一种异源精子诱导翘嘴鳜人工雌核发育的方法与流程

文档序号:12599192阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种异源精子诱导翘嘴鳜人工雌核发育的方法,其特征在于,其主要步骤如下:

S1:冷冻保存斑鳜异源精子:采用Hanks冷冻稀释液对斑鳜精子进行冷冻低温(-24℃)保存,保存期为24h。解冻时,将冷冻精液管在25℃水浴中解冻备用;

S2:班鳜精子的遗传失活:解冻后的斑鳜精液,按1:4的比例经Hanks冷冻液稀释后放入一个直径10cm的培养皿中,在冰盒上手动摇匀后连同冰盒一起放置在水平摇床上,然后用两根15W UV紫外照射管充分照射25分钟,照射距离17cm;照射后,将灭活的精液虹吸至一个5mL的Ep管中,放入冰盒中保存;

S3:获得翘嘴鳜的卵子:2龄以上的性成熟雌鱼通过注射外源催产激素发情后,采用干法将卵子挤入干燥的器皿中,放入冰盒中保存;

S4:启动卵子雌核发育:将S2得到的遗传失活的翘嘴鳜精子与S3得到的翘嘴鳜成熟卵子摇匀混合受精,受精时间30s;

S5:卵子单倍体染色体组加倍:受精后,转移到淡水中进行冷休克处理,水温4℃,冷休克处理时间约20~25min,得到二倍体卵;

S6:将S5所得到的二倍体卵转入方形孵化槽中孵化,水温25℃,按普通翘嘴鳜苗培育方法管理,得到翘嘴鳜雌核发育二倍体鱼苗,二倍体雌核发育鱼苗的诱导率为10~25%;

S7:用微卫星标记鉴定雌核发育鱼苗。

2.根据权利要求1所述的异源精子诱导翘嘴鳜人工雌核发育的方法,其特征在于,所述S1中Hanks冷冻稀释液由以下原料配制而成:KCL 0.4g,NaCL 8.00g,NaHCO3 0.35g,KH2PO4 0.06g,Na2HPO4·7H2O 0.09g,Na2HPO4·12H2O 0.10g,MgSO4·7H2O 0.10g,MgCL2·6H2O 0.10g,CaCL2 0.14g,Glucose 1.00g;加蒸馏水配至1升。

3.根据权利要求1所述的异源精子诱导翘嘴鳜人工雌核发育的方法,其特征在于,所述S2中紫外照射管照射强度为3396μW(cm3·s)。

4.根据权利要求1所述的异源精子诱导翘嘴鳜人工雌核发育的方法,其特征在于,所述S3中外源催产激素由以下原料在23℃~27℃的温度条件下混合而成:促黄体素释放激素类似物(LRH-A2)4μg/Kg~6μg/Kg和绒毛膜促性腺激素(HCG)800IU/Kg~1200IU/Kg。

5.根据权利要求1所述的异源精子诱导翘嘴鳜人工雌核发育的方法,其特征在于,所述S5中冷休克处理起始时间是在卵子受精后2-3min。

6.根据权利要求1所述的异源精子诱导翘嘴鳜人工雌核发育的方法,其特征在于,所述S5中冷休克处理时间为25min。

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