山鸡椒组培苗生根培养基及培养方法与流程

本发明涉及山鸡椒组培苗根培养技术领域，具体而言，涉及山鸡椒组培苗生根培养基及培养方法。

背景技术：

山鸡椒(litseacubeba(lour.)pers.)，又名山苍子，山苍树等，属于樟科(lauracea)木姜子属(litsealam)落叶灌木或小乔木，是原产于我国的珍贵天然香料植物。其果实、叶、花等组织可蒸提精油，精油中柠檬醛含量高达60-90％，是制造高级化妆品、药品、食品添加剂、病虫害防治剂、润滑油等的重要原料。山鸡椒精油市场需求巨大，然而在山鸡椒精油加工中多利用野生山鸡椒资源，并且多以毁灭性的砍树为主要采摘方式，致使山鸡椒资源严重枯竭，苗木供应极度紧张。传统繁殖方式是种子繁殖，然而山鸡椒种子发芽率极低，且优良性质不能稳定遗传，严重影响山鸡椒精油质量和产量。采用组织培养方法可极大缩短育苗周期，不仅繁殖率高且可保持繁殖母株优良性状，是解决山鸡椒苗木原料供应紧张的极佳手段。

目前，采用常见培养基对山鸡椒组培苗生根培养的生根率可达80％左右，但是组培生根率可直接影响组培生产成本，而且关系到移栽成活率的高低，因此有必要对山鸡椒组培苗生根培养基及培养方法作进一步优化。

有鉴于此，特提出本发明以解决上述技术问题。

技术实现要素：

本发明的第一个目的在于提供一种山鸡椒组培苗生根培养基，采用该生根培养基可有效提高山鸡椒组培苗的生根率，以改善采用现有山鸡椒组培苗生根培养基对山鸡椒组培苗的生根率提升效果不佳的技术问题。

本发明的第二个目的在于提供一种山鸡椒组培苗生根培养方法。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供了一种山鸡椒组培苗生根培养基，主要由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，吲哚丁酸(indolebutyricacid，iba)0.7-0.9mg/l，吲哚乙酸(indoleaceticacid，iaa)0.2-0.3mg/l，萘乙酸(naphthylaceticacid，naa)0.1-0.2mg/l，活性炭(activatedcarbon，ac)0.5-1.0mg/l，蔗糖19.0-21.0g/l和琼脂7.0-8.0g/l，ph为5.8-6.0。

进一步的，所述山鸡椒组培苗生根培养基主要由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.75-0.85mg/l，iaa0.2-0.3mg/l，naa0.1-0.15mg/l，ac0.75-1.0mg/l，蔗糖19.5-20.5g/l和琼脂7.2-7.8g/l，ph为5.8-6.0。

进一步的，所述山鸡椒组培苗生根培养基主要由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.8mg/l，iaa0.2-0.3mg/l，naa0.1mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8。

进一步的，所述1/2ms基本培养基包括大量元素、微量元素、铁盐和有机物，主要由以下浓度的组分组成：

大量元素：硝酸钾950mg/l，硝酸铵825mg/l，七水硫酸镁185mg/l，磷酸二氢钾85mg/l，二水氯化钙220mg/l；

微量元素：四水硫酸锰22.3mg/l，七水硫酸锌8.6mg/l，硼酸6.2mg/l，碘化钾0.83mg/l，二水钼酸钠0.25mg/l，五水硫酸铜0.025mg/l，六水氯化钴0.025mg/l；

铁盐：七水硫酸亚铁27.8mg/l，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l；

有机物：甘氨酸2mg/l，盐酸吡哆醇0.5mg/l，盐酸硫胺素0.1mg/l，烟酸0.5mg/l，肌醇100mg/l。

进一步的，采用所述山鸡椒组培苗生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养，生根率大于等于95％。

本发明还提供了一种山鸡椒组培苗的生根培养方法，采用上述的山鸡椒组培苗生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养。

进一步的，所述生根培养的条件为：培养温度为23-27℃，光照时间15-16h，黑暗时间为8-9h，光照强度为1800-2200lux，培养时间至少为25天。

进一步的，所述生根培养的条件为：培养温度为23-27℃，光照时间16h，黑暗时间为8h，光照强度为2000lux，培养时间为25天。

进一步的，选取木质化、长约2-3cm的山鸡椒组培苗进行生根培养。

进一步的，采用所述山鸡椒组培苗生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养，生根率大于等于95％。

与已有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明提供了一种山鸡椒组培苗生根培养基，该生根培养基是在基本培养基的基础上引入吲哚丁酸、吲哚乙酸、萘乙酸等生根诱导物质，并利用各物质的协同配合作用并通过对各物质用量的限定，使得该生根培养基对于山鸡椒组培苗有较强的诱导生根效应，从而使得山鸡椒组培苗的生根率达到95％以上，移栽成活率达到100％，有效改善了采用传统山鸡椒组培苗生根培养基对于组培苗的生根率以及移栽成活率提升效果不佳的技术问题。

(2)本发明提供了一种山鸡椒组培苗的生根培养方法，通过采用上述山鸡椒组培苗生根培养基以及调整培养条件，使得山鸡椒组培苗的生根率有了进一步提高，为山鸡椒的工厂化生产提供了更可靠、操作性更强的技术依据，加快了其繁殖与推广。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为采用实施例10中的山鸡椒组培苗生根培养基和生根培养条件培养出的组培苗的生根情况；

图2为采用对比例14中的山鸡椒组培苗生根培养基和生根培养条件培养出的组培苗的生根情况；

图3为采用实施例10中的山鸡椒组培苗生根培养基和生根培养条件培养出的组培苗生根后的移栽成活情况，处于同一水平上的三株组培苗为同一生长时期，其中：(a)移栽10天；(b)移栽30天；(c)移栽60天。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

根据本发明的一个方面，提供了一种山鸡椒组培苗生根培养基，主要由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.7-0.9mg/l，iaa0.2-0.3mg/l，naa0.1-0.2mg/l，ac0.5-1.0mg/l，蔗糖19.0-21.0g/l和琼脂7.0-8.0g/l，ph为5.8-6.0。

本发明提供的山鸡椒组培苗生根培养基，是在基本培养基的基础上引入吲哚丁酸、吲哚乙酸、萘乙酸等生根诱导物质，并利用各物质的协同配合作用以及对各物质用量的特定限定，使得该生根培养基对于山鸡椒组培苗有较强的诱导生根效应，从而使得山鸡椒组培苗的生根率达到95％以上，移栽成活率达到100％，改善了采用传统山鸡椒组培苗生根培养基对于组培苗的生根率以及移栽成活率提升效果不佳的技术问题。

具体的，利用根系吸收营养和水分是植物一种本能，培养基中高的营养元素及糖可使组培苗产生依赖性而不易生根，减少营养成分及糖的浓度即可刺激生根。另外，培养基中的一些无机盐成分不利于根的产生，故要适当降低无机盐浓度才有利于根的分化，因此本发明在以ms为基本培养基的生根培养中，大量元素要降到1/2，故选用1/2ms为基本培养基。

在组织培养中，外植体的生根与外源激素的作用密不可分，其中适当浓度的生长素类物质对生根影响很大，具有一定的诱导分化作用。不同植物对生根诱导所需要生长素类物质的种类也不同。

本发明中，主要是选用吲哚丁酸、吲哚乙酸、萘乙酸生长素类物质作为生根诱导物质。

其中，吲哚丁酸，又称iba，其主要作用是诱导插枝生根，尤其是不定根的生长。

iba典型但非限定的浓度为0.7mg/l、0.72mg/l、0.74mg/l、0.76mg/l、0.78mg/l、0.80mg/l、0.82mg/l、0.84mg/l、0.86mg/l、0.88mg/l或0.90mg/l。

吲哚乙酸，又称iaa，可由茎、叶和根系吸收，使用浓度不同，既可起促进作用，也可起抑制作用。稳定性相对较差，强光照条件下更容易氧化分解，用于组织培养中，诱导愈伤组织和根的形成，以加速根的形成和提高植株生根的百分率。

iaa典型但非限定的浓度为0.2mg/l、0.21mg/l、0.22mg/l、0.23mg/l、0.24mg/l、0.25mg/l、0.26mg/l、0.27mg/l、0.28mg/l、0.29mg/l或0.3mg/l。

萘乙酸，又称naa，为人工合成的生长素类物质，在使用过程中不易氧化、稳定性更强。

naa典型但非限定的浓度为0.1mg/l、0.11mg/l、0.12mg/l、0.13mg/l、0.14mg/l、0.15mg/l、0.16mg/l、0.17mg/l、0.18mg/l、0.19mg/l或0.2mg/l。

在培养基中加入活性炭(ac)，其目的主要是利用其吸附能力，减少一些有害物质的不利影响，同时也创造暗环境，对某些植物诱导生根有利。

在本发明中，ac典型但非限定的浓度为0.5mg/l、0.55mg/l、0.6mg/l、0.65mg/l、0.7mg/l、0.75mg/l、0.8mg/l、0.85mg/l、0.9mg/l、095mg/l、或1.0mg/l。

在组织快繁中，被培养的培养物大多不能进行光合作用，能进行的也不能满足其对糖类的需求，因此必须在培养基中添加糖作为碳源和能源，同时对维持培养基一定的渗透压也有重要作用。而蔗糖是最重要的碳源之一。

在本发明中，蔗糖典型但非限定的浓度为19.0mg/l、19.2mg/l、19.4mg/l、19.6mg/l、19.8mg/l、20.0mg/l、20.2mg/l、20.4mg/l、20.6mg/l、20.8mg/l或21.0mg/l。

琼脂典型但非限定的浓度为7.0mg/l、7.1mg/l、7.2mg/l、7.3mg/l、7.4mg/l、7.5mg/l、7.6mg/l、7.7mg/l、7.8mg/l、7.9mg/l或8.0mg/l。

本发明所述的“主要由……组成”，意指其除所述组分外，还可以包括其他组分，这些其他组分赋予山鸡椒组培苗生根培养基不同的特性。除此之外，本发明所述的“主要由……组成”，还可以替换为封闭式的“为”或“由……组成”。

在本发明的一种优选实施方式中，所述山鸡椒组培苗生根培养基主要由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.75-0.85mg/l，iaa0.2-0.3mg/l，naa0.1-0.15mg/l，ac0.75-1.0mg/l，蔗糖19.5-20.5g/l和琼脂7.2-7.8g/l，ph为5.8-6.0。

在本发明的一种优选实施方式中，所述山鸡椒组培苗生根培养基主要由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.8mg/l，iaa0.2-0.3mg/l，naa0.1mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l，琼脂7.5g/l，ph为5.8。

组培苗对生根培养基中的添加物，尤其是生根诱导物质的种类和浓度非常敏感，通过合理选择和搭配山鸡椒组培苗生根培养基中的各组分，使得各组分之间的协同配合作用更强，山鸡椒组培苗生根培养基对于组培苗的生根诱导作用更强，使得生根率进一步提高。

在本发明的一种优选实施方式中，所述1/2ms基本培养基包括大量元素、微量元素、铁盐和有机物，主要由以下浓度的组分组成：

大量元素：硝酸钾950mg/l，硝酸铵825mg/l，七水硫酸镁185mg/l，磷酸二氢钾85mg/l，二水氯化钙220mg/l；

微量元素：四水硫酸锰22.3mg/l，七水硫酸锌8.6mg/l，硼酸6.2mg/l，碘化钾0.83mg/l，二水钼酸钠0.25mg/l，五水硫酸铜0.025mg/l，六水氯化钴0.025mg/l；

铁盐：七水硫酸亚铁27.8mg/l，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l；

有机物：甘氨酸2mg/l，盐酸吡哆醇0.5mg/l，盐酸硫胺素0.1mg/l，烟酸0.5mg/l，肌醇100mg/l。

与ms基本培养基相比，1/2ms基本培养基中的大量元素要降到1/2，其他微量元素、铁盐、有机物浓度不变。

应该说明的是，上述1/2ms基本培养基中的各组分以及iba、iaa、naa、ac、蔗糖、琼脂等各物质的浓度均具有相同的计算基准。

在本发明的一种优选实施方式中，采用所述山鸡椒组培苗生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养，生根率大于等于95％。

采用的山鸡椒组培苗生根培养基对山鸡椒组培苗有较强的生根诱导效应，生根率大于等于95％，典型但非限制性的生根率为95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％、99.5％或100％。

根据本发明的另一个方面，还提供了一种山鸡椒组培苗的生根培养方法，采用上述山鸡椒组培苗生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养。

成功的组织培养，在很大程度上依赖于对培养基的选择。在山鸡椒组培苗生根培养方法中采用上述山鸡椒组培苗生根培养基，该生根培养基是利用iaa、iba、naa与1/2ms基本培养基协同配合作用，以及在适宜的培养条件下，使得山鸡椒组培苗的生根率可达到95％以上。

根的生长关系到移栽成活率的高低，高的生根率有助于移栽成活率的提升。采用本发明提供的山鸡椒组培苗生根培养基，并且在适宜的培养条件下，生根率可达95％以上，移栽成活率达到100％。

在本发明的一种优选实施方式中，所述生根培养的条件为：培养温度为23-27℃，光照时间15-16h，黑暗时间为8-9h，光照强度为1800-2200lux，培养时间至少为25天。

生根培养条件对于组培苗的生根发育以及后期的移栽成活具有很大影响。在本发明中，典型但非限制性的培养温度为23℃、23.5℃、24℃、24.5℃、25℃、25.5℃、26℃、26.5℃或27℃。

典型但非限制性的光照时间为15h、15.5h或16h，黑暗时间为8h、8.5h或9h。

典型但非限制性的光照强度为1800lux、1850lux、1900lux、1950lux、2000lux、2050lux、2100lux、2150lux或2200lux。

在本发明的一种优选实施方式中，所述生根培养的条件为：培养温度为23-27℃，光照时间16h，黑暗时间为8h，光照强度为2000lux，培养时间为25天。

通过对生根培养条件的进一步限定，进一步提高山鸡椒组培苗的生根率以及后期的移栽成活率。

在本发明的一种优选实施方式中，选取木质化、长约2-3cm的山鸡椒组培苗进行生根培养。

山鸡椒组培苗的来源主要是通过将选取的外植体采用初代培养后再继代培养得到。

材料选取：采取健康、无病虫害的山鸡椒半木质化带芽枝条作为外植体；

材料预处理：将外植体在自来水浸泡16小时，剪取带芽茎段2-3cm，用自来水冲洗干净，洗衣粉溶液浸泡10-15分钟，流水冲洗1小时；

消毒处理：70％酒精浸泡20s，0.1％升汞消毒7min，无菌水冲洗5遍；

初代培养：接种于初代培养基中进行诱导分化培养，得到初代组培苗；

继代培养：再将初代组培苗置于继代培养基中，得到健壮的继代苗。

在得到的继代苗中选取木质化、长约2-3cm的山鸡椒组培苗进行生根培养，可以促使山鸡椒无根苗出根整齐一致，提高生根率。

在本发明的一种优选实施方式中，采用上述山鸡椒组培苗生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养，生根率大于等于95％。

在本发明的一种优选实施方式中，所述山鸡椒组培苗生根培养基主要由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，吲哚丁酸0.7-0.9mg/l，吲哚乙酸0.2-0.3mg/l，萘乙酸0.1-0.2mg/l，活性炭0.5-1.0mg/l，蔗糖19.0-21.0g/l，琼脂7.0-8.0g/l，ph为5.8-6.0；

优选的，所述山鸡椒组培苗生根培养基主要由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，吲哚丁酸0.8mg/l，吲哚乙酸0.2-0.3mg/l，萘乙酸0.1mg/l，活性炭1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8。

下面结合具体实施例和对比例，对本发明作进一步说明。

材料选取：采取健康、无病虫害的山鸡椒半木质化带芽枝条作为外植体；

材料预处理：将外植体在自来水浸泡16h，剪取带芽茎段2-3cm，用自来水冲洗干净，洗衣粉溶液浸泡10-15min，流水冲洗1h；

消毒处理：70％酒精浸泡20s，0.1％升汞消毒7min，无菌水冲洗5遍；

初代培养：接种于初代培养基中进行诱导分化培养，得到初代组培苗，初代培养基为ms+ba2.0mg/l+iba0.1mg/l；

继代培养：再将初代组培苗置于继代培养基中，得到健壮的继代苗，继代培养基为ms+ba2.0mg/l+iba0.1mg/l；

其中ba(benzylaminopurine)为苄氨基腺嘌呤。

在得到的继代苗中选取木质化、长约2-3cm的山鸡椒组培苗进行生根培养，选用实施例1-14和对比例1-16的山鸡椒组培苗生根培养基和培养方法进行生根培养。

实施例1

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.7mg/l，iaa0.2mg/l，naa0.1mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖19.0g/l和琼脂7.0g/l，ph为6.0。

实施例2

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.7mg/l，iaa0.2mg/l，naa0.1mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖21.0g/l和琼脂8.0g/l，ph为6.0。

实施例3

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.8mg/l，iaa0.2mg/l，naa0.1mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8。

实施例4

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.8mg/l，iaa0.3mg/l，naa0.1mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8。

实施例5

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.8mg/l，iaa0.2mg/l，naa0.1mg/l，ac0.5mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8。

实施例6

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.8mg/l，iaa0.3mg/l，naa0.2mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8。

实施例7

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.9mg/l，iaa0.25mg/l，naa0.15mg/l，ac0.8mg/l，蔗糖21.0g/l和琼脂7.0g/l，ph为5.9。

实施例8

一种山鸡椒组培苗的生根培养方法，采用实施例1的山鸡椒组培苗生根培养基，生根培养的条件为：培养温度为23℃左右，光照时间15h，黑暗时间为9h，光照强度为1900lux，培养时间为25天。

实施例9

一种山鸡椒组培苗的生根培养方法，采用实施例2的山鸡椒组培苗生根培养基，生根培养的条件与实施例8中的生根培养的条件相同。

实施例10

一种山鸡椒组培苗的生根培养方法，采用实施例3的山鸡椒组培苗生根培养基，生根培养的条件为：培养温度为25℃左右，光照时间16h，黑暗时间为8h，光照强度为2000lux，培养时间为25天。

实施例11

一种山鸡椒组培苗的生根培养方法，采用实施例4的山鸡椒组培苗生根培养基，生根培养的条件与实施例10的生根培养的条件相同。

实施例12

一种山鸡椒组培苗的生根培养方法，采用实施例5的山鸡椒组培苗生根培养基，生根培养的条件与实施例10的生根培养的条件相同。

实施例13

一种山鸡椒组培苗的生根培养方法，采用实施例6的山鸡椒组培苗生根培养基，生根培养的条件与实施例10的生根培养的条件相同。

实施例14

一种山鸡椒组培苗的生根培养方法，采用实施例7的山鸡椒组培苗生根培养基，生根培养的条件为：培养温度为27℃左右，光照时间16h，黑暗时间为8h，光照强度为2200lux，培养时间为25天。

对比例1

本对比例为实施例10的对比例，除了iba的浓度为0.50mg/l，山鸡椒组培苗生根培养基的其他组分与浓度以及培养条件与实施例10相同。

对比例2

本对比例为实施例11的对比例，除了iba的浓度为0.50mg/l，山鸡椒组培苗生根培养基的其他组分与浓度以及培养条件与实施例11相同。

对比例3

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.5mg/l，iaa0.1mg/l，naa0.1mg/l，ac0.5mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8；

采用该生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养的培养条件为：培养温度为25℃左右，光照时间16h，黑暗时间为8h，光照强度为2000lux，培养时间为25天。

对比例4

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.5mg/l，iaa0.2mg/l，naa0.4mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8；

采用该生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养的培养条件为：培养温度为25℃左右，光照时间16h，黑暗时间为8h，光照强度为2000lux，培养时间为25天。

对比例5

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.5mg/l，iaa0.3mg/l，naa0.4mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8。

采用该生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养的培养条件与对比例4相同。

对比例6

本对比例为实施例10的对比实验，除了naa的浓度为0.40mg/l，山鸡椒组培苗生根培养基的其他组分与浓度以及培养条件与实施例10相同。

对比例7

本对比例为实施例11的对比实验，除了naa的浓度为0.40mg/l，山鸡椒组培苗生根培养基的其他组分与浓度以及培养条件与实施例11相同。

对比例8

本对比例为实施例12的对比实验，除了iaa的浓度为0.10mg/l，山鸡椒组培苗生根培养基的其他组分与浓度以及培养条件与实施例12相同。

对比例9

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.20mg/l，iaa0.20mg/l，naa0.10mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖19.0g/l和琼脂7.0g/l，ph为5.9；

采用该生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养的培养条件为：培养温度为26℃左右，光照时间16h，黑暗时间为8h，光照强度为2100lux，培养时间为25天。

对比例10

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.20mg/l，iaa0.30mg/l，naa0.10mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖19.0g/l和琼脂7.0g/l，ph为5.9；

采用该生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养的培养条件与对比例9相同。

对比例11

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.20mg/l，iaa0.20mg/l，naa0.40mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖19.0g/l和琼脂7.0g/l，ph为5.9；

采用该生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养的培养条件与对比例9相同。

对比例12

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.20mg/l，iaa0.30mg/l，naa0.40mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖19.0g/l和琼脂7.0g/l，ph为5.9；

采用该生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养的培养条件与对比例9相同。

对比例13

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.20mg/l，iaa0.10mg/l，naa0.10mg/l，ac0.5mg/l，蔗糖21.0g/l和琼脂8.0g/l，ph为6.0；

采用该生根培养基对山鸡椒组培苗进行生根培养的培养条件与对比例9相同。

对比例14

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.80mg/l，iaa0.20mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8。

本对比例为实施例10的对比实验，除了在该山鸡椒组培苗生根培养基中未添加naa外，山鸡椒组培苗生根培养基的其他组分与浓度以及培养条件与实施例10相同。

对比例15

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.80mg/l，naa0.20mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8；

本对比例为实施例10的对比实验，除了在该山鸡椒组培苗生根培养基中未添加iaa外，山鸡椒组培苗生根培养基的其他组分与浓度以及培养条件与实施例10相同。

对比例16

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iaa0.20mg/l，naa0.10mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8；

本对比例为实施例10的对比实验，除了在该山鸡椒组培苗生根培养基中未添加iba外，山鸡椒组培苗生根培养基的其他组分与浓度以及培养条件与实施例10相同。

对比例17

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iba0.8mg/l，iaa0.3mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8；

本对比例为实施例11的对比实验，除了在该山鸡椒组培苗生根培养基中未添加naa外，山鸡椒组培苗生根培养基的其他组分与浓度以及培养条件与实施例11相同。

对比例18

一种山鸡椒组培苗生根培养基，由以下浓度的组分组成：1/2ms基本培养基，iaa0.30mg/l，naa0.10mg/l，ac1.0mg/l，蔗糖20.0g/l和琼脂7.5g/l，ph为5.8；

本对比例为实施例11的对比实验，除了在该山鸡椒组培苗生根培养基中未添加iba外，山鸡椒组培苗生根培养基的其他组分与浓度以及培养条件与实施例11相同。

对比例19

本对比例为实施例11的对比实验，除了蔗糖的浓度为17.00mg/l外，山鸡椒组培苗生根培养基的其他组分与浓度以及培养条件与实施例11相同。

需要说明的是，上述所有实施例和对比例中采用的1/2ms基本培养基组成均相同，包括大量元素、微量元素、铁盐和有机物，主要由以下浓度的组分组成：

大量元素：硝酸钾950mg/l，硝酸铵825mg/l，七水硫酸镁185mg/l，磷酸二氢钾85mg/l，二水氯化钙220mg/l；

微量元素：四水硫酸锰22.3mg/l，七水硫酸锌8.6mg/l，硼酸6.2mg/l，碘化钾0.83mg/l，二水钼酸钠0.25mg/l，五水硫酸铜0.025mg/l，六水氯化钴0.025mg/l；

铁盐：七水硫酸亚铁27.8mg/l，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l；

有机物：甘氨酸2mg/l，盐酸吡哆醇0.5mg/l，盐酸硫胺素0.1mg/l，烟酸0.5mg/l，肌醇100mg/l。

实验例1

采用上述实施例8-14和对比例1-19的山鸡椒组培苗生根培养基在各自的培养条件下对山鸡椒组培苗进行诱导生根实验，均取50株，对生根率、平均根数、平均根长和移栽成活率进行测定。其中，生根率(％)＝生根株数/接种总株数×100％，平均根数＝总生根数/总株数，平均根长＝所有根总长/总生根数，移栽成活率＝移栽成活株数/移栽总株数×100％，需要说明的是，各实施例与对比例所采用的移栽基质均相同，且移栽成活率是在移栽后30天进行统计的，具体测定结果见表1：

表1各实施例和对比例中的山鸡椒组培苗的生根情况测定结果

从表1中可以看出，实施例8-14提供的山鸡椒组培苗生根培养基对于山鸡椒组培苗的生根诱导效应远高于对比例1-19中的山鸡椒组培苗生根培养基。

具体的，实施例11为实施例10的对照实验，两者不同之处在于山鸡椒组培苗生根培养基中iaa的浓度不同。iaa的浓度不同，对于组培苗生根诱导效应不同。

实施例12为实施例10的对照实验，两者不同之处在于山鸡椒组培苗生根培养基中活性炭的浓度不同。在一定范围内，活性炭的含量越多，越能吸附培养基中的有害物质，从而对于山鸡椒组培苗诱导生根有利。

对比例1和对比例2分别为实施例10和实施例11的对比实验，在实施例10和实施例11中的山鸡椒组培苗生根培养基中iba浓度为0.8mg/l，对比例1和对比例2中的iba浓度为0.5mg/l。从表1中数据可以看出，山鸡椒组培苗对于iba的浓度的浓度较为敏感，iba能够促进根系条数的增加，对于山鸡椒组培苗的生根生长有显著作用。

对比例4为对比例1的对比实验，两者不同之处在于naa的浓度不同。由此可以看出，naa浓度的变化，也直接影响着山鸡椒组培苗的生根率。

对比例6和对比例7分别为实施例10和实施例11的对比实验，在实施例10和实施例11的山鸡椒组培苗生根培养基中naa的浓度为0.1mg/l，对比例1和对比例2中naa的浓度为0.4mg/l。从表1中数据可以看出，naa浓度越大，反而不利于山鸡椒组培苗生根率的提升，故naa的浓度应在适宜的范围内。

对比例8为实施例12的对比实验，两者不同之处在于山鸡椒组培苗生根培养基中iaa的浓度不同。当iaa的浓度超出0.20-0.30mg/l这个范围时，山鸡椒组培苗生根率有所下降。

对比例14-16均为实施例10的对比实验，实施例10中山鸡椒组培苗生根培养基为1/2ms+iba0.8mg/l+iaa0.2mg/l+naa0.1mg/l+ac1mg/l+蔗糖20g/l+琼脂7.5g/l，对比例14中山鸡椒组培苗生根培养基为1/2ms+iba0.8mg/l+iaa0.2mg/l+ac1mg/l+蔗糖20g/l+琼脂7.5g/l，对比例15中山鸡椒组培苗生根培养基为1/2ms+iba0.8mg/l+naa0.1mg/l+ac1mg/l+蔗糖20g/l+琼脂7.5g/l，对比例16中山鸡椒组培苗生根培养基为1/2ms+iaa0.2mg/l+naa0.1mg/l+ac1mg/l+蔗糖20g/l+琼脂7.5g/l，可以看出，对比例14-16采用的生根诱导物质为iba、iaa和naa其中两种物质的组合。从表1中可以看出，采用实施例10中的山鸡椒组培苗生根培养基不论是从生根率或者平均根数、平均根长来讲，还是从移栽成活率来讲，均远远优于对比例14-16。

图1为采用实施例10中的山鸡椒组培苗生根培养基和生根培养条件培养出的组培苗的生根情况，图2为采用对比例14中的山鸡椒组培苗生根培养基和生根培养条件培养出的组培苗的生根情况，图1和图2所示仅是实施例10和对比例14在各自50株平行样中具有代表性的一株。从图1和2中也可以很直观的看出，采用实施例10进行生根培养的山鸡椒组培苗根长较长，且枝芽长势较好，其生根情况明显优于采用对比例14培养的山鸡椒组培苗的生根情况。而且从图3中可以看出，采用实施例10进行生根培养的山鸡椒组培苗在后期的移栽过程中成活情况良好。

对比例17和对比例18均为实施例11的对比实验。与实施例11不同，对比例17山鸡椒组培苗生根培养基中未添加naa，对比例18山鸡椒组培苗生根培养基中未添加iba。由表1数据可以看出，采用实施例11山鸡椒组培苗生根培养基的生根率可高达100％，即实现100％生根，而且平均根数和平均根长都处于较高水平。而采用对比例17和对比例18山鸡椒组培苗生根培养基的生根率和组培苗生根的平均根数明显低于实施例11，生根率和平均根数则直接影响到后期的移栽成活率，故采用对比例17和对比例18的生根培养基培养的山鸡椒组培苗的移栽成活率也远低于实施例11。

由此可以看出，iba、iaa和naa这三种物质之间存在着协同配合关系，而且这种协同配合关系是在特定的浓度范围内才得以实现的。换而言之，采用iba、iaa和naa这三种物质需要在特定范围内，才能产生对山鸡椒组培苗的良好的诱导生根效应。偏离此特定范围时，生根率、平均根数、平均根长以及移栽成活率都有所降低。

对比例19也为实施例11的对比实验。两者不同之处在于生根培养基中蔗糖的浓度不同。采用对比例19生根培养基的山鸡椒组培苗的生根情况劣于实施例11。蔗糖作为山鸡椒组培苗生根培养中的碳源，浓度过低，会直接影响到山鸡椒组培苗的生根情况，故蔗糖浓度应处于本发明限定的浓度范围内。

综上所述，本发明提供的山鸡椒组培苗生根培养基通过各物质之间的协同配合作用以及对于特定浓度的限定，使得山鸡椒组培苗的生根率可达到95％以上，移栽成活率达到100％，相比采用传统山鸡椒组培苗生根培养基对于山鸡椒组培苗的生根率、移栽成活率均有了显著的提升，为山鸡椒的工厂化生产提供了更可靠、操作性更强的技术依据，加快了其繁殖与推广。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。