH2的逆向反应催化α-酮戊二酸产生异柠檬酸，并消耗NADPH产生NADP+。
[0004]近期的研究已报道IDH2突变产生致癌代谢物2-羟基戊二酸，能抑制胶质瘤分化和促进肿瘤形成。IDH2基因敲除小鼠体内的移植瘤形成受到明显抑制，肿瘤血管生成标志物明显减少。其同源蛋白IDH3a诱导HIFla途径的代谢重编程及血管生成促进肿瘤生长。IDHl/2逆向反应时，消耗NADPH，但是其产物苹果酸可转运至胞浆经苹果酸酶产生NADPH，降低细胞的ROS水平，维持细胞氧化还原状态平衡，促进细胞存活。IDH2也可以在低氧条件通过谷氨酰胺代谢经过a-酮戊二酸产生柠檬酸，从而促进细胞增殖和增加细胞活力。
【发明内容】
[0005]本发明的发明人通过临床大样本数据库的查询，发现IDH2的高表达降低肺癌病人的总生存期和无进展生存期，提示IDH2可能参与肺癌的发生及疾病发展过程。进一步使用酶联免疫吸附分析(ELISA)方法对肺癌I期患者的及健康人群血清IDH2含量进行了分析，并比较肺癌切除手术后与手术前患者血清IDH2的含量。发现IDH2在肺癌患者血清中的含量明显增高，且肺癌切除手术后相对手术前的血清IDH2含量降低。因此，血清中的IDH2含量可以用于肺癌的筛查与诊断、手术治疗效果的候选标志物。即，本发明提供了一种肺癌血清标志物，该标志物为IDH2 ο该标志物可用于制备诊断肺癌的药物、治疗肺癌的药物、诊断肺癌的试剂盒以及肺癌诊断芯片。
[0006]总之，IDH2在肺癌I期病人的血清中含量增加，可以对被检者是否患有肺癌进行初步确定。该肿瘤标志物在肺癌I期病人手术后血清含量降低，可以作为肺癌病人手术治疗的候选标志物。
【附图说明】
[0007]图1为实施例1实验结果图:图1a和Ib显示了IDH2表达对应的肺癌病人的总生存期和无进展生存期；
[0008]图2为实施例2实验结果图:图2a显示了IDH2在肺癌患者确诊后手术治疗前与健康人群血清中IDH2的蛋白含量，图2b显示了肺腺癌、肺鳞癌与健康人群血清中IDH2的蛋白含量，图2c显示了肺癌患者手术切除瘤体前与切除后血清中IDH2的蛋白含量。
【具体实施方式】
[0009]实施例1.1DH2表达高低与肺癌病人总生存期和无进展生存期具有关联性
[0010]目前已有包含大量肺癌样本基因表达及其临床信息，如生存期与无进展生存期等的数据库，提供公开的数据供研究者分析。为研究IDH2与肺癌病人的总生存时间与疾病治疗至初次进展时间的关系，
【申请人】调取临床样本数据库中IDH2表达及肺癌病人的总生存期与无进展生存期的数据，进行分析统计。
[0011]实验方法:
[0012]通过查询kmplot数据库(包含1928例肺癌样本)中IDH2表达与生存期数据。采用COX函数分析生存期数据，绘制IDH2表达与Kaplan-Meier生存期曲线，并进行统计学分析。
[0013]实验结果:
[0014]如图1a所示，IDH2高表达降低肺癌病人的总生存期，风险值为1.27 (95 %CI =1.12-1.45)，结果具有统计学差异(P = 0.00023)。如图1b所示，IDH2高表达降低肺癌病人的无进展生存期，风险值为1.37(95%CI = 1.13-1.66)，结果具有统计学差异(P = 0.0014)。
[0015]实施例2.1DH2在肺癌患者与健康人群血清，肺癌患者术后和术前血清有显著差升。
[0016]本部分研究对72例健康人及28例肺癌I期患者样本外周血血清IDH2含量进行检测，其中28例肺癌包括20例腺癌和8例鳞癌样本。28例肺癌患者均采用手术切除肺癌组织的治疗方式，并在手术治疗前和治疗后约7天采集外周血血清，冻存于-80度。健康人群外周血样本冻存于-80度。
[0017]实验方法:
[0018]USCN公司IDH2酶联免疫吸附(ELISA)检测试剂盒测定IDH2在血清中的表达
[0019]1.准备试剂、样品和标准品；
[0020]2.添加100微升样品和标准品至反应孔中，37度孵育2小时；
[0021 ] 3.去除反应孔中液体，加入100微升检测试剂A，37度孵育I小时；
[0022]4.去除反应孔中液体，漂洗液漂洗3次；
[0023]5.加入100微升检测试剂B，37度孵育30分钟；
[0024]6.去除反应孔中液体，漂洗液漂洗5次；
[0025]7.加入90微升底物，37度孵育10-20分钟；
[0026]8.加入90微升终止液，立即450nm读取吸光值。
[0027]实验结果:
[0028]在健康人群，肺癌患者手术治疗前后血清中检测IDH2蛋白含量发现:
[0029]1.肺癌病人血清IDH2含量相对健康人群明显升高(图2a)。
[0030]2.肺癌包括腺癌和鳞癌两大主要类型，IDH2在腺癌和鳞癌血清中的IDH2含量没有明显差异，均相对健康人群升高(图2b)。
[0031 ] 3.肺癌I期病人在手术切除肺癌组织后，血清IDH2含量明显降低(图2c)。
【主权项】
1.一种肺癌血清标志物，其特征在于，所述标志物为异柠檬酸脱氢酶2。2.如权利要求1所述的标志物在制备诊断肺癌药物中的应用。3.如权利要求1所述的标志物在制备治疗肺癌药物中的应用。4.如权利要求1所述的标志物在制备诊断肺癌试剂盒中的应用。5.如权利要求1所述的标志物在制备肺癌诊断芯片中的应用。
【文档编号】G01N33/68GK105929180SQ201610389698
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年6月2日
【发明人】曹亚, 李江江
【申请人】中南大学