本发明涉及一种培养基，具体涉及一种缓解蓝莓组培苗褐化的培养基及其制备方法。
背景技术：
：蓝莓是一种小浆果，果实呈蓝色、果肉细腻、种子极小，具有“浆果之王”和“水果皇后”的美誉。蓝莓果实平均重0.5～2.5g，最大重5g，可食率为100％，甜酸适口，且具有香爽宜人的香气，为鲜食佳品。蓝莓不仅富含常规营养成分，如蛋白质、维生素、矿物质及微量元素等，而且还含有极为丰富的花青素、黄酮类和多糖类化合物，具有缓解视力疲劳，促进视网膜细胞中的视紫质再生，预防近视，改善和增进视力等功效。除缓解视力疲劳外，蓝莓还具有诸多保健功能，如预防心脑血管疾病、防癌、提高免疫力、缓解咽喉疼痛及腹泻等等，所以，对蓝莓的利用和衍生品开发越来越受到重视。鉴于蓝莓的广阔市场前景，对蓝莓苗木的研发也越来越受到重视。其中快速脱毒制备蓝莓组培苗成为最佳蓝莓苗木繁殖手段。然而在组培快繁过程中，因为外植体创面的细胞受伤害造成细胞内酚类化合物外泌，在酚氧化酶的作用下形成褐色的醌类物质，在培养基中积聚并逐渐扩散，抑制其它酶的活性，毒害整个外植体，进而造成组培苗死亡，不利于蓝莓苗的快速繁殖，是限制蓝莓组培苗成功与否的决定性因素之一。基于上述问题，研究出一种缓解蓝莓组培苗褐化的培养基非常重要。技术实现要素：针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种缓解蓝莓组培苗褐化的培养基，缓解蓝莓苗组培快繁过程中的褐化，使得蓝莓苗组培快繁技术更加高效；本发明同时提供其制备方法。本发明所述的缓解蓝莓组培苗褐化的培养基，基本培养基为WPM，并添加有3-6g/L琼脂、0.2-0.8g/L水解乳蛋白、0.5-1.5g/L聚乙烯吡咯烷酮、0.5-1.2g/L维生素C、0.5-1.2g/L谷胱甘肽和0.2-0.8g/L柠檬酸。所述的培养基优选为：基本培养基为WPM，并添加有4.5g/L琼脂、0.5g/L水解乳蛋白、1.0g/L聚乙烯吡咯烷酮、0.8g/L维生素C、0.8g/L谷胱甘肽和0.6g/L柠檬酸。所述的缓解蓝莓组培苗褐化的培养基的制备方法，将琼脂、水解乳蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、维生素C、谷胱甘肽和柠檬酸加入到基本培养基中，混合均匀后分装，灭菌后备用。所述的分装规格为20-30mL/瓶。与现有技术相比，本发明的有益效果如下：(1)本发明WPM基本培养基提供了蓝莓组培苗的生长所需营养成份，而维生素C、谷胱甘肽、柠檬酸和水解乳蛋白具有防止酚类物质氧化及抑制酚氧化酶活性的功能，四者协同增效可以减少褐化物的形成；琼脂浓度不仅影响培养基的硬度，同时可以调节醌类物质的扩散，使褐化物能够快速扩散而不发生局部积聚，减轻对蓝莓组培苗的毒害；聚乙烯吡咯烷酮是一种良好的吸附剂，可以对培养基中的已经生成的褐化物质进行吸附，以减轻褐化物在培养基中的分散作用及对蓝莓组培苗的毒害。(2)本发明所述的缓解蓝莓组培苗褐化的培养基，能够显著缓解蓝莓组培苗的褐化，极大提高蓝莓组培苗成活率。(3)本发明所述的制备方法，简单易行、便于操作。具体实施方式下面结合实施例对本发明做进一步说明。实施例中采用的基本培养基WPM采用本领域人员公知配方进行配制。实施例1所述的缓解蓝莓组培苗褐化的培养基，基本培养基为WPM，并添加有4.5g/L琼脂、0.5g/L水解乳蛋白、1.0g/L聚乙烯吡咯烷酮、0.8g/L维生素C、0.8g/L谷胱甘肽和0.6g/L柠檬酸。其制备方法为：将琼脂、水解乳蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、维生素C、谷胱甘肽和柠檬酸加入到基本培养基中，混合均匀后分装，灭菌后备用。分装规格为25mL/瓶。实施例2所述的缓解蓝莓组培苗褐化的培养基，基本培养基为WPM，并添加有3g/L琼脂、0.2g/L水解乳蛋白、0.5g/L聚乙烯吡咯烷酮、0.5g/L维生素C、0.5g/L谷胱甘肽和0.2g/L柠檬酸。其制备方法为：将琼脂、水解乳蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、维生素C、谷胱甘肽和柠檬酸加入到基本培养基中，混合均匀后分装，灭菌后备用。分装规格为20mL/瓶。实施例3所述的缓解蓝莓组培苗褐化的培养基，基本培养基为WPM，并添加有6g/L琼脂、0.8g/L水解乳蛋白、1.5g/L聚乙烯吡咯烷酮、1.2g/L维生素C、1.2g/L谷胱甘肽和0.8g/L柠檬酸。其制备方法为：将琼脂、水解乳蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、维生素C、谷胱甘肽和柠檬酸加入到基本培养基中，混合均匀后分装，灭菌后备用。分装规格为30mL/瓶。将蓝莓苗分别接种到基本培养基WPM以及实施例1-3制备得到的培养基上，5周后观察在不同培养基上蓝莓苗的褐化情况和蓝莓苗的成活情况，具体见表1。其中：褐化情况用褐化率表示，成活情况用成活率表示。褐化率计算公式为：褐化率＝每个培养瓶中的褐化蓝莓苗棵数/每个培养瓶中所接种的总蓝莓苗棵数；成活率计算公式为：成活率＝每个培养瓶中成活的蓝莓苗棵数/每个培养瓶中所接种的总蓝莓苗棵数。表1蓝莓苗在不同培养基上的生长情况每瓶接种总数褐化棵数褐化率(％)成活棵数成活率(％)WPM基本培养基302893.31240实施例1培养基3026.630100实施例2培养基3013.32996.7实施例3培养基303102893.3观察发现：实施例1-3制备的培养基对蓝莓组培苗具有保护作用，能够缓解蓝莓组培快繁苗的褐化问题，缓解褐化物对蓝莓组培苗的毒害作用。实施例1-3培养基上的蓝莓苗的生长情况远远优于基本培养基上的，其中实施例1培养基上的蓝莓苗生长情况最优。当前第1页1 2 3