本发明属于农作物抗根肿病鉴定方法，具体涉及一种高山萝卜田间抗根肿病的鉴定方法。
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：萝卜是十字花科萝卜属的1～2年生草本双子叶植物，是我国第二大蔬菜，在我国已有2700多年的栽培历史，品种资源近2000份，其品种资源类型十分丰富，各生态区域均有适合本区域消费习惯和不同季节生长的传统地方品种。我国萝卜年播种面积已逾1830万亩，全国各省、市、县区都有种植，萝卜产品周年供应全国并远销日本、香港、台湾和东南亚等地区。根肿病是一种世界性土传病害，最早发现于地中海两岸和欧洲南部，目前很多国家都有发生，特别是温带地区。近年来，随着全球气候逐年变暖、土壤酸化程度增加、十字花科作物栽培面积不断扩大、种植基地蔬菜生产轮作年限增加以及南北菜的相互调运，十字花科作物根肿病发生面积迅速扩大，危害程度也逐年加重，根肿病已成为十字花科作物的重要病害之一。前人通过对芸薹属大白菜抗根肿病的遗传分析发现了Crr1,Crr2，Crr3，Crr4,CRa,CRb,CRk(SUWABEK,2003；SUWABE,2006；HIRAIM,2004；MATSUMOTOE,1998；SAKAMOTOK,2008；PIAOZY,2002；PIAOZY,2004)7个抗根肿病(clubrootresistance,CR)基因；SAITO等(2006)通过对拟南芥抗根肿病的QTL分析，精准定位了Crr3基因；HATAKEYAMA等(2013)在大白菜中精准定位了Crr1基因；Piao等(2002,2004)通过大白菜发现CRb基因对根肿病生理小种2,4,8表现为抗性；CHIAUG等(1977)发现在欧洲油菜中，抗生理小种1和抗生理小种3是受到单一显性基因控制，抗生理小种5是受2对隐性基因控制；CRUTE等(1983)在研究了芸薹根肿病菌的某些菌株与3种芸薹属植物(芜菁、油菜、甘蓝)基因型的关系后，认为油菜和芜菁对不同菌株的抗性是不同的，它们可能是由寡基因控制的。Piao(2007)等利用SSR标记TCR01和TCR09，将抗根肿病CRb基因定位在大白菜A3连锁群并且标记间遗传距离为2.9cM，利用这两个标记进行大白菜与大白菜之间的抗性转育，获得9个‘BJN3’的近等基因系。ZhangTeng等(2014)根据之前的研究基础，进行了精细定位，开发了2个大白菜SSR标记，分别为TCR79和TCR108，标记间的遗传距离为0.14cM，这些研究为大白菜抗根肿病分子标记辅助育种提供了理论基础。JonghoonLee等(2015)利用高通量测序GBS技术构建78个甘蓝F2群体的高密度图谱，QTLs定位结果表明对4号生理小种的抗性位点与此前大白菜相似研究的位点不同，研究开发了两个不同的QTL区域与根肿病的抗性相关。BRADSHAW等(1997)利用四倍体杂交法培育出了对根肿病有抗性的芜菁、甘蓝；MANZANARES-DAULEUX等(2000)将欧洲饲用萝卜的抗病基因转移到大白菜上，培养出来抗根肿病的大白菜。目前韩国的山地王大白菜品种在湖北高山火烧坪抗根肿病表现优良，先正达的抗根肿病甘蓝在湖北利川高山地区表现优良。陈慧慧等(2012)根据Piao等的研究开发了2个大白菜SSR标记，分别为TCR13和TCR74，标记间遗传距离为0.18cM。陈龙正(2015)等利用携带CRb基因的大白菜种质，与不结球白菜进行亚种间杂交和回交，通过已有的SSR标记设计特异引物，获得更为简便快速的SCAR标记CRb-R-25应用于分子标记辅助选择，同时结合大白菜与不结球白菜亚种间杂交创制不结球白菜抗根肿病新种质。郭海风(2005)还发现抗病的油菜基因型和芜菁基因型之间可能存在共同的基因。浙江大学金京等(2014)构建了SSR分子标记遗传图谱并定位到1个LOD值大于2的隐性根肿病抗性QTL——CRQTL1。杨征等(2015)对大白菜抗根肿病基因位点CRa和CRb的分子标记进行了鉴定，研究初步明确了78份大白菜材料所含抗根肿病基因CRa和CRb。姚秋菊等(2015)对抗根肿病的大白菜品种在河南新野的抗性进行了鉴定，结果表明，不同品种对新野地区的根肿菌抗性存在差异，其中Y670、Y714、Y752表现免疫。高愿等(2015)对20种甘蓝型油菜抗根肿病资源进行了筛选，结果表明，华杂9号、华双3号表现为较强的抗根肿病能力，可以作为油菜抗根肿病育种材料。目前国内开展了抗根肿病大白菜品种的选育，在湖北省长阳火烧坪及利川高山地区，各单位抗根肿病大白菜表现为北京蔬菜中心的京春CR2和京春CR3表现优良，青岛农科院12CR159表现优良，天津科润蔬菜所天白CR15表现优良。甘蓝品种目前我们国内研究缺乏抗源，暂时没有抗根肿病品种。萝卜对根肿病的抗性相对于其它作物较好，仍然会有发生，品种间的差异很大，相关研究正在开展。萝卜作为十字花科的一大类，深受根肿病的危害，特别是高山地区，2003年根肿病在湖北省长阳县火烧坪爆发并蔓延，到2005年发病面积达到200hm2，绝收面积3.3hm2(汪维红等，2013)。目前萝卜根肿病是湖北省长阳地区以及利川市齐岳山脉蔬菜产业化以及农民增收面临的最大问题，选用抗病品种是解决生产需求最有效的方法。技术实现要素：为了给高山地区提供抗根肿病的萝卜品种，本发明提供了一种高山萝卜田间抗根肿病的鉴定方法，所述方法稳定可靠，分析方式简单明确，解决了高山地区萝卜根肿病带来的产量及品质危害，优化了高山地区萝卜抗根肿病品种的选育。本发明的技术方案为：一种高山萝卜田间抗根肿病的鉴定方法，其特征在于，鉴定步骤如下：S1、选定用于萝卜根肿病鉴定的若干个萝卜品种；S2、在高山地区选定园圃作为根肿病病圃，春季4月底至5月上旬在所述根肿病病圃种植感病大白菜，丰富园圃的菌源，连续播种感病大白菜若干年；S3、将步骤S2中已丰富好菌源的根肿病病圃分为若个根肿病病圃区，每种萝卜品种分别播种于各个根肿病病圃区内，具体播种时间在当年6月底至7月底；S4、于播种后第55～60天调查各个根肿病病圃区内各萝卜品种对根肿病的抗性。所述S3中播种方法为：1)播种前喷洒除草剂及防治地下害虫药剂，下底肥，包沟1m起垄，垄高20cm～25cm，厢面长7.5m，单行或双行播种，孔距为40cm×20cm；2)播种时每孔播种2～3粒，5～6叶期时直接定苗不移苗；3)播种后田间进行正常管理，追施叶面肥2～3次，防治小菜蛾、菜青虫及霜霉病软腐病，萝卜出苗后防治跳甲。所述S4中调查各个根肿病病圃区内各萝卜品种根肿病的抗性的具体方式如下：1)每个根肿病病圃区内，每个萝卜品种分别选取若干株，洗净，观察萝卜的形态；2)根据萝卜病情分级级数判断标准判断每个萝卜的病情分级级数；3)根据病情指数计算公式算出每个根肿病病圃区内每个萝卜品种各自的病情指数；4)将各个根肿病病圃区中相同萝卜品种的病情指数求算数平均值，根据抗病性评价标准判定各个萝卜品种对根肿病的抗病性。所述萝卜病情分级级数判断标准为：0级：根系上无根瘤；1级：主根或须根上有1～2个零散的根瘤，所述根瘤直径≤3mm；2级：主根或须根上有3个或3个以上分散的根瘤，3mm＜根瘤直径≤5mm；3级：主根上或者须根上若干个根瘤聚集，所述根瘤直径＞5mm；所述病情指数计算公式为：所述各级病株数为每个根肿病病圃区内，同一萝卜品种中病情分级级数相同的株数；所述调查总株数为每个根肿病病圃区内，同一萝卜品种的总株数；所述病情指数为萝卜品种受所述根肿病的危害程度；所述抗病性评价标准如下：病情指数在0～11.11为抗病(R)；病情指数在11.12～33.33为耐病(T)；病情指数在33.34～55.55为感病(S)；病情指数在55.56～100.00为高感(HS)。所述根肿病病圃种植各萝卜品种时覆有地膜。所述菌源均来自所述高山地区本地的根肿菌。本发明的有益效果为：本发明所述的鉴定方法相对现有的萝卜根肿病的鉴定方法更简单，判断萝卜根肿病症状的病情分级级数最高仅为3级，病情分级级数的判断标准更加明晰，完全以萝卜上的根瘤状态为准，不仅大大减少了鉴定过程中的工作量和后续结果分析过程，同时精准了每个萝卜品种的病情指数，能准确判断萝卜品种的抗根肿病能力。本发明在简化了现有根肿病鉴定方法的基础上，达到了比现有鉴定方法更好的效果。附图说明图1为萝卜病情分级标准参考图。图1中，a-0级；b-1级；c-2级；d-3级。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明做进一步说明。湖北省宜昌市长阳县根肿病危害严重，选定长阳县火烧坪为各个品种萝卜根肿病鉴定的试验基地，根肿病菌源均来自长阳县的根肿菌，每年春季4月底至5月上旬在试验基地种植感病大白菜，至2016年年初为止，选定的试验基地已是菌源丰富的根肿病病圃；以湖北省农科院经济作物研究所提供的萝卜品种育种资源作为准备鉴定用的萝卜品种，试验共用155个萝卜品种，标示为品种1至品种155。将上述根肿病病圃分为两个区，分别为A区和B区，2016年6月底至7月底，每个区内各播种上述155个萝卜品种，播种步骤如下：1)播种前喷洒除草剂及防治地下害虫药剂，下底肥，包沟1m起垄，垄高20cm～25cm，厢面长7.5m，覆有地膜，单行或双行播种，孔距为40cm×20cm；2)播种时每孔播种2～3粒，出苗后5～6叶期直接定苗不移苗；3)播种后田间进行正常管理，追施叶面肥2～3次，防治小菜蛾、菜青虫及霜霉病软腐病，萝卜出苗后防治跳甲；播种后第55～60天进行调查，调查根肿病病圃A区和B区中各萝卜品种根肿病的抗性，具体调查方式如下：1)将根肿病病圃A区中的每个萝卜品种所有单株拔出，去泥，观察萝卜的形态；将根肿病病圃B区中的每个萝卜品种所有单株拔出，去泥，观察萝卜的形态；2)根据萝卜病情分级标准判断每个萝卜的发病级数，拍照留存，记载登录数据；3)根据病情指数计算公式计算出根肿病病圃A区中155个萝卜品种的病情指数；根据病情指数计算公式计算出根肿病病圃B区中155个萝卜品种的病情指数；所述萝卜病情分级级数判断标准：如图1中a图所示0级：根系上无根瘤；如图1中b图所示1级：主根或须根上有1～2个零散的根瘤，所述根瘤直径≤3mm；如图1中c图所示2级：主根或须根上有3个或3个以上分散的根瘤，3mm＜根瘤直径≤5mm；如图1中d图所示3级：主根上或者须根上若干个根瘤聚集，所述根瘤直径＞5mm；病情指数计算公式：所述各级病株数为每块根肿病病圃中，同一萝卜品种病情分级级数相同的株数；所述调查总株数为每块根肿病病圃中，同一萝卜品种的总株数；所述病情指数为萝卜品种受所述根肿病的危害程度。4)将根肿病病圃A区和B区中相同萝卜品种的病情指数求算数平均值，根据抗病性评价标准判定155个萝卜品种对根肿病的抗病性；所述抗病性评价标准如下：表1抗病性评价标准病情指数抗性评价0～11.11抗病(R)11.12～33.33耐病(T)33.34～55.55感病(S)55.56～100高感(HS)上述155个萝卜品种抗根肿病的鉴定结果如下：表2萝卜品种抗根肿病的鉴定结果从表2中可以看出，火烧坪田间根肿病病圃鉴定155个萝卜品种对根肿病的抗性，病情指数在0～11.11为抗病品种，抗病品种有24份，病情指数在11.12～33.33为耐病品种，耐病品种有34份。从上述实施例可以看出，本发明所述的高山萝卜田间抗根肿病的鉴定方法简单易行，在判断染病萝卜的病情级数上，排除了现有的根肿病鉴定方法中的萝卜黑斑和黑疤影响，虽然萝卜上的黑斑和黒疤是在萝卜受到根肿病侵染后出现的，但是目前还没有有力的证据可以证明侵染的病原物一定就是根肿菌，但萝卜上的根瘤是可以研磨在显微镜下看到根肿菌的孢子的，而且孢子可以重新接种在新的植株上，形成同样的根瘤以此证明根肿菌使得萝卜生成根瘤，仅以根瘤的形态和数量作为染病萝卜病情分级的判断标准，大大简化了整个鉴定过程，甚至判断的结果更加严谨准确，从本质上为萝卜根肿病的鉴定上提供了新的方法。当前第1页1 2 3