本发明涉及一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法,属于植物快速繁殖技术领域。
背景技术:
随着社会的发展和生活水平的提高,水族箱也越来越流行。观赏水草是水族箱的重要组成成分。由于人们对水草的喜爱,大量仅以水草为主的观赏水族箱十分畅销。目前观赏水草品种已经超过500多种,其中绝大多数来原于美洲、非洲、东南亚等热带地区。金钱小榕也称金钱榕,是一种单子叶植物,属于天南星科水榕属,和水榕相比较,叶形呈圆形。其属于挺水性水草,生长缓慢,叶色浓绿,是中前景草的最好选择之一,十分非常流行,市场上往往供不应求。
金钱小榕的繁殖主要依靠对成年的茎进行分支,但是其生长十分缓慢,繁殖系数较低同时成本较高。植物组织培养技术能够利用侧芽,茎段等快速繁殖,缓解传统生产上的种苗繁殖率低下的问题。目前虽有一些观赏水草如水榕、红椒、绿椒等已经成功建立了组织培养技术体系,但是还没有金钱小榕相关的报道,也没有进行金钱小榕工厂化生产。观赏水草常年生长在水中,外植体常常带有多种细菌,导致无菌培养困难,严重制约组织培养技术的应用。通过建立组织培养技术能够在短期内大量提供金钱小榕的种苗,保障期周年供应市场。
针对以上的现状,本发明提供了一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法,能有效增加种苗的繁殖系数,满足生产上对种苗的需求,进一步提高种植和销售者的收入,促进观赏水草产业的发展。
技术实现要素:
本发明的目的在于解决当前金钱小榕种苗的来源,提供一种快速、低成本的金钱小榕的组织培养快速繁殖方法。
为实现上述目的,本发明采用的技术方法如下:
一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法,
(1)外植体选取与消毒:
①选取生长健康无病虫害的金钱小榕的幼嫩茎作为外植体;
②去除多余的叶片,用洗涤剂洗涤去除枝条表面的污垢,再用纸巾吸干;
③在超净工作台上,先用70%酒精浸泡10-30s,再用无菌水冲洗1次,3-5min;
④再用0.1-0.3%的升汞溶液消毒10-15min,最后用无菌水洗涤3-5次,每次3-5min,得到消毒外植体;
还包括以下步骤:
(2)改良MS培养基的制备:
改良MS培养基的配方为:在改良MS培养基中FeSO4的浓度为50~60mg/L,其它组分及浓度与原MS培养基配方完全一致;
(3)不定芽诱导:
将步骤(1)得到的消毒外植体,用无菌手术刀片切下侧芽,然后接种于不定芽诱导培养基中,进行诱导培养4周,得到金钱小榕不定芽;
诱导培养条件如下:温度为28±2℃,湿度为50-80%,光照时间为12小时/天,光照强度为600-8001x;
所述不定芽诱导培养基的配方为:在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA,其中6-BA的浓度为0.5-2mg/L,NAA的浓度为0.05-0.5mg/L;
(4)继代增殖:
将步骤(3)得到的金钱小榕不定芽接入继代增殖培养基,进行继代培养4周,得到金钱小榕从苗;
继代增殖培养条件如下:温度为28±2℃,湿度为75-85%,光照时间为12小时/天,光照强度为600-10001x;
所述继代增殖培养基的配方为:在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA,其中6-BA的浓度为1.5-2.5mg/L,NAA为0.05-0.5mg/L;
(5)无菌生根:
待步骤(4)获得的金钱小榕从苗长至1.5-2cm高时进行诱导生根,切下单株,接种于生根培养基中,进行生根培养20-30天,得到金钱小榕幼苗;
生根培养条件如下:培养温度为28±2℃,湿度为75-85%,光照时间为10-15小时/天,光照强度为600-8001x;
所述无菌生根培养基的配方为:在所述改良MS培养基的基础上添加NAA,NAA的浓度为0.5-3mg/L;
(6)炼苗与移栽
步骤(5)中金钱小榕幼苗生长至根长0.5-1cm、苗高2-4cm后,将培养瓶瓶盖打开,室内炼苗培养5-7天;
然后洗净根部培养基,用消毒后的岩棉包裹好组培苗根部,放入直径为5cm的镂空塑料杯中,移至塑料大棚。
在改良MS培养基中FeSO4的浓度为55.6mg/L。
在所述不定芽诱导培养基中6-BA的浓度为1mg/L,NAA的浓度为0.1mg/L;
在所述继代增殖培养基中6-BA的浓度为2mg/L,NAA的浓度为0.2mg/L。
在所述无菌生根培养基中,NAA的浓度为1.5mg/L。
与现有技术相比较,本发明具备的有益效果:
利用本发明对金钱小榕茎段的腋芽进行组织培养快速繁殖,有效提高繁殖系数,缩短生产周期,提高种植效益,能够有效解决当前金钱小榕严重供应不足的问题,也为种植者提供良好的经济效益。
附图说明
图1继代增殖步骤得到的金钱小榕从苗。
图2无菌生根步骤得到的金钱小榕幼苗。
图3种植待上市的金钱小榕。
具体实施方式
实施例1
一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:
(1)外植体选取与消毒:
①选取生长健康无病虫害的金钱小榕的幼嫩茎作为外植体;
②去除多余的叶片,用洗涤剂洗涤去除枝条表面的污垢,再用纸巾吸干;
③在超净工作台上,先用70%酒精浸泡10-30s,再用无菌水冲洗1次,3-5min;
④再用0.1-0.3%的升汞溶液消毒10-15min,最后用无菌水洗涤3-5次,每次3-5min,得到消毒外植体;
(2)改良MS培养基的制备:
改良MS培养基的配方为:在改良MS培养基中FeSO4的浓度为55.6mg/L,其它组分及浓度与原MS培养基配方完全一致;
(3)不定芽诱导:
将步骤(1)得到的消毒外植体,用无菌手术刀片切下侧芽,然后接种于不定芽诱导培养基中,进行诱导培养4周,得到金钱小榕不定芽;
诱导培养条件如下:温度为28±2℃,湿度为50-80%,光照时间为12小时/天,光照强度为600-8001x;
所述不定芽诱导培养基的配方为:在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA,在所述不定芽诱导培养基中6-BA的浓度为1mg/L,NAA的浓度为0.1mg/L;
(4)继代增殖:
将步骤(3)得到的金钱小榕不定芽接入继代增殖培养基,进行继代培养4周,得到金钱小榕从苗;
继代增殖培养条件如下:温度为28±2℃,湿度为75-85%,光照时间为12小时/天,光照强度为600-10001x;
所述继代增殖培养基的配方为:在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA,在所述继代增殖培养基中6-BA的浓度为2mg/L,NAA的浓度为0.2mg/L。
(5)无菌生根:
待步骤(4)获得的金钱小榕从苗长至1.5-2cm高时进行诱导生根,切下单株,接种于生根培养基中,进行生根培养20-30天,得到金钱小榕幼苗;
生根培养条件如下:培养温度为28±2℃,湿度为75-85%,光照时间为10-15小时/天,光照强度为600-8001x;
所述无菌生根培养基的配方为:在所述改良MS培养基的基础上添加NAA,在所述无菌生根培养基中,NAA的浓度为1.5mg/L。
(6)炼苗与移栽
步骤(5)中金钱小榕幼苗生长至根长0.5-1cm、苗高2-4cm后,将培养瓶瓶盖打开,室内炼苗培养5-7天;
然后洗净根部培养基,用消毒后的岩棉包裹好组培苗根部,放入直径为5cm的镂空塑料杯中,移至塑料大棚。
实施例2
改良MS培养基的配方为:在改良MS培养基中FeSO4的浓度为50mg/L,其他组分及浓度与原MS培养基配方完全一致;
所述不定芽诱导培养基的配方中6-BA的浓度为0.5mg/L,NAA的浓度为0.05mg/L;
所述继代增殖培养基的配方中6-BA的浓度为1.5mg/L,NAA为0.05mg/L;
所述无菌生根培养基的配方中NAA的浓度为0.5mg/L,
其余步骤与实施例1相同,不再赘述。
实施例3
改良MS培养基的配方为:在改良MS培养基中FeSO4的浓度为60mg/L,其他组分及浓度与原MS培养基配方完全一致;
所述不定芽诱导培养基的配方中6-BA的浓度为2mg/L,NAA的浓度为0.5mg/L;
所述继代增殖培养基的配方中6-BA的浓度为2.5mg/L,NAA为0.5mg/L;
所述无菌生根培养基的配方中NAA的浓度为3mg/L,
其余步骤与实施例1相同,不再赘述。