一种水稻高温抗性突变株的筛选方法与流程

文档序号:12598952阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种水稻高温抗性突变株的筛选方法,其特征在于:该筛选方法步骤如下:

1)选择优良的粳稻品种/系作为高温抗性突变株筛选源:选取产量高、米质好、抗性优良但不耐热的粳稻品种/系作为高温抗性突变株的筛选源;

2)取突变株筛选源的花药进行诱导培养,得到花药愈伤后进行热处理:将突变株筛选源正季种植,选取健壮主穗花药进行花药诱导培养,获得花药愈伤组织,待花药愈伤组织普遍长至直径0.3~0.6cm后,调节培养室温度至36~38℃,持续5~7天;

3)挑选花药愈伤转入分化培养基,进行常温分化培养~热处理循环:挑选直径为0.4~0.7cm的花药愈伤组织,转入分化培养基,进行常温分化培养,温度控制为25~27℃,时间控制为7~9天,再变换为热处理,温度控制为36~38℃,时间控制为3~4天,然后恢复至常温分化培养,如此常温分化培养~热处理循环4~5次至褐化愈伤组织部分达到90%;

4)将活性愈伤投入复苏剂中浸泡,然后转入新分化培养基中继续分化培养:热处理后愈伤组织绝大部分褐化变黑,一些愈伤组织白化丧失活性,切下褐化和白化部分,将留下的活性愈伤投入复苏剂中浸泡处理,然后将活性愈伤转入新的分化培养基中继续分化培养;

5)愈伤组织诱导出苗后,转入继代培养基中壮苗,炼苗后移栽入温室:部分愈伤组织经过热处理、复苏剂处理后存活下来,并分化出苗,待花培苗长至2cm之后转接于继代培养基进行壮苗,待花培苗长至8cm后打开封口膜炼苗,10~15天后移栽入温室;

6)花培苗单株收种获得花培家系,进一步高温抗性筛选获得高温抗性突变株:温室内花培单株收种,获得粳稻花培家系若干,正季将收获的花培家系大田种植,以筛选源为对照,筛选耐热性得到改良的水稻高温抗性突变株。

2.根据权利要求1所述的水稻高温抗性突变株的筛选方法,其特征在于:所述步骤2)中进行花药诱导培养的具体过程如下:

(2.1)取材与预处理:将选取的突变株筛选源正季大田常规栽培,取叶枕距为5~7cm、穗与花药呈淡黄绿色、花药长度为颖壳的1/3~1/2且孕穗不裂开的健壮主穗,保留2~3张叶片,75%酒精表面消毒,用湿纱布包裹后置于4℃冰箱中低温预处理2~3天;

(2.2)接种:预处理后,将含主穗的稻苞剪下,然后将该稻苞浸泡于75%的酒精中表面消毒3~4min,接着将该稻苞转移于超净工作台中剥离主穗,进一步剥取小穗为大小均匀的小支梗,接下来用消毒过的纱布包裹小支梗,然后将纱布投入浓度为0.1%的升汞灭菌10min,无菌水漂洗3~4次,打开纱布晾干,最后用消毒过的剪刀剪开花药上部,抖药法接种花药于诱导培养基。

3.根据权利要求3所述的水稻高温抗性突变株的筛选方法,其特征在于:所述步骤(2.2)中的花药诱导培养基配方为:N6大量元素+MS微量元素+MS有机质+2mg/L2,4-D+0.5mg/LNAA+0.5mg/L水解蛋白+5%蔗糖+0.8%植物凝胶,pH值为5.8。

4.根据权利要求1所述的水稻高温抗性突变株的筛选方法,其特征在于:所述步骤2)中诱导培养的培养条件控制为:温度26~28℃,暗培养。

5.根据权利要求1所述的水稻高温抗性突变株的筛选方法,其特征在于:所述步骤3)常温分化培养与热处理的光照条件均为:光照强度为1000~1500Lux,光周期为14h光/10h暗。

6.根据权利要求1所述的水稻高温抗性突变株的筛选方法,其特征在于:所述步骤3)和4)中分化培养基配方为:MS无机盐+MS有机物+蔗糖3%+琼脂0.7%+KT2.0mg/L+NAA0.5 mg/L+水解蛋白1g/L,pH值为5.8。

7.根据权利要求1所述的水稻高温抗性突变株的筛选方法,其特征在于:所述步骤4)中活性愈伤特点为:结构疏松、表面具球形颗粒、颜色浅而透明。

8.根据权利要求1所述的水稻高温抗性突变株的筛选方法,其特征在于:所述步骤4)中复苏剂成分为:维生素C 0.3~0.4g/L,维生素E 0.6~0.8g/L,Na2-EDTA 0.8~1.0g/L,FeSO4∙7H2O 0.5~0.7g/L,ZnSeO4·5H2O1.2~1.5g/L,MgSO4·7H2O 0.6~0.8g/L,植物硫化激动素PSK-α 0.02~0.03μmol/L。

9.根据权利要求1所述的水稻高温抗性突变株的筛选方法,其特征在于:所述步骤5)中继代培养基配方为:1/2MS大量+MS微量+MS有机物+蔗糖3%+多效唑 0.2~0.3mg/L+琼脂0.8%,pH值为5.8。

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