一种食品中2,6?二异丙基萘残留量的检测方法
【专利摘要】本发明涉及到一种食品中2,6?二异丙基萘残留量的检测方法，属于食品安全检测技术领域。方法包括样品的制备、样品的前处理、样品检测确证和检测结果的计算与表述，其中对于低脂肪含量食品样品的提取采用二氯甲烷和正己烷混合液匀浆提取，浓硫酸去除杂质，硅胶分散固相萃取净化；对于高脂肪含量食品样品的提取采用乙腈匀浆提取，丙酮复溶，正己烷转溶后以浓硫酸去除杂质，硅胶分散固相萃取净化。本发明的方法具有分析时间短、效率高、稳定性好等诸多优点，能满足食品中2,6?二异丙基萘的快速检测要求；同时，在残留物质检测方法学考察的指标方面达到和严格于认监委提出的制定标准要求，可以成为行业标准方法的备选方案。
【专利说明】
一种食品中2,6-二异丙基萘残留量的检测方法
技术领域
[0001] 本发明属于食品安全检测技术领域，更具体涉及到一种食品中2,6_二异丙基萘残 留量的检测方法。
【背景技术】
[0002] 2,6_ 二异丙基萘（2,6-DIPN)，分子式为:C16H2〇，CAS 登记号：24157-81-1，是一种可 用于制取高级聚酯材料和液晶聚合物的重要化合物，在食品相关领域中常用于食品接触包 装材料，其分子结构式见如下（I)式。
[0004] 由于该物质极性较弱，易于通过摄入含脂肪食品进入人体并且在人体内富集，给 人们生命健康带来危害。目前，日本已将猪肉、牛肉及其他食品中2,6_二异丙基萘残留限量 纳入肯定列表;我国台湾地区也对马铃薯中2，6-二异丙基萘最大残留限量值设置为0.5mg/ kg〇
[0005] 当前，我国缺乏较为全面的食品中这类物质检测标准。可参考的文献报道检测方 法缺乏。目前的相关现有技术主要有以下两项：（1)中华人民共和国出入境检验检疫行业标 准SN/T2912-2011《出口乳及乳制品中多种拟除虫菊酯农药残留量的检测方法气相色谱-质 谱法》，其中对含乳及其制品中目标物以乙腈或乙腈水溶液为提取溶剂，采用高速匀浆方式 提取，应用C 18固相萃取和弗罗里硅土固相萃取柱两次净化提取物，以气相色谱-质谱联用仪 分析；（2)专利申请号为201510769298.7的《食品中2，6-二异丙基萘残留量的检测方法》，该 专利申请中披露了样品采用正己烷超声提取后，对不含油样品采取直接进样分析;对含油 样品通过葡萄糖凝胶色谱(GPC)分离净化，提取液经浓缩定容后以气相色谱-质谱联用仪分 析。
[0006] 上述的现有技术虽然可以解决部分2,6_二异丙基萘残留量的检测问题，但均存在 一定的缺陷，其中标准号为SN/T 2912-2011的标准中采用双重固相萃取技术对样品提取液 进行净化，前处理操作过程复杂、耗时长、效率低、不适应快速检测的要求，同时使用双重固 相萃取柱会明显增加检测成本。申请号为201510769298.7的文件披露的方法，采用正己烷 提取目标物，势必会共萃取出大量的非极性和弱极性物质，将给下一步的净化处理带来巨 大压力。该方法在后续处理中对不含有样品采用直接进样分析，但样品是否含油判断困难， 且由于任何样品中均含有部分脂肪、脂类等低极性成分，采用这种方式进样分析势必会将 该类杂质引入色谱质谱系统，对仪器及色谱柱造成污染和损害；同时，该方法在后续的处理 中对含油样品采用葡萄糖凝胶色谱(GPC)分离净化，此种净化方法存在需要配备昂贵的仪 器设备、有机溶剂消耗量巨大、样品前处理周期长、效率低下、前处理成本显著增加等诸多 不足。
[0007] 针对当前缺乏覆盖食品基质面广的2,6_二异丙基萘残留量检测方法，以及上述现 有技术前处理操作复杂繁琐、效率低下、检测成本高且可能对色谱质谱系统和色谱柱带来 损害的问题，本发明开发出能满足快速检测食品中2,6_二异丙基萘残留量的气相色谱-质 谱联用检测方法。方法所规定的基质范围满足国内外的要求，检出限达到国内外设置的限 量要求，符合方法学考察要素，具有良好的适用性、稳定性和可靠性。本发明可以较好地解 决检测机构和监管部门对食品中2,6_二异丙基萘残留量检测标准方法缺乏的问题，为强化 行业监管，促进技术进步，保障我国相关产品质量提供技术支撑。
【发明内容】
[0008] 为了解决好当前缺乏食品中2,6_二异丙基萘残留量的检测方法，以及现有技术的 不足，本发明提出了一种食品中2,6_二异丙基萘残留量的检测方法。
[0009] 本发明是通过以下技术方案来解决上述技术问题。
[0010] 一种食品中2,6_二异丙基萘残留量的检测方法，包括样品的制备、样品的前处理、 样品检测确证和检测结果的计算与表述，其中：
[0011] (1)对于低脂肪含量食品样品的提取：向已称样的离心管中加入氯化钠，无水硫酸 钠，添加二氯甲烷和正己烷混合提取溶液，高速匀浆提取，离心，于另一具塞离心管中收集 全部上清液，添加浓硫酸，涡旋，离心，吸去底层溶液，向离心管中添加硅胶和无水硫酸钠， 涡旋，转速离心，取全部上清液旋转蒸发至干，定容，过滤膜后待分析；
[0012] (2)高脂肪含量食品样品的提取：向已称样的离心管中加入氯化钠，无水硫酸钠， 添加乙腈溶液，高速匀浆提取，离心，收集全部上清液，旋转蒸发近干，向浓缩瓶中加入丙酮 复溶后蒸干，以正己烷分三次将浓缩瓶中残留物转溶至具塞离心管中，向离心管中添加浓 硫酸，涡旋，离心，吸去底层溶液，向离心管中添加硅胶和无水硫酸钠，涡旋，转速离心，取全 部上清液旋转蒸发至干，定容，过滤后待分析。
[0013]所述的食品中2，6-二异丙基萘残留量的检测方法中称样量为2.00~4.00g，精确 至0.001 g;
[0014] 所述的食品中2,6_二异丙基萘残留量的检测方法中低脂肪含量食品为脂肪含量 低于或等于15%，尚脂肪含量食品为脂肪含量尚于15%。
[0015] 所述的食品中2，6-二异丙基萘残留量的检测方法中加入氯化钠的量为1.0~ 2.0g，无水硫酸钠的量为2.0~4.0g，硅胶为1.0~2.0g，其中硅胶为分析纯，粒径45~75mi。
[0016] 所述的食品中2,6_二异丙基萘残留量的检测方法中低脂肪食品提取溶液为体积 比1:1的二氯甲烷和正己烷混合溶液，用量为30~40mL;高脂肪含量食品提取溶液为乙腈， 用量为30~40mL。
[0017] 所述的食品中2,6-二异丙基萘残留量的检测方法中高速匀浆转速为10000~ 12000r/mim，离心转速为2000~4500r/min，离心时间3~5min，祸旋时间为1~3min，旋转蒸 发温度为40~50°C，过滤膜孔径为0.22~0.45_。
[0018]所述的食品中2,6-二异丙基萘残留量的检测方法中浓硫酸加入量为2.0~3. OmL， 丙酮用量为10~20mL，定容溶剂为正己烷、甲苯或二甲苯，定容体积为2. OOmL。
[0019] 所述的食品中2,6_二异丙基萘残留量的检测方法中，对于高脂肪含量食品所用转 溶正己烷用量为20~30mL，分三次溶解浓缩瓶中残渣后转溶至具塞离心管中。
[0020] 本发明的优点在于：
[0021] (1)本发明以食品为检测基质，提供了一种食品中2,6_二异丙基萘残留量检测的 气相色谱-质谱联用分析方法，方法具有分析时间短、效率高、稳定性好等诸多优点，能满足 食品中2,6_二异丙基萘残留量的快速检测需求;同时，该方法在检测限、重现性等指标方面 均达到和严格于认监委提出的制定标准要求，完全满足方法学考察要求，可以成为行业标 准方法的备选方案。
[0022] (2)本发明根据2,6_二异丙基萘分子结构稳定，能够耐受浓硫酸的特点，采用浓硫 酸磺化法去除样品中的蛋白质、脂肪等共提取物，净化方式简便、快捷、费用低廉；
[0023] (3)本发明根据样品的脂肪含量不同采用不同的提取溶剂进行分类处理，有效降 低提取溶液中脂肪的含量，为使用硫酸磺化净化能够取得好的净化效果提供了保障；
[0024] (4)采用硅胶去除正己烷中的残余酸性物质及硫酸磺化残余物，可以减少此类杂 质对色谱系统的损害。
【附图说明】
[0025]图1是2,6_二异丙基萘标准溶液的总离子流图，浓度为10mg/L;
[0026]图2是2,6_二异丙基萘标准溶液的质谱图，浓度为10mg/L;
[0027] 图3是不同样品基质的净化效果图，其中A为空白实验，B为加标鳗鱼样品（10mg/ kg)，C为空白奶粉样品，D为加标奶粉样品（10mg/kg)，E为标准溶液(10mg/kg)。
【具体实施方式】
[0028] 为进一步公开而不是限制本发明，以下结合实例对本发明作进一步的详细说明。 [0029]本发明实施例中所涉及到的试剂药品如下：
[0030]除非另有规定外，试剂均为分析纯以上试剂乙腈、二氯甲烷、正己烷:色谱纯。2,6_ ^?异丙基奈标准品：纯度大于等于98.0%。
[0031] 硅胶:分析纯，粒径45~75_。
[0032] 实施例1
[0033]样品基质为鳗鱼(脂肪含量10.8g/100g，脂肪含量低于15%)
[0034] (1)样品的制备和称样
[0035] 试样制备：固态样品取有代表性样品粉碎、混匀，装入洁净的容器内，密闭，标明标 记，低温保存。
[0036]称样：于50mL的具塞塑料离心管中准确称取样品4.00g，精确至O.OOlg，待进行前 处理。
[0037] (2)样品的前处理
[0038]向上述已称样的离心管中加入1.0g氯化钠，4.0g无水硫酸钠，添加30mL二氯甲烷 和正己烧混合溶液(V/V=l/1，体积比），以10000r/mim高速勾衆提取lmim，转速4500r/min 离心3min，于另一 50mL离心管中收集全部上清液，添加2. OmL浓硫酸，涡旋lmin，转速4500r/ min离心3min，吸去底层溶液，向离心管中添加1. Og硅胶和2. Og无水硫酸钠，祸旋lmin，转速 4500r/min离心3min，取全部上清液于40°C下旋转蒸发至干，加入2 . OOmL正己烧定容，过 0.22wii滤膜后待分析。
[0039] (3)色谱-质谱检测条件
[0040] a)色谱柱:DB-5MS毛细管柱，30mX0.25mm(内径）X0.25M1。
[0041 ] b)升温程序:60°C保持lmin，以12°C/min速率升温至200°C，保持4min。
[0042] c)进样 口温度：26(TC。
[0043] d)色谱质谱接口温度:280°C。
[0044] e)电离方式:EI(70ev)。
[0045] f)离子源温度:230°C。
[0046]〖)载气:氦气，纯度大于99.999%，流速1.〇11117111111。
[0047] h)进样方式:不分流；
[0048] 1)进样量：1此。
[0049] j)测定方式:选择离子监测(SB〇。
[0050] k)选择监测离子(m/z): 197.1、212.1、165. .1、141.0(离子丰度比值：100-50-12-12)；
[0051 ] 1)溶剂延迟:8min。
[0052] (4)样品检测及确证
[0053] a)标准工作曲线的配制：
[0054] 取适量的2,6-二异丙基萘标准物质，用正己烷定容至50.01^配制成100011^/1标准 储备液，于-4 °C冰箱中保存备用。
[0055] 分别移取1000mg/L的标准储备液以正己烷溶液逐级稀释至浓度为0.01mg/L、 0 ? 02mg/L、0 ? 10mg/L、0 ? 20mg/L、1 ? 00mg/L的2，6-二异丙基萘标准工作液。分别准确吸取lyL 注入气相色谱-质谱仪进行分析，按照上述的色谱-质谱检测条件(步骤3)进行试验。以标准 物质的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线。
[0056] b)定量和定性分析
[0057]根据最终分析待测液中被测物含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液，对标准 工作溶液与样液等体积参插进样测定，标样工作溶液和待测样液中2，6-二异丙基萘含量的 测定的响应值均应在仪器检测的线性范围内。
[0058]如果样液与标准工作溶液的选择离子色谱图中，在相同保留时间（±0.05min)有 色谱峰出现，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选离子均出现，所选择离子的丰度比与 标准品对应离子的丰度比，其值在允许范围内，见表1。根据定量离子对目标物进行外标法 定量。在优化的检测条件下，目标物的总离子流色谱图和全扫描质谱图参见图1和图2。 [0059]表1使用定性气相色谱-质谱时相对离子丰度最大容许误差
[0061 ] c)空白实验
[0062]除不称取试样外，其余均按前处理步骤进行。
[0063] (5)检测结果的计算与表述
[0064]用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中目标物残留量：
[0066]式中：
[0067] X一一试样中目标物的残留量，单位为毫克每千克(mg/kg);
[0068] S一一样液中目标物的色谱峰面积；
[0069] Ss一一标准工作液中目标物的色谱峰面积；
[0070] c一一标准工作液中目标物的浓度，单位为微克每毫升(yg/mL);
[0071] V一一样液最终定容体积，单位为毫升(mL);
[0072] m 最终样液所代表的试样质量，单位为克(g);
[0073] (6)测定鳗鱼样品的线性范围、线性方程、相关系数、检出限和定量限见表2;
[0074]表2鳗鱼中2,6_二异丙基萘的线性方程、相关系数、线性范围、检出限和定量限
[0075]
[0076] (7)在10、20和100yg/kg三个加标浓度水平下，每个水平测试六次的回收率和精密 度如表3所示：
[0077] 表3鳗鱼中2,6_二异丙基萘的加标回收率和精密度(n = 6)
[0079] 实施例2
[0080]样品基质为全脂奶粉(脂肪含量不低于26.0g/100g，脂肪含量高于15%)
[0081] (1)样品的制备和称样
[0082]试样制备:粉状样品混匀。装入洁净的容器内，密闭，标明标记，低温保存。
[0083]称样：于50mL的具塞塑料离心管中准确称取样品2.00g，精确至0.001g，待进行前 处理。
[0084] (2)样品的前处理
[0085]向上述已称样的离心管中加入1.0g氯化钠，4.0g无水硫酸钠，添加30mL乙腈溶液， 以12000r/mim高速匀浆提取lmim，转速4500r/min离心5min，收集全部上清液，于鸡心瓶中 40 °C下旋转蒸发至干，向鸡心瓶中加入20mL丙酮复溶后蒸干，以30mL正己烷分三次，每次 1 OmL将鸡心瓶中残留物转溶至50mL具塞离心管中，向离心管中添加3 . OmL浓硫酸，涡旋 lmin，转速4500r/min离心3min，吸去底层溶液，向离心管中添加1.0g硅胶和2.0g无水硫酸 钠，涡旋lmin，转速4500r/min离心3min，取全部上清液于40 °C下旋转蒸发至干，加入2.00mL 甲苯定容，过0 ? 22mi滤膜后待分析。
[0086] (3)色谱-质谱检测条件
[0087] a)色谱柱:DB-5MS毛细管柱，30mX0.25mm(内径）X0.25M1。
[0088] b)升温程序:60°C保持lmin，以12°C/min速率升温至200°C，保持4min。
[0089] c)进样 口温度:260°C。
[0090] d)色谱质谱接口温度:280°C。
[0091] e)电离方式:EI(70ev)。
[0092] 〇离子源温度：230。(：。
[0093] g)载气：氦气，纯度大于99.999%，流速1.0mL/min。
[0094] h)进样方式:不分流；
[0095] 1)进样量：1此。
[0096] j)测定方式:选择离子监测(SB〇。
[0097] k)选择监测离子(m/z): 197.1、212.1、165. .1、141.0(离子丰度比值：100-50-12-12)；
[0098] 1)溶剂延迟:8min。
[0099] (4)样品检测及确证
[0100] a)标准工作曲线的配制：
[0101] 取适量的2,6_二异丙基萘标准物质，用正己烷定容至50.01^配制成1000 11^/1标准 储备液，于-4 °C冰箱中保存备用。
[0102] 分别移取1000mg/L的标准储备液以正己烷溶液逐级稀释至浓度为0.01mg/L、 0 ? 02mg/L、0 ? 10mg/L、0 ? 20mg/L、1 ? 00mg/L的2，6-二异丙基萘标准工作液。分别准确吸取lyL 注入气相色谱-质谱仪进行分析，按照上述的色谱-质谱检测条件进行试验。以标准物质的 浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线。
[0103] b)定量和定性分析
[0104]根据最终分析待测液中被测物含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液，对标准 工作溶液与样液等体积参插进样测定，标样工作溶液和待测样液中2，6-二异丙基萘含量的 测定的响应值均应在仪器检测的线性范围内。
[0105]如果样液与标准工作溶液的选择离子色谱图中，在相同保留时间（±0.05min)有 色谱峰出现，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选离子均出现，所选择离子的丰度比与 标准品对应离子的丰度比，其值在允许范围内，见表1。根据定量离子对目标物进行外标法 定量。在优化的检测条件下，目标物的总离子流色谱图和全扫描质谱图参见图1和图2。
[0106] c)空白实验
[0107] 除不称取试样外，其余均按前处理步骤进行。
[0108] (5)检测结果的计算与表述
[0109]用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中目标物残留量：
[0111]式中：
[0112] X一一试样中目标物的残留量，单位为毫克每千克(mg/kg);
[0113] S一一样液中目标物的色谱峰面积；
[0114] Ss一一标准工作液中目标物的色谱峰面积；
[0115] c一一标准工作液中目标物的浓度，单位为微克每毫升(yg/mL);
[0116] V--样液最终定容体积，单位为毫升(mL);
[0117] m 最终样液所代表的试样质量，单位为克(g);
[0118] (6)测定全脂奶粉样品的线性范围、线性方程、相关系数、检出限和定量限见表4;
[0119]表4全脂奶粉中2,6_二异丙基萘的线性方程、相关系数、线性范围、检出限和定量 限 「01201
[0121 ] (7)在10、20和100yg/kg三个加标浓度水平下，每个水平测试六次的回收率和精密 度如表5所示：
[0122 ]表5全脂奶粉中2，6-二异丙基萘的加标回收率和精密度(n = 6)
[0124]以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能 因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员而 言，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些均属于本发明的保护 范围，因此本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【主权项】
1. 一种食品中2,6-二异丙基萘的检测方法，包括样品的制备、样品的前处理、样品检测 确证和检测结果的计算与表述，其特征在于： (1) 对于低脂肪含量食品样品的提取：向已称样的离心管中加入氯化钠，无水硫酸钠， 添加二氯甲烷和正己烷混合提取溶液，高速匀浆提取，离心，于另一具塞离心管中收集全部 上清液，添加浓硫酸，涡旋，离心，吸去底层溶液，向离心管中添加硅胶和无水硫酸钠，涡旋， 转速离心，取全部上清液旋转蒸发至干，定容，过滤膜后待分析； (2) 高脂肪含量食品样品的提取：向已称样的离心管中加入氯化钠，无水硫酸钠，添加 乙腈溶液，高速匀浆提取，离心，收集全部上清液，旋转蒸发近干，向浓缩瓶中加入丙酮复溶 后蒸干，以正己烷分三次将浓缩瓶中残留物转溶至具塞离心管中，向离心管中添加浓硫酸， 涡旋，离心，吸去底层溶液，向离心管中添加硅胶和无水硫酸钠，涡旋，转速离心，取全部上 清液旋转蒸发至干，定容，过滤后待分析。2. 根据权利要求1所述的食品中2,6_二异丙基萘的检测方法，其特征在于，所述的称样 量为2.00~4. OOg，精确至0.0 Olg。3. 根据权利要求1所述的食品中2,6_二异丙基萘的检测方法，其特征在于，所述的低脂 肪含量食品为脂肪含量低于或等于15%，高脂肪含量食品为脂肪含量高于15%。4. 根据权利要求1所述的食品中2,6_二异丙基萘的检测方法，其特征在于，所述的加入 氯化钠的量为1.0~2.0g，无水硫酸钠的量为2.0~4.0g，硅胶为1.0~2.0g，其中硅胶为分 析纯，粒径45~75μηι。5. 根据权利要求1所述的食品中2,6_二异丙基萘的检测方法，其特征在于，所述的低脂 肪食品提取溶液为体积比1:1的二氯甲烷和正己烷混合溶液，用量为30~40mL;高脂肪含量 食品提取溶液为乙腈，用量为30~40mL。6. 根据权利要求1所述的食品中2,6_二异丙基萘的检测方法，其特征在于，所述的高速 勾楽·转速为10000~12000r/mim，离心转速为2000~4500r/min，离心时间3~5min，祸旋时 间为1~3min，旋转蒸发温度为40~50°C，过滤膜孔径为0.22~0.45μηι。7. 根据权利要求1所述的食品中2,6_二异丙基萘的检测方法，其特征在于，所述的浓硫 酸加入量为2.0~3. OmL，丙酮用量为10~20mL，定容溶剂为正己烷、甲苯或二甲苯，定容体 积为 2.00mL。8. 根据权利要求1所述的食品中2,6_二异丙基萘的检测方法，其特征在于，对于高脂肪 含量食品所用转溶正己烷用量为20~30mL，分三次溶解浓缩瓶中残渣后转溶至具塞离心管 中。
【文档编号】G01N30/06GK106053694SQ201610463156
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月23日
【发明人】丁立平, 蔡春平, 陈学灿, 吴文凡
【申请人】福清出入境检验检疫局综合技术服务中心