【生产厂家】苏州新波生物技术有限公司
【批准文号】国药准字S20060096
【剂 型】检测试剂盒
【规 格】96人份
【医保类型】
【国家基本药物】否
【英文名】Diagnostic Kit for Alpha-feto-protein(AFP)（Immunofluorometric Assay）
【汉语拼音】Jiataidanbai dingliangjiance Shijihe（Mianyi Yingguangfa）
【正文】
【用途】
定量检测人血中的AFP，用于原发性肝细胞癌及胎儿神经管发育异常(如脊柱裂、脑积水)的辅助诊断。
【试验原理】
AFP是胚胎的重要血清成分，分子量为70kD，是一条多肽链糖蛋白，由590个氨基酸组成，含糖量4%。在正常妊娠过程中，少量AFP可通过胎盘进入母体内，使母亲血清AFP浓度逐渐升高，当胎儿低氧症、胎儿危急或死亡时，母体血清AFP浓度会很高。检测母体血清AFP浓度可用于产前诊断胎儿有无遗传缺陷及畸形存在。
AFP的检测也是应用最早、最常用的肿瘤标志物之一。对于原发性肝癌，AFP主要应用于:
1)原发性肝癌的辅助诊断；
2)与其他肝脏疾病相鉴别；
3)协助判断肝癌的分化程度:AFP的含量与肿瘤大小、癌细胞的分化程度有一定的关系。
4)对肝癌患者病情和预后的判断。
本试剂盒采用双抗体夹心两步法。鼠抗人AFP单抗包被于96孔荧免板，校准品或样品中的AFP与包被单抗于微孔内表面发生免疫反应，洗涤后加入铕离子(Eu3+)标记的单抗，于微孔表面形成夹心免疫复合物。微孔表面免疫复合物中的Eu3+被荧光增强液解离后形成稳定的荧光配合物，荧光强度与校准品或样品中的AFP浓度呈正比例，通过剂量－反应曲线可得出样品中AFP浓度。
【主要组成成份】
1.
包被反应板
12
孔
×
8
条
包被有鼠抗人AFP单克隆抗体。
2.
铕标记物
1.0
mL
×
1
瓶
保存于Tris缓冲液中的Eu3+标记鼠抗人AFP单克隆抗体。
3.
分析缓冲液
50
mL
×
1
瓶
Tris缓冲液，含一定量的BSA、鼠IgG、染料、防腐剂等。
4.
浓缩洗液(25×)
40
mL
×
1
瓶
Tris缓冲液，含一定量的Tween-20、防腐剂等。25×稀释后使用。
5.
增强液
30
mL
×
1
瓶
直接使用。
6.
甲胎蛋白校准品
1.0
mL
×
6
瓶
保存于Tris缓冲液中的人AFP，含一定量的BSA、防腐剂等。可直接使用。该校准品经AFP国家标准品标定，浓度见说明书附页。
7.
自封袋
1
个
8.
200μL吸头
20
支
9.
说明书
1
份
【适用仪器】
上海新波生物技术有限公司的Anytest 2000或Wallac公司的1234、1420等时间分辨荧光测定仪。
【样本要求】
使用血清或以肝素、EDTA、柠檬酸盐作抗凝剂的血浆。2～8℃条件下样本可保存2天，–20℃可保存更长时间。样本避免反复冻融。总胆红素(0.32mg/mL)、血红蛋白(180mg/mL)、甘油三酯(20.84mmol/L)对本方法无干扰。
【试验方法】
1. 试剂的准备:将40ml浓缩洗液和960ml去离子水在干净的洗液瓶中混合，作为工作洗涤液备用。
2. 将试剂盒所有试剂、待测样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温(20～25℃)。
3. 吸取25μl的校准品和样品，按顺序加入相应微孔；在各微孔中加入200μl分析缓冲液，室温慢速振动60分钟。
4. 稀释铕标记物:用分析缓冲液按1:50稀释铕标记物，混匀备用。
5. 60分钟后，洗板2次，将板条在洁净的吸水纸上拍干。
6. 在各微孔中加入200μl已稀释的铕标记溶液，在室温下慢速振动60分钟。
7. 洗板6次，将板条在洁净的吸水纸上拍干。
8. 在每个微孔内加入200μl的增强液，慢速孵育5分钟。
9. 用时间分辨荧光测定仪检测。
10. 结果测定
用本公司ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪或WALLAC公司时间分辨荧光检测仪(1230、1234、1420)测量时，检查程序的参数是否如下所示。如不符，请修改。
ASSAY TYPE(分析类型):IFMA(时间分辨免疫荧光分析法)
FITTING METHOD(曲线拟和方式):SPLINE SMOOTHED(平滑样条函数)
X-AXIS(X轴):LOG
Y-AXIS(Y轴):LOG-B
BLANKS(背景孔数):2
STANDARDS(校准品):5
STANDARDS REPLICATES(校准品复孔数):2
STANDARD CONC(校准品浓度):B
STANDARD CONC(校准品浓度):C
STANDARD CONC(校准品浓度):D
STANDARD CONC(校准品浓度):E
STANDARD CONC(校准品浓度):F
UNKNOWN REPLICATES(待测样品孔数):1
【对试验结果的解释】
1. 结果判定:用本试剂盒对499份正常人血清进行检测，487份血清甲胎蛋白测量值低于10.5ng/ml；12份血清甲胎蛋白测量值处于10.5～13.0ng/ml。建议各实验室建立自己的正常值范围。
2. 质量控制:以下三点如不符合要求，应重新进行实验。
(1) A点计数值应＜5000，F点计数值应＞1000000。
(2) 剂量反应曲线的线性相关系数r值应＞0.9900。
(3) 呈典型的剂量反应曲线。
3. 若样本中AFP含量大于1000ng/ml，请用生理盐水稀释后再测量。稀释后浓度应在测量范围内。
【该试验方法的局限性】
AFP的水平不能用作原发性肝癌或其他疾病存在与否的绝对证据。在患者的诊断与治疗中，AFP的检测结果可以和其他诊断检查手段联合应用，它不应取代任何已存在的临床检查。
【产品性能指标】
测定范围:0～1000ng/ml。灵敏度:不低于1.5ng/ml。精密性:<15%。
特异性:与人血清白蛋白交叉反应<0.00001%；与CEA交叉反应<0.025%；
与HCG交叉反应<0.01%；与CA125交叉反应<0.25%；与PSA交叉反应<0.2%。
HOOK效应:50000ng/ml没有发现HOOK效应。
剂量反应曲线:如下图。
【注意事项】
1. 不要混用不同批号的试剂，不要使用过期试剂。
2. 尽量建立一个干净无尘的实验室环境。
3. 使用前，分析缓冲液、增强液等试剂及待检样本和微孔反应板必须恢复到室温。
4. 为保证实验的准确性，处理血样时应做到没有纤维蛋白、红细胞等，并要保证血样吸取的量的准确性，否则容易引起测量值的差异。
5. 洗板机在洗涤时，确认微孔注满洗液；洗涤完成后保证微孔残留液最小；将微孔板倒扣于无尘吸水纸上拍干。
6. 吸取增强液或铕标记物时，请使用专用吸头或本试剂盒提供的吸头
