本发明涉及植物栽培技术领域,具体涉及一种接骨木组培快繁方法。
背景技术:
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近年来,我国食用植物油的需求量持续增长,需求缺口不断扩大,对外依存度明显上升,食用植物油安全问题日益突出。木本油料产业是我国的传统产业,也是提供健康优质食用油的重要来源,而接骨木(Sambucua williamsii Hance)是一种极具开发价值的木本油料树种之一,研究证实其果实含油率达35%~44%,且含有的饱和脂肪酸含量低、人体必须的脂肪酸含量都相对于大豆油、花生油、向日葵油高,对健康非常有益。
接骨木繁殖方式常采用种子繁殖,也可用扦插和嫁接繁殖,但是,利用传统方式繁殖,其受季节的影响较大,繁育速度较慢,因此研究接骨木离体快繁方法,进一步提高接骨木的开发、利用价值,对接骨木大规模生产和新优品种的快速推广,具有重要的理论和现实意义。
技术实现要素:
本发明的目的在于提供一种接骨木组培快繁的技术,它包括以下几个步骤:
1):将带腋芽茎段消毒处理
选择接骨木当年生腑芽饱满枝条的嫩尖,剪成4-5cm小段,每段含有1-2个腋芽,流水下冲洗30min~60min,于超净工作台上用75%酒精浸泡30s,无菌水冲洗2次,再分别用0.1%HgCl2处理15min,无菌水振荡冲洗3~5次后备用;
2):诱导丛生芽
将步骤1)所得的消毒后的带腋芽茎段两端的消毒伤口切掉,茎段控制在2~3cm,确保每段有用于诱导启动的腋芽1个,接入体积30-50ml的MS诱导培养 基上,每瓶接种1-2个含腋芽的外植体,先在23~27℃条件下暗培养3~5天,然后置于每天光照10~12小时,光照强度为1500~2000lx条件下光培养,直至诱导形成丛生芽;
3):分化培养
将步骤2)所诱导出的丛生芽转入50ml的由MS+6BA1mg/L+TDZ0.01mg/L组成的增殖培养基上,每瓶转接5个芽体进行增殖培养,直至增殖系数为4,每株抽生出2-3个节段,株高达3-5cm,得分化苗;
4):生根培养
将步骤3)所得的分化苗转接种到体积为50ml由MS+IBA0.1mg/L组成的生根培养基上进行生根培养,每瓶转接5株,待生根苗株高至5-7cm,根系5条以上,健壮有活力,即可进行驯化移栽;
5):炼苗驯化
将步骤4)获得的生根植株,炼苗7-10天,移至装有珍珠岩和草炭土体积比为3:5的混合成基质的营养杯中,继续培养25天后大田定植。
优选的,步骤1)中,接骨木当年生腑芽饱满枝条的嫩尖,剪成5cm小段,每段含有1个腋芽。
优选的,步骤2)中所述的每天光照10小时,光照强度为2000lx。
本发明采用组织培养的方法,通过消毒外植体、诱导培养、增殖培养、生根培养得到生根植株,经炼苗驯化后定植大田。创新点在于本发明的的接骨木组培快繁方法可以快速大量繁殖接骨木组培苗,以适应园林绿化、木本食用油的需要,而且未见其他团队有相似报道。
具体实施方式
实施例1
所述的接骨木组培快繁技术,具体步骤如下:
首先,选择接骨木当年生腑芽饱满枝条的嫩尖,采集外植体。将采集的外植体,剪成4.5cm小段,每段含有1个腋芽,流水下冲洗45min后,于超净工作台上用75%酒精浸泡30s,无菌水冲洗2次,再分别用0.1%HgCl2处理15min,无菌水振荡冲洗5次;
第二:将消毒处理得到的带腋芽茎段切掉茎段两端的消毒伤口,茎段控制在2.5cm,接入MS培养基上,先在23℃条件下全暗培养5天,然后置于每天光照12小时,光照强度为1500lx,直至诱导形成丛生芽;
第三:将诱导出的丛生芽转入50ml的由MS+6-BA1mg/L+TDZ0.01mg/L组成的增殖培养基上进行增殖培养;
第四:将分化苗接种到生根培养基上进行生根培养,生根培养基为MS+IBA0.1mg/L;
第五:将转生根的瓶苗炼苗10天后,栽入装有珍珠岩和草炭土体积比为3:5的混合成基质的营养杯中,得到成苗,培养25天后大田定植。
该实施例在对接骨木进行组培过程中,外植体消毒的成功率为95%外植体诱导丛生芽生成率为96%,丛生芽的增殖系数为4,分化苗诱导生根率100%,转生根的瓶苗炼苗驯化成活率达98%。
实施例1中得到的接骨木组培苗定植大田2个月后对其生长量与同样定植大田2个月的播种苗进行了对比,对比表如下表1
表1、接骨木组培苗与播种苗定植大田后的差异情况表
实施例2
所述的接骨木组培快繁技术,具体步骤如下:
首先,选择接骨木当年生腑芽饱满枝条的嫩尖,采集外植体。将采集的外植体,剪成4cm小段,每段含有1个腋芽,流水下冲洗40min后,于超净工作台上用75%酒精浸泡30s,无菌水冲洗2次,再分别用0.1%HgCl2处理15min,无菌水振荡冲洗4次;
第二:将消毒处理得到的带腋芽茎段切掉茎段两端的消毒伤口,茎段控制在3cm,接入MS培养基上,先在25℃条件下全暗培养5天,然后置于每天光照11小时,光照强度为1800lx,直至诱导形成丛生芽;
第三:将诱导出的丛生芽转入50ml的由MS+6-BA1mg/L+TDZ0.01mg/L组成的增殖培养基上进行增殖培养;
第四:将分化苗接种到生根培养基上进行生根培养,生根培养基为MS+IBA0.1mg/L;
第五:将转生根的瓶苗炼苗8天后,栽入装有珍珠岩和草炭土体积比为3:5的混合成基质的营养杯中,得到成苗,培养25天后大田定植。
该实施例在对接骨木进行组培过程中,外植体消毒的成功率为92%,外植体诱导丛生芽生成率在96%,丛生芽的增殖系数为4,分化苗诱导生根率100%,转生根的瓶苗炼苗驯化成活率达97%。
实施例2中得到的接骨木组培苗定植大田2个月后对其生长量与同样定植大田4个月的播种苗进行了对比,对比表如下表2
表2、接骨木组培苗与播种苗定植大田后的差异情况表
实施例3
所述的接骨木组培快繁技术,具体步骤如下:
首先,选择接骨木当年生腑芽饱满枝条的嫩尖,采集外植体。将采集的外植体,剪成5cm小段,每段含有1个腋芽,流水下冲洗50min后,于超净工作台上用75%酒精浸泡30s,无菌水冲洗2次,再分别用0.1%HgCl2处理15min,无菌水振荡冲洗4次;
第二:将消毒处理得到的带腋芽茎段切掉茎段两端的消毒伤口,茎段控制在3m,接入MS培养基上,先在27℃条件下全暗培养5天,然后置于每天光照10小时,光照强度为2000lx,直至诱导形成丛生芽;
第三:将诱导出的丛生芽转入50ml的由MS+6-BA1mg/L+TDZ0.01mg/L组成的增殖培养基上进行增殖培养;
第四:将分化苗接种到生根培养基上进行生根培养,生根培养基为MS+IBA0.1mg/L;
第五:将转生根的瓶苗炼苗9天后,栽入装有珍珠岩和草炭土体积比为3:5的混合成基质的营养杯中,得到成苗,培养25天后大田定植。
该实施例在对接骨木进行组培过程中,外植体消毒的成功率为92%,外植体诱导丛生芽生成率在96%,丛生芽的增殖系数为4,分化苗诱导生根率100%,转生根的瓶苗炼苗驯化成活率达97%。
实施例3中得到的接骨木组培苗定植大田2个月后对其生长量与同样定植大田4个月的播种苗进行了对比,对比表如下表3
表3、接骨木组培苗与播种苗定植大田后的差异情况表
结论:在使用组培快繁后技术后,外植体消毒的成功率、外植体诱导丛生芽生成率、分化苗诱导生根率、转生根的瓶苗炼苗驯化成活率达都较高,丛生芽的增殖系数达4;组培培 育的小苗定植大田后,其株高、冠幅、地径的增长量均大于播种苗增长量。
实验结果:采用本发明所述的接骨木快繁方法,能有效提高外植体消毒成功率、外植体诱导丛生芽生成率、分化苗诱导生根率、转生根瓶苗炼苗驯化成活率。