本发明涉及一种果树生物杀虫剂的制备方法，属于杀虫剂制备技术领域。
背景技术：
我国作为世界栽培植物的八大起源中心之一，果树具有栽培历史悠久、资源丰富、种类品种繁多等显著特点，已成为我国农作物事业的重要组成部分，然而果树是害虫发生极为频繁而且相当严重的植物之一，果树种类多，品种复杂，又系多年生植物，为害虫发生提供了较为稳定的生态环境，成为害虫繁衍与爆发的有利场所，虫害对果树正常新陈代谢造成的干扰，导致果树从生理机能到组织结构上发生一系列的变化和破坏，对果品质量和产量造成严重影响。随着农业生态环境的改变，作物布局和产业结构的调整，果树品种的更新，特别是外来品种、引进品种的推广，使果园害虫发生了极大变化，果农面临害虫侵袭的新挑战。
现有的果树杀虫剂，大多常用单纯的人工合成有机物质，属于化学类杀虫剂，这类杀虫剂虽然药效高，但是其长期使用，会使害虫产生耐药性，从而失去效果，并且其残毒期长，大量农药挥发到空气中、流入水体中、沉降聚集在土壤中，污染农畜渔果产品，通过食物链的富集作用转移到人体内，对农作物生长环境及人畜健康有不同程度的不良影响。目前，虽然许多天然无公害的杀虫剂不断开发出来，但是其药效较低，杀虫效果不够理想。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题：针对传统的果树杀虫剂长期使用后，会使害虫产生耐药性，失去杀虫效果，且残毒期长，严重影响作物生长环境和人畜健康的问题。本发明以果树主根处土壤作为菌源，避免了对果树的伤害，利用氧气增加好氧菌的数量，利用藜芦醇对好氧菌进行筛选，获得目标混合菌种，对混合菌种进行优化筛选培养，以酪氨酸、卵磷脂作为筛选基质，对目标混合菌种进行筛选，再以害虫脱皮粉末作为诱导营养物，对菌种进行诱导培养，获得分解害虫脱皮的酶，随后与植物提取物混合，从而获得果树生物杀虫剂。本发明以植物提取物破坏害虫体内蛋白质的合成，以获得酶分解害虫形成的几丁质，阻止害虫脱皮变态过程，使其不能脱皮而死，从而有效解决了对传统的果树杀虫剂长期使用后，会使害虫产生耐药性，失去杀虫效果，且残毒期长，严重影响作物生长环境和人畜健康的问题，本发明制备的果树杀虫剂不会使害虫产生耐药性，杀虫效果好，且不含有有毒物质，不会对农作物生长和人畜健康产生影响。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
（1）取距离果树主根0.4～0.8cm处的土壤，并与其质量0.9～1.2倍的质量分数为6％的葡萄糖溶液混合，放入容器中，并将容器置于25～32℃条件下，静置10～12h，每隔30～40min，从容器底部对容器内的混合物进行充氧，充氧速度为4mL/min，充氧时间为1～2min；
（2）在上述静置结束后，向容器中加入上述葡萄糖溶液体积1.1～1.5％的藜芦醇，使用搅拌器对容器中的混合物以150r/min搅拌4～6min，使用50目纱布对容器中的混合物进行过滤，收集过滤液，得混合菌悬液，备用；
（3）按重量份数计，取50～55份无菌水、20～23份蛋白胨、18～20份酵母浸膏、12～14份葡萄糖、3～6份酪氨酸、2～4份卵磷脂及1～3份磷酸氢二钾，放入搅拌机中搅拌均匀，并将搅拌混合物放入高温灭菌锅中杀菌消毒，得营养液；
（4）按体积比1:3～1:6，将步骤（2）备用的混合菌悬液和营养液混合均匀，放入发酵罐中，设定温度为25～32℃，以1.1m3/min速率向发酵罐中通入氧气，以110r/min搅拌发酵7～8天，每隔50～60min中向发酵罐中加入营养液质量6～8％的害虫脱皮粉末；
（5）在上述发酵结束后，对发酵罐中的发酵混合物进行过滤，收集过滤液，放入冷冻离心机中，设定温度为2～4℃，以8000r/min离心5～10min，收集上层液，并将上层液进行冷冻浓缩，浓缩至原体积的70～75％，浓缩温度为2～4℃，收集浓缩物；
（6）按质量比1:1:5，取鹤草芽、贯众和0.8mol/L乙醇溶液放入蒸煮罐中，设定温度为90～95℃，蒸煮4～6h，再自然冷却至室温，对蒸煮混合物进行过滤，收集过滤液，并将过滤液放入旋转蒸发仪中去除乙醇，收集剩余液，按质量比1:4～1:6，将剩余液和上述浓缩物混合均匀，即可得果树生物杀虫剂。
所述的步骤（4）中害虫脱皮粉末的制备方法为将害虫脱皮放入45℃烘箱中干燥2～3h，再将干燥后的害虫脱皮放入碾磨机中碾磨，过200目筛，收集过筛颗粒，即可。
所述的害虫脱皮来自于果树害虫中鳞翅目害虫和粉虱的脱皮。
所述的步骤（1）中果树主根为苹果树主根、梨树主根、桃树主根、柿子树主根及杏树主根中的任意一种。
本发明的应用方法：本发明制备的果树生物杀虫剂适用于卷蛾科、螟蛾科、天蛾科等鳞翅目害虫及粉虱。在果树害虫初发期，按质量比1:1000～1:2000，将本发明制备的果树生物杀虫剂与水进行混合均匀后，利用喷雾器，将杀虫剂稀释液均匀的喷洒于果树的果实、枝、干、叶上，避免在大风天或预计1小时内有雨天使用。经检测，本发明制备的果树生物杀虫剂药效持效性达到40～45天，且杀虫率达到98％以上，不会对作物生长和人体健康产生危害。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明制备的果树生物杀虫剂药效持效性达到40～45天，其长期使用后，不会使害虫产生耐药性，杀虫率能达到98％以上，具有较高的杀虫效果；
（2）本发明制备的果树生物杀虫剂中不含有有毒物质，不会对作物和人体健康产生危害，符合可持续发展的要求；
（3）本发明制备的果树生物杀虫剂制备步骤简单，所需成本低，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
首先取距离果树主根0.4～0.8cm处的土壤，并与其质量0.9～1.2倍的质量分数为6％的葡萄糖溶液混合，放入容器中，并将容器置于25～32℃条件下，静置10～12h，每隔30～40min，从容器底部对容器内的混合物进行充氧，充氧速度为4mL/min，充氧时间为1～2min；在上述静置结束后，向容器中加入上述葡萄糖溶液体积1.1～1.5％的藜芦醇，使用搅拌器对容器中的混合物以150r/min搅拌4～6min，使用50目纱布对容器中的混合物进行过滤，收集过滤液，得混合菌悬液，备用；按重量份数计，取50～55份无菌水、20～23份蛋白胨、18～20份酵母浸膏、12～14份葡萄糖、3～6份酪氨酸、2～4份卵磷脂及1～3份磷酸氢二钾，放入搅拌机中搅拌均匀，并将搅拌混合物放入高温灭菌锅中杀菌消毒，得营养液；按体积比1:3～1:6，将备用的混合菌悬液和营养液混合均匀，放入发酵罐中，设定温度为25～32℃，以1.1m3/min速率向发酵罐中通入氧气，以110r/min搅拌发酵7～8天，每隔50～60min中向发酵罐中加入营养液质量6～8％的害虫脱皮粉末；在上述发酵结束后，对发酵罐中的发酵混合物进行过滤，收集过滤液，放入冷冻离心机中，设定温度为2～4℃，以8000r/min离心5～10min，收集上层液，并将上层液进行冷冻浓缩，浓缩至原体积的70～75％，浓缩温度为2～4℃，收集浓缩物；接着按质量比1:1:5，取鹤草芽、贯众和0.8mol/L乙醇溶液放入蒸煮罐中，设定温度为90～95℃，蒸煮4～6h，再自然冷却至室温，对蒸煮混合物进行过滤，收集过滤液，并将过滤液放入旋转蒸发仪中去除乙醇，收集剩余液，按质量比1:4～1:6，将剩余液和上述浓缩物混合均匀，即可得果树生物杀虫剂。
其中害虫脱皮粉末的制备方法为将害虫脱皮放入45℃烘箱中干燥2～3h，再将干燥后的害虫脱皮放入碾磨机中碾磨，过200目筛，收集过筛颗粒，即可，害虫脱皮来自于果树害虫中鳞翅目害虫和粉虱的脱皮。果树主根为苹果树主根、梨树主根、桃树主根、柿子树主根及杏树主根中的任意一种。
实例1
首先取距离果树主根0.8cm处的土壤，并与其质量1.2倍的质量分数为6％的葡萄糖溶液混合，放入容器中，并将容器置于32℃条件下，静置12h，每隔40min，从容器底部对容器内的混合物进行充氧，充氧速度为4mL/min，充氧时间为2min；在上述静置结束后，向容器中加入上述葡萄糖溶液体积1.5％的藜芦醇，使用搅拌器对容器中的混合物以150r/min搅拌6min，使用50目纱布对容器中的混合物进行过滤，收集过滤液，得混合菌悬液，备用；按重量份数计，取55份无菌水、23份蛋白胨、20份酵母浸膏、14份葡萄糖、6份酪氨酸、4份卵磷脂及3份磷酸氢二钾，放入搅拌机中搅拌均匀，并将搅拌混合物放入高温灭菌锅中杀菌消毒，得营养液；按体积比1:6，将备用的混合菌悬液和营养液混合均匀，放入发酵罐中，设定温度为32℃，以1.1m3/min速率向发酵罐中通入氧气，以110r/min搅拌发酵8天，每隔60min中向发酵罐中加入营养液质量8％的害虫脱皮粉末；在上述发酵结束后，对发酵罐中的发酵混合物进行过滤，收集过滤液，放入冷冻离心机中，设定温度为4℃，以8000r/min离心10min，收集上层液，并将上层液进行冷冻浓缩，浓缩至原体积的75％，浓缩温度为4℃，收集浓缩物；接着按质量比1:1:5，取鹤草芽、贯众和0.8mol/L乙醇溶液放入蒸煮罐中，设定温度为95℃，蒸煮6h，再自然冷却至室温，对蒸煮混合物进行过滤，收集过滤液，并将过滤液放入旋转蒸发仪中去除乙醇，收集剩余液，按质量比1:6，将剩余液和上述浓缩物混合均匀，即可得果树生物杀虫剂。其中害虫脱皮粉末的制备方法为将害虫脱皮放入45℃烘箱中干燥3h，再将干燥后的害虫脱皮放入碾磨机中碾磨，过200目筛，收集过筛颗粒，即可，害虫脱皮来自于苹果小卷蛾的脱皮，果树主根为苹果树主根。
本发明制备的果树生物杀虫剂适用于苹果小卷蛾。在苹果小卷蛾初发期，按质量比1:1000，将本发明制备的果树生物杀虫剂与水进行混合均匀后，利用喷雾器，将杀虫剂稀释液均匀的喷洒于苹果树的果实、枝、干、叶上，避免在大风天或预计1小时内有雨天使用。经检测，本发明制备的果树生物杀虫剂药效持效性达到45天，且杀虫率达到99.0％，不会对作物生长和人体健康产生危害。
实例2
首先取距离果树主根0.4cm处的土壤，并与其质量0.9倍的质量分数为6％的葡萄糖溶液混合，放入容器中，并将容器置于25℃条件下，静置10h，每隔30min，从容器底部对容器内的混合物进行充氧，充氧速度为4mL/min，充氧时间为1min；在上述静置结束后，向容器中加入上述葡萄糖溶液体积1.1％的藜芦醇，使用搅拌器对容器中的混合物以150r/min搅拌4min，使用50目纱布对容器中的混合物进行过滤，收集过滤液，得混合菌悬液，备用；按重量份数计，取50份无菌水、20份蛋白胨、18份酵母浸膏、12份葡萄糖、3份酪氨酸、2份卵磷脂及1份磷酸氢二钾，放入搅拌机中搅拌均匀，并将搅拌混合物放入高温灭菌锅中杀菌消毒，得营养液；按体积比1:3，将备用的混合菌悬液和营养液混合均匀，放入发酵罐中，设定温度为25℃，以1.1m3/min速率向发酵罐中通入氧气，以110r/min搅拌发酵7天，每隔50min中向发酵罐中加入营养液质量6％的害虫脱皮粉末；在上述发酵结束后，对发酵罐中的发酵混合物进行过滤，收集过滤液，放入冷冻离心机中，设定温度为2℃，以8000r/min离心5min，收集上层液，并将上层液进行冷冻浓缩，浓缩至原体积的70％，浓缩温度为2℃，收集浓缩物；接着按质量比1:1:5，取鹤草芽、贯众和0.8mol/L乙醇溶液放入蒸煮罐中，设定温度为90℃，蒸煮4h，再自然冷却至室温，对蒸煮混合物进行过滤，收集过滤液，并将过滤液放入旋转蒸发仪中去除乙醇，收集剩余液，按质量比1:4，将剩余液和上述浓缩物混合均匀，即可得果树生物杀虫剂。其中害虫脱皮粉末的制备方法为将害虫脱皮放入45℃烘箱中干燥2h，再将干燥后的害虫脱皮放入碾磨机中碾磨，过200目筛，收集过筛颗粒，即可，害虫脱皮来自于梨叶斑蛾的脱皮，果树主根为梨树主根。
本发明制备的果树生物杀虫剂适用于梨叶斑蛾。在梨树梨叶斑蛾初发期，按质量比1:2000，将本发明制备的果树生物杀虫剂与水进行混合均匀后，利用喷雾器，将杀虫剂稀释液均匀的喷洒于梨树的果实、枝、干、叶上，避免在大风天或预计1小时内有雨天使用。经检测，本发明制备的果树生物杀虫剂药效持效性达到40天，且杀虫率达到98.7％，不会对作物生长和人体健康产生危害。
实例3
首先取距离果树主根0.6cm处的土壤，并与其质量1.1倍的质量分数为6％的葡萄糖溶液混合，放入容器中，并将容器置于30℃条件下，静置11h，每隔35min，从容器底部对容器内的混合物进行充氧，充氧速度为4mL/min，充氧时间为2min；在上述静置结束后，向容器中加入上述葡萄糖溶液体积1.2％的藜芦醇，使用搅拌器对容器中的混合物以150r/min搅拌5min，使用50目纱布对容器中的混合物进行过滤，收集过滤液，得混合菌悬液，备用；按重量份数计，取52份无菌水、22份蛋白胨、19份酵母浸膏、13份葡萄糖、5份酪氨酸、3份卵磷脂及2份磷酸氢二钾，放入搅拌机中搅拌均匀，并将搅拌混合物放入高温灭菌锅中杀菌消毒，得营养液；按体积比1:4，将备用的混合菌悬液和营养液混合均匀，放入发酵罐中，设定温度为30℃，以1.1m3/min速率向发酵罐中通入氧气，以110r/min搅拌发酵7天，每隔55min中向发酵罐中加入营养液质量7％的害虫脱皮粉末；在上述发酵结束后，对发酵罐中的发酵混合物进行过滤，收集过滤液，放入冷冻离心机中，设定温度为3℃，以8000r/min离心6min，收集上层液，并将上层液进行冷冻浓缩，浓缩至原体积的72％，浓缩温度为3℃，收集浓缩物；接着按质量比1:1:5，取鹤草芽、贯众和0.8mol/L乙醇溶液放入蒸煮罐中，设定温度为92℃，蒸煮5h，再自然冷却至室温，对蒸煮混合物进行过滤，收集过滤液，并将过滤液放入旋转蒸发仪中去除乙醇，收集剩余液，按质量比1:5，将剩余液和上述浓缩物混合均匀，即可得果树生物杀虫剂。其中害虫脱皮粉末的制备方法为将害虫脱皮放入45℃烘箱中干燥3h，再将干燥后的害虫脱皮放入碾磨机中碾磨，过200目筛，收集过筛颗粒，即可，害虫脱皮来自于粉虱的脱皮。果树主根为柿子树主根。
本发明制备的果树生物杀虫剂适用于粉虱。在柿子树粉虱初发期，按质量比1:1500，将本发明制备的果树生物杀虫剂与水进行混合均匀后，利用喷雾器，将杀虫剂稀释液均匀的喷洒于柿子树的果实、枝、干、叶上，避免在大风天或预计1小时内有雨天使用。经检测，本发明制备的果树生物杀虫剂药效持效性达到42天，且杀虫率达到99.3％，不会对作物生长和人体健康产生危害。