一种观察痰液黏蛋白微观结构的光学新方法
【专利摘要】本发明公开了一种痰液制备薄层并利用相差显微镜观察其微观结构的新方法。痰液的微观结构可以反应哮喘等病理过程，现有的技术需要采用冷冻透射电镜才能观察，但这种高端实验装置是目前医院所缺乏的，而且检测过程繁琐。本发明设计并制作一种痰液压膜装置，可将痰液制备成薄膜，随后利用相差显微技术观察痰液的微观结构。实验结果表明，本方法观察的痰液微观结构和采用冷冻电镜观察的痰液微观结构相似。本发明为医院检验科提供了一种简单、快速的痰液微结构观察新方法。
【专利说明】
一种观察痰液黏蛋白微观结构的光学新方法
技术领域
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[0001]本发明专利涉及一种采用光学方法观察痰液中黏蛋白微观结构的方法，具体属于生物样本检测技术领域。
【背景技术】
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[0002]痰液是由黏蛋白、细胞、DNA、微丝等成分构成的混合体，是哮喘、肺结核等呼吸道疾病的重要检测样本，传统检测主要包括痰液的颜色、细胞类型以及杂质等。常规方法是取痰液于洁净的载玻片上，加生理盐水一滴混合均匀，加盖玻片置显微镜下检查(必要时可染色镜检)，也可以采用液基细胞学检测。可发现脓细胞、大量细胞碎片及感染菌。进行痰液的病原微生物培养(包括厌氧菌及霉菌)，还可同时进行药物敏感试验。
[0003]黏蛋白是痰液的主要结构成分，是决定黏液黏度、流动性的主要成分，在哮喘、慢性阻塞性肺疾病等肺部病理条件下，患者痰液中的黏蛋白的数量和微观结构发生变化。但目前在实验室中常用的黏蛋白结构检测方法需要用到冷冻电镜，而这种高端仪器设备是目前医院不具备的设备，从而限制了在临床检验中直接检验痰液中黏蛋白的结构变化。而传统的痰液涂片和液基细胞学检测方法又无法观察痰液中黏蛋白的结构，因此开发便捷的痰液黏蛋白检测新技术具有重要意义。
【发明内容】
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[0004]本发明建立一种利用光学显微镜检测痰液黏蛋白微观结构的方法。
[0005]痰液是一种黏稠度较高的黏液，无法直接在载玻片表面涂布。因此在传统痰液涂片镜检之前通常采用物理或者化学的方法将黏液稀化，这样导致无法观察痰液中黏蛋白的真实结构。本发明专利设计一种新的痰液制片方法，制备获得薄层痰液，并结合相差显微镜的光学技术，从而实现在光学显微镜下观察痰液的微观结构。
[0006]本发明是通过如下方法实现:
[0007]选用洁净的载玻片。为了保证痰液在载玻片表面能够较均匀的分布，需要仔细清洗载波片。
[0008]采用压片装置制备痰液薄层。为了保证在光学显微镜下实时观察痰液结构，需要制备痰液的薄层结构。传统痰液涂片需要将痰液的微观结构破坏，因此无法观察其真实的微观结构;而采用石蜡包埋切片则需要花费。本发明设计并制作一种痰液压片装置，将痰液加载在载玻片表面后，覆盖弹性薄膜，根据粘液弹性模量在按压轴上方放置一定重量砝码(通常为lkg)，静置10分钟。在压制过程中，为了不破坏粘液蛋白的宏观结构，在按压板下贴附一层软橡胶。压制完成后，得到便于显微观察的薄层样本，中间较薄区域即观察区域。
[0009]采用相差显微镜观察。痰液为无色样品，采用普通光学显微镜无法观察其结构，而需要采用相差显微镜进行镜检，采用40倍物镜将物象放大至400倍左右，即可观察痰液微观结构。【附图说明】:
[0010]图1是本发明专利黏液压片装置；
[0011 ]图2是采用本方法观察的黏液微观结构。
【具体实施方式】
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[0012](I)清洗玻璃载玻片:采用洗涤水清洗后流水冲洗6遍，采用纯水和超纯水洗涤两边，置75%乙醇；
[0013](2)收集病人痰液，4°C保存备用；
[0014](3)从75 %乙醇中取出载玻片擦拭干净，将收集获得痰液加入载玻片表面，铺上一层软质薄膜；
[0015](4)采用压片装置将黏液压成薄膜，制备痰液薄层；
[0016](5)采用50%、60%、70%、80%、90%、100%梯度酒精脱水，每次5分钟；
[0017](6)采用光学相差显微镜(X40)观察痰液结构，可以看到黏液在微观层面是由均匀、细长、弯曲、折光性强、轮廓清晰的丝状物形成的网状结构，与文献采用冷冻透射电镜观察结果相似。痰液微观结构的检出，对于肺部相关疾病的诊断及病情观察具有重要意义。
【主权项】
1.本发明建立一种制备痰液薄膜并实现采用相差显微技术观察痰液微观结构的新方法。2.权利要求1利用压片装置将新鲜痰液样本制备成薄层，厚度范围10-500μπι。3.权利要求1利用压片装置制备痰液薄层过程中，要在痰液表面覆盖一层软质薄膜，之后施加一定的压力(局部压强达到10-100kPa)。4.权利要求1利用相差显微技术观察薄层痰液的微观结构。
【文档编号】G01N1/28GK106053165SQ201610321956
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月16日
【发明人】罗明志, 王佳丽, 金阳, 刘磊, 余培丽, 邓林红
【申请人】常州大学