一种金不换药材的鉴别方法
【技术领域】
[0001 ]本发明主要涉及一种金不换药材质量检测方法。
【背景技术】
[0002] 广西特色药材金不换是千金藤属防己科植物金不换块根，又名地不容、山乌龟，主 要分布于广西、云南、四川等地，生长于海拔480米的地区，见于石灰岩地区的石山上。近几 年金不换市场需求量持续增加，野生资源逐年减少，人工栽培发展缓慢，使得金不换资源蕴 藏量和产量都在大幅下降，导致市场上出现了很多伪劣品，给金不换质量和用药安全性及 有效性带来了很大的冲击，已成为制约金不换药材系列开发的瓶颈。目前针对该药材的传 统的形态特征和理化特性的鉴别方法具有一定的局限性，不足以从整体上控制金不换质 量，作为一味临床常用中药，其真伪优劣受诸多因素的影响，因此有必要建立一种科学的质 量检测方法对金不换质量进行评价。
【发明内容】
[0003] 本发明目的在于提供一种金不换药材的质量检测方法。
[0004] 本发明包括以下步骤： (1) 建立金不换的标准指纹图谱，方法如下 a.对照品洛液的制备： 精密称取延胡索乙素适量，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成延胡索乙素浓度为 lmg/mL的溶液； b. 金不换药材标准品溶液的制备：取金不换药材粉末（过60目筛）精密称定2g，置于 100ml锥形瓶中，精密加入50-60%乙醇溶液100mL，称定重量，超声15min后，回流提取60min， 放冷，用50-60%乙醇补足减失的重量，用0.45μπι微孔滤膜滤过，取续滤液，即得； c. 色谱条件： 色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈(Α)- 0.5%磷酸水溶液 (Β)，梯度洗脱，体积比：0_8min，A为20%;40min，A升至30%;60min，A升至45%;流速：1 .OmL/ min;柱温:25°C;检测波长:282nm，理论塔板数按延胡索乙素计不低于4000; d. 测定方法:精密吸取金不换药材标准品溶液及对照品溶液各10此，分别注入液相色 谱仪，制定金不换的标准指纹图谱； 所述一点红标准指纹图谱中，共有峰有13个，以延胡索乙素的色谱峰的相对保留时间 和相对峰面积为1，计算其他峰的相对保留时间和相对峰面积； (2) 以上述相同的方法测定待测金不换样品指纹图谱； (3) 将待测金不换样品指纹图谱与金不换标准指纹图谱对比，筛选符合一点红标准指 纹图谱的一点红药材。
[0005] 本发明的优点 由于金不换成分复杂，富含多种有生物活性的生物碱成分，现有技术或方法无法满足 对金不换进行多成分质量检测的需求，本发明所要解决的技术问题在于通过金不换药材的 多成分质量检测，可为全面和综合评价该药材提供重要的判断依据，保证质量稳定和临床 疗效安全可靠。本发明可用于金不换药材的多成分质量检测和控制，为全面和综合评价该 药材提供重要的判断依据。本发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现性号、易于掌握的优 点，解决了金不换成分复杂而传统法局限性以及质量难以把控的技术问题，提供了一种准 确度高，操作简便快速，成本低廉的检测方法，具有良好的应用前景和经济效益。
[0006]
【附图说明】： 附图1.延胡索乙素 HPLC图（参照物） 附图2.金不换的标准指纹图谱 附图3.金不换的指纹图谱(广西区食品药品检验所） 附图4.市售伪金不换样品的指纹图谱
【具体实施方式】： 下面结合实施例对本发明做进一步说明，下述实施例仅用于说明本发明，而非对本发 明进行限制。
[0007] 实施例1: 标准指纹图谱的建立 1仪器与试药 1.1仪器 高效液相色谱仪:岛津LC-20A，配置紫外检测器，色谱工作站，日本岛津公司;超纯水制 造系统：成都越纯科技有限公司；数控超声波清洗器:KQ-500DB型，昆山市超声仪器有限公 司；电热恒温鼓风干燥箱：101-1-S，上海跃进医疗器械厂；低温冷却液循环栗：DLSB-5/ 20,郑州长城科工贸有限公司；循环水式真空栗：SHZ-D (III)，巩义市英峪予华仪器厂；电 热恒温水浴锅：GSY-n不锈钢，北京市医疗设备厂;真空干燥箱：D2F-250,郑州长城科工贸 有限公司；电子分析天平：ME215S，北京赛多丽斯仪器系统有限公司；多功能粉碎机：ST-02A 100g，永康市帅通工具有限公司。 1.2试剂与药品 金不换:购于广西境内及周边多个药材市场，为广西医科大学附属肿瘤医院刘宗河教 授所鉴定为防己科千金藤属植物广西地不容Stephania kwangsiensis H.S.Lo、小花地不 容Stephania micrantha Η. S . Lo et M. Yang、桂南地不容Stephania kwangsiensis H.S.Lo et M.Yang的干燥块根，30份金不换药材来源情况见表1。
[0008] 对照品：延胡索乙素，批号110726-201414,含测用，中国食品药品检定研究院。
2方法 2.1色谱条件和系统适用性试验 采用Hypersi 10DS2 5μηι(4.6mmX250 mm)色谱柱，以乙腈-0.5%磷酸水溶液为流动相， 梯度洗脱：〇_8min，A为20%; 40min，A升至30%; 60min，A升至45%;流速：1 · OmL/min;柱温：25 °C;检测波长:282nm，进样量:10yL，所有色谱峰达到基线分离，供试品溶液中延胡索乙素峰 保留时间与相应对照品峰保留时间一致，且在60分钟内完成。理论塔板数按延胡索乙素计 不低于4000,均与相邻杂峰分离度>1.5。
[0010] 2.2对照品溶液制备 精密称取延胡索乙素22.50mg置于10mL容量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得 备液。
[0011] 精密量取备液3. OOmL置于10mL容量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照 品溶液。延胡索乙素浓度为0.6750mg/mL。
[0012] 2.3供试品溶液制备 取金不换药材粉末(过60目筛)精密称定2g，置于100ml锥形瓶中，精密加入50%乙醇溶 液100mL，称定重量，超声15min后，回流提取60min，放冷，用50%乙醇补足减失的重量，用 0.45μπι微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
[0013] 2.4精密度试验 取同一份供试品溶液，按上述色谱条件，进样l〇yL，l d内连续进样6次，计算共有峰 相对保留时间及峰面积比值，精密度RSD均小于3.0%，表明精密度良好。
[0014] 2.5稳定性试验 同一供试品溶液，间隔不同时间测定，在〇h、2h、4h、8h、1 Oh、12h、24h各进样1 OyL，按上 述色谱条件测定峰面积，计算共有峰相对保留时间及峰面积比值，稳定性RSD均小于3.0%， 表明供试品溶液在24h内稳定。
[0015] 2.6重复性试验 取同一批样品6份，制备供试品溶液，进样量10yL，按上述色谱条件测定峰面积，计算共 有峰相对保留时间及峰面积比值，RSD均小于3.0%，表明方法重复性较好。
[0016] 2.7 HPLC指纹图谱获取 2.7.1 30批金不换药材HPLC指纹图谱获取 取30批金不换药材粉末，精密称定，编号S1~S30，按"2.1.2"项方法操作制备供试品溶 液，进样量l〇yL，按"2.2"项色谱条件进行测定，记录60min内供试品溶液色谱图；通过比较 分析，以延胡索乙素(S)为参照物，有13个峰是30批金不换药材的共有峰，如图3。
[0017] 2.7.2共有峰的相对保留时间及峰面积比值 以10批广西地不容药材HPLC指纹图谱为例。样品S1~S10为广西地不容药材，以延胡索 乙素(S)为参照物，计算各共有峰的相对保留时间及峰面积比值，10批广西地不容药材指纹 图谱共有峰相对保留时间，见表2，10批广西地不容药材指纹图谱共有峰峰面积比值，见表 3〇
2.8指纹图谱分析和评价 通过采用药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004A版），对30批 金不换样品（包括广西地不容、小叶地不容、桂南地不容)指纹图谱进行相似度分析，计算相 似度，对金不换指纹图谱进行分析评价，如表4。对照品如图1所示，药材共有峰如图2所示。
[0019] 3.结果 30批金不换药材HPLC指纹图谱共有峰有13个，从表4数据可看到，30批金不换药材指纹 图谱中主要峰群的整体图貌于对照图谱基本一致。
[0020] 实施例2 金不换对照药材指纹图谱的测定方法同金不换药材标准指纹图谱测定方法，采样时间 为60min。以实施例1中获得的金不换药材标准指纹图谱及其共有模式作为鉴别基础，比较 两者的差异。结果显示:广西区食品药品检验所提供的金不换对照药材指纹图谱（图3)与标 准指纹图谱并无较大的差异，见表5。
[0021 ] 实施例3 市售金不换的测定方法同金不换标准指纹图谱测定方法，采样时间为60min。以实施例 1中获得的金不换药材标准指纹图谱及其共有模式作为鉴别基础，比较两者的差异。结果显 示:市售金不换指纹图谱(见图4)与金不换标准指纹图谱有较大的差异，其中主要峰数量、 主要峰相对保留时间、相对峰面积等均相差较大，并且有多个共有峰未出现，见表6。
【主权项】
1. 一种金不换药材的鉴别方法，其特征在于包括如下步骤： (1) 建立金不换的标准指纹图谱，方法如下 a.对照品洛液的制备： 精密称取延胡索乙素适量，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成延胡索乙素浓度为 lmg/mL的溶液； b. 金不换药材标准品溶液的制备： 取金不换药材粉末(过60目筛)精密称定2g，置于100ml锥形瓶中，精密加入50-60%乙醇 溶液100mL，称定重量，超声15min后，回流提取60min，放冷，用50-60%乙醇补足减失的重量， 用0.45μπι微孔滤膜滤过，取续滤液，即得； c. 色谱条件： 色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈(Α)- 0.5%磷酸水溶液 (Β)，梯度洗脱，体积比：0_8min，A为20%;40min，A升至30%;60min，A升至45%;流速：1 .OmL/ min;柱温:25°C;检测波长:282nm，理论塔板数按延胡索乙素计不低于4000; d. 测定方法： 精密吸取金不换药材标准品溶液及对照品溶液各l〇yL，分别注入液相色谱仪，制定金 不换的标准指纹图谱； 所述一点红标准指纹图谱中，共有峰有13个，以延胡索乙素的色谱峰的相对保留时间 和相对峰面积为1，计算其他峰的相对保留时间和相对峰面积； (2) 以上述相同的方法测定待测金不换样品指纹图谱； (3) 将待测金不换样品指纹图谱与金不换标准指纹图谱对比，筛选符合一点红标准指 纹图谱的一点红药材。
【专利摘要】本发明公开了一种金不换药材的质量检测方法，包括a建立金不换的标准指纹图谱；b测定待测金不换样品指纹图谱；c将待测金不换样品指纹图谱与金不换标准指纹图谱对比，筛选符合一点红标准指纹图谱的一点红药材；本发明所要解决的技术问题在于通过金不换药材的多成分质量检测，可为全面和综合评价该药材提供重要的判断依据，保证质量稳定和临床疗效安全可靠。本发明可用于金不换药材的多成分质量检测和控制，为全面和综合评价该药材提供重要的判断依据。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105606716
【申请号】CN201510568612
【发明人】王捷, 蒋伟哲, 叶勇, 苏志恒, 蒋敏捷, 韦炜, 巫玲玲
【申请人】广西医科大学制药厂
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2015年9月9日