本发明属于组培方法领域，具体的说是一种何鲁牵牛组织培养的方法。
背景技术：
何鲁牵牛(Ipomoea holubii)为旋花科番薯属植物，原产于博茨瓦纳和纳米比亚。何鲁牵牛具有大型的球状块根，且表面石化呈黄褐色，其叶细长如柳叶，开深粉色喇叭型花，观赏价值很高，是一种珍贵的多肉植物。然而在自然条件下，何鲁牵牛生长缓慢，繁殖率低，数量较少。为了保护野生何鲁牵牛植物免遭掠夺性采集甚至灭绝的威胁，国际多肉植物研究组织(The International Organization for Succulent Plant Study)已将何鲁牵牛列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES公约)附录内，属于濒危野生植物。这使得其市售价格居高不下，极大地限制了何鲁牵牛的引种、推广和应用。然而，利用植物组织培养技术进行何鲁牵牛的快速繁殖可以在短期内获得大量与母株遗传背景一致的优质种苗，这对于满足国内外对于何鲁牵牛的市场需求、保护珍稀的何鲁牵牛野生资源具有重要的意义。但是，在此之前还没有关于何鲁牵牛组织培养研究的报道，更没有成功的实例。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种何鲁牵牛组织培养的方法。
本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。这种何鲁牵牛组织培养的方法，该方法包括如下步骤：
1)、培养基的配制：
(1)基本培养基：WPM培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂6～9g/L，pH＝5.8；
(2)启动培养基：WPM+6-BA 0.2～0.5mg/L+NAA 0～0.02mg/L+0.1％～0.3％活性炭；
(3)增殖培养基：WPM+6-BA 0.1～0.5mg/L+0.1％～0.3％活性炭；
(4)生根培养基：WPM+IBA 0.1～0.3mg/L+0.1％～0.3％活性炭；
2)、外植体的选取及消毒：
选取何鲁牵牛的茎段作为外植体，清洗并消毒后备用；
3)、腋芽的诱导：
将步骤2)消毒处理后的茎段在无菌条件下接种于启动培养基上培养，培养4周后从叶腋处诱导出腋芽；
4)、不定芽的增殖：
将步骤3)诱导出的腋芽切下转至增殖培养基上进行不定芽的增殖，培养4～6周后有不定芽丛形成；
5)、生根及移栽：
将步骤4)增殖获得的不定芽丛在无菌条件下分割成单株后转接到生根培养基上，培养3～5周后生根，将生根植株从培养基中取出并清洗后移栽至基质中。
作为优选，在所述步骤1)中，所述的培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分具体为：
(1)基本培养基：WPM培养基，其中蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH＝5.8；
(2)启动培养基：WPM+6-BA 0.3mg/L+NAA 0.01mg/L+0.1％活性炭；
(3)增殖培养基：WPM+6-BA 0.2mg/L+0.1％活性炭；
(4)生根培养基：WPM+IBA 0.2mg/L+0.1％活性炭。
作为优选，在所述步骤2)中，所述的消毒处理是将何鲁牵牛的茎段先用饱和洗衣粉溶液浸泡30min后，再用自来水冲洗干净，然后依次在体积比为70％的酒精溶液和有效氯饱和度为1％的次氯酸钠溶液中分别浸泡40s和7min，期间摇晃几次，最后用无菌水冲洗3～5遍，每遍1min。
作为优选，在所述步骤3)中，所述的腋芽的诱导培养是将消毒处理后的茎段在无菌条件下接种于启动培养基上进行腋芽的诱导。
本发明的有益效果为：利用植物组织培养技术对何鲁牵牛进行了离体培养和组培快繁，能够在较短时间内获得大量遗传性状一致的优质壮苗，克服了何鲁牵牛母本稀缺及常规繁殖方法慢的缺点，对保护其野生种质资源和促进其种苗的规模化生产都具有积极意义。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明做详细的介绍：
实施例1
本发明提供了一种何鲁牵牛组织培养的方法，其步骤为：
1)、培养基的配制
(1)基本培养基：WPM培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂6～9g/L，pH＝5.8；
(2)启动培养基：WPM+6-BA 0.2～0.5mg/L+NAA 0～0.02mg/L+0.1～0.3％活性炭；
(3)增殖培养基：WPM+6-BA 0.1～0.5mg/L+0.1～0.3％活性炭；
(4)生根培养基：WPM+IBA 0.1～0.3mg/L+0.1～0.3％活性炭；
2)、外植体的选取及消毒
选取何鲁牵牛的茎段作为外植体材料，先用饱和洗衣粉溶液浸泡30min后再用自来水冲洗干净，然后依次在体积比为70％的酒精溶液和有效氯饱和度为1％的次氯酸钠溶液中分别浸泡40s和7min，期间摇晃几次，最后用无菌水冲洗3～5遍，每遍1min。
3)、腋芽的诱导
将消毒处理后的茎段在无菌条件下接种于启动培养基上，培养4周左右后可从叶腋处直接诱导出腋芽；
4)、不定芽的增殖
待腋芽具有3～5片叶子时将其切下转至增殖培养基上培养，培养4～6周后可形成不定芽丛；培养温度为23±2℃、光照强度为30～80μmol·m-2·s-1、光照时间为8～10小时/天；
5)、生根及移栽
将不定芽丛分割成单株后转接到生根培养基上培养，3～5周后可形成具有1cm左右幼根的完整植株；培养温度为23±2℃、光照强度为30～60μmol·m-2·s-1、光照时间为8～10小时/天；
将生根植株从培养基中取出并清洗后移栽至基质中栽培，先在幼苗上覆盖薄膜并遮荫，在炼苗2～4天后逐渐揭开薄膜使幼苗适应外界环境，移栽成活率为90％左右。
实施例2
本发明提供了一种何鲁牵牛组织培养的方法，其步骤为：
1)、培养基的配制
(1)基本培养基：WPM培养基，其中蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH＝5.8；
(2)启动培养基：WPM+6-BA 0.3mg/L+NAA 0.01mg/L+0.1％活性炭；
(3)增殖培养基：WPM+6-BA 0.2mg/L+0.1％活性炭；
(4)生根培养基：WPM+IBA 0.2mg/L+0.1％活性炭；
2)、外植体的选取及消毒
选取何鲁牵牛的茎段作为外植体材料，先用饱和洗衣粉溶液浸泡30min后再用自来水冲洗干净，然后依次在体积比为70％的酒精溶液和有效氯饱和度为1％的次氯酸钠溶液中分别浸泡40s和7min，期间摇晃几次，最后用无菌水冲洗4遍，每遍1min；
3)、腋芽的诱导
将消毒处理后的茎段在无菌条件下接种于启动培养基上。培养4周左右后可从叶腋处直接诱导诱导出腋芽；
4)、不定芽的增殖
待腋芽具有4片叶子时将其切下转至增殖培养基上培养，培养4～6周后可形成不定芽丛；培养温度为23±2℃、光照强度为60μmol·m-2·s-1、光照时间为10小时/天；
5)、生根及移栽
将不定芽丛分割成单株后转接到生根培养基上培养，3～5周后可形成具有1cm左右幼根的完整植株；培养温度为23±2℃、光照强度为50μmol·m-2·s-1、光照时间为8小时/天；
将生根植株从培养瓶中取出并清洗后移栽至基质中栽培，先在幼苗上覆盖薄膜并遮荫，在炼苗2～4天后逐渐揭开薄膜使幼苗适应外界环境，移栽成活率可达90％。
最后需要说明的是，除本实施例外，本发明还可以有其它实施方式和变形，以上列举的仅是本发明的具体实施例子。凡本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。