本发明涉及果树种植技术领域，具体涉及一种慢生根瘤菌提取物的提取方法及其在芒果嫁接上的应用。
背景技术：
目前，嫁接技术在园艺作物上得到广泛使用。生产实践中影响嫁接苗成活的因素除砧穗亲和力外，主要还是与砧穗的营养状况、水分、杀菌等因素有关从而影响嫁接口愈合快慢。为了保证嫁接的成活率，人们应用各种化学物质运用于嫁接以促使嫁接伤口尽快愈合，效果比较明显。现有的研究中，已经嫁接口愈合剂的组分中主要含有萘乙酸、吲哚乙酸和赤霉素等植物生长调节剂、多菌灵等灭菌成分；营养成分、保水成分等。现有技术中，对慢生根瘤菌研究利用相对较少。根瘤菌和豆科植物之间的信号传递、相互识别、基因的顺序表达和调节与根瘤形成、发育和固氮作用有关，对根瘤菌加以研究，促进植物的培育种植具有重大意义。
技术实现要素：
本发明克服了现有技术中对慢生根瘤菌研究利用率低，现有的植物愈合剂促进嫁接口愈合效果不理想，嫁接成活率低的技术问题，提供一种慢生根瘤菌提取物的提取方法及其在芒果嫁接上的应用。
为解决上述问题，本发明采取如下技术方案：
一种慢生根瘤菌提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)慢生根瘤菌的选取培养：从花生根部挑选出慢生根瘤菌，再将花生根干燥后粉碎，采用乙醇进行粗提取得到粗提取物，再将粗提取物进行超临界二氧化碳萃取，将粗萃取物置于超临界萃取斧中进行超临界萃取，以等质量比的乙醇、乙酸乙酯、正丁醇混合液为夹带剂萃取20min得到所述慢生根瘤菌萃取物；所述超临界二氧化碳萃取温度为35℃，萃取压力为35kpa，二氧化碳流速为25l/min；
将挑选出的慢生根瘤菌置于培养基中，于25～28℃下培养5～6d得到培养液，采用纱布将培养液过滤除菌后得到慢生根瘤菌发酵液；所述培养基配方为蛋白胨2g，大豆蛋白5g、琼脂6g、葡萄糖12g，kh2po4、mgso4、水100ml；
将所述慢生根瘤菌萃取物和所述慢生根瘤菌发酵液混合得到所述慢生根瘤菌提取物。
其中，所述慢生根瘤菌萃取物中黄酮的含量不低于84mg/100g。
所述的慢生根瘤菌提取物在芒果嫁接上的应用方法为：将所述慢生根瘤菌提取物制备成促进嫁接伤口愈合剂涂膜于芒果嫁接口，用聚乙烯薄膜条自下而上将砧木和接穗绑扎牢固，再将接穗扎密；所述的促进嫁接伤口愈合剂由质量份的如下组分组成：慢生根瘤菌提取物80～100份、杀菌剂0.1～0.3份、微量元素2～5份、双氧水1～6份、成膜剂2～6份、腐殖酸4～8份、杀虫剂0.1～0.3份、月桂酸1～3份。
其中，所述的杀菌剂为苦参碱、小檗碱、鱼藤酮、白僵菌。
其中，所述杀虫剂为除虫菊素和印楝素。
其中，所述的成膜剂由质量份的如下组分组成：壳聚糖1～4份、大豆蛋白3～6份、玉米淀粉1～5份、卡拉胶2～4份。
本发明与现有技术相比较具有以下有益效果：
(1)本发明将慢生根瘤菌萃取物和所述慢生根瘤菌发酵液混合制成慢生根瘤菌提取物，其含有促进植物生长，吸收固氮的生长因子，慢生根瘤菌萃取物含有的黄酮类物质具有抑菌杀菌作用，同时还可渗透进嫁接伤口诱导芒果吸收营养物质，促进生长发育。慢生根瘤菌发酵液中含有多种生物酶，其与慢生根瘤菌萃取物中的生长因子配合可取代现有技术中常用的植物生长调节剂，有效的促进芒果的生长,同时促进芒果在嫁接口结痂愈合，嫁接口愈合时间短。
(2)本发明的促进嫁接伤口愈合剂由慢生根瘤菌提取物、杀菌剂、微量元素、双氧水、成膜剂、腐殖酸、杀虫剂、月桂酸组成，其相互配合，有效促进芒果嫁接伤口的愈合，芒果嫁接成活率高。
具体实施方式
下面结合实施例和试验对本发明作进一步说明。
实施例1
一种慢生根瘤菌提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)慢生根瘤菌的选取培养：从花生根部挑选出慢生根瘤菌，再将花生根干燥后粉碎，采用乙醇进行粗提取得到粗提取物，再将粗提取物进行超临界二氧化碳萃取，将粗萃取物置于超临界萃取斧中进行超临界萃取，以等质量比的乙醇、乙酸乙酯、正丁醇混合液为夹带剂萃取20min得到所述慢生根瘤菌萃取物；所述超临界二氧化碳萃取温度为35℃，萃取压力为35kpa，二氧化碳流速为25l/min。将挑选出的慢生根瘤菌置于培养基中，于28℃下培养5d得到培养液，采用纱布将培养液过滤除菌后得到慢生根瘤菌发酵液；所述培养基配方为蛋白胨2g，大豆蛋白5g、琼脂6g、葡萄糖12g，kh2po4、mgso4、水100ml。将所述慢生根瘤菌萃取物和所述慢生根瘤菌发酵液混合得到所述慢生根瘤菌提取物。其中，所述慢生根瘤菌萃取物中黄酮的含量不低于84mg/100g。
所述的慢生根瘤菌提取物在芒果嫁接上的应用方法为：将所述慢生根瘤菌提取物制备成促进嫁接伤口愈合剂涂膜于芒果嫁接口，用聚乙烯薄膜条自下而上将砧木和接穗绑扎牢固，再将接穗扎密；所述的促进嫁接伤口愈合剂由质量份的如下组分组成：慢生根瘤菌提取物100份、杀菌剂0.1份、微量元素5份、双氧水1份、成膜剂6份、腐殖酸4份、杀虫剂0.3份、月桂酸1份。所述杀菌剂为苦参碱、小檗碱、鱼藤酮、白僵菌，所述杀虫剂为除虫菊素和印楝素。所述成膜剂由质量份的如下组分组成：壳聚糖4份、大豆蛋白3份、玉米淀粉5份、卡拉胶2份。
实施例2
一种慢生根瘤菌提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)慢生根瘤菌的选取培养：从花生根部挑选出慢生根瘤菌，再将花生根干燥后粉碎，采用乙醇进行粗提取得到粗提取物，再将粗提取物进行超临界二氧化碳萃取，将粗萃取物置于超临界萃取斧中进行超临界萃取，以等质量比的乙醇、乙酸乙酯、正丁醇混合液为夹带剂萃取20min得到所述慢生根瘤菌萃取物；所述超临界二氧化碳萃取温度为35℃，萃取压力为35kpa，二氧化碳流速为25l/min。将挑选出的慢生根瘤菌置于培养基中，于25℃下培养6d得到培养液，采用纱布将培养液过滤除菌后得到慢生根瘤菌发酵液；所述培养基配方为蛋白胨2g，大豆蛋白5g、琼脂6g、葡萄糖12g，kh2po4、mgso4、水100ml。将所述慢生根瘤菌萃取物和所述慢生根瘤菌发酵液混合得到所述慢生根瘤菌提取物。其中，所述慢生根瘤菌萃取物中黄酮的含量不低于84mg/100g。
所述的慢生根瘤菌提取物在芒果嫁接上的应用方法为：将所述慢生根瘤菌提取物制备成促进嫁接伤口愈合剂涂膜于芒果嫁接口，用聚乙烯薄膜条自下而上将砧木和接穗绑扎牢固，再将接穗扎密；所述的促进嫁接伤口愈合剂由质量份的如下组分组成：慢生根瘤菌提取物80份、杀菌剂0.3份、微量元素2份、双氧水6份、成膜剂2份、腐殖酸8份、杀虫剂0.1份、月桂酸3份。所述杀菌剂为苦参碱、小檗碱、鱼藤酮、白僵菌，所述杀虫剂为除虫菊素和印楝素。所述成膜剂由质量份的如下组分组成：壳聚糖1份、大豆蛋白6份、玉米淀粉1份、卡拉胶4份。
实施例3
一种慢生根瘤菌提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)慢生根瘤菌的选取培养：从花生根部挑选出慢生根瘤菌，再将花生根干燥后粉碎，采用乙醇进行粗提取得到粗提取物，再将粗提取物进行超临界二氧化碳萃取，将粗萃取物置于超临界萃取斧中进行超临界萃取，以等质量比的乙醇、乙酸乙酯、正丁醇混合液为夹带剂萃取20min得到所述慢生根瘤菌萃取物；所述超临界二氧化碳萃取温度为35℃，萃取压力为35kpa，二氧化碳流速为25l/min。将挑选出的慢生根瘤菌置于培养基中，于26℃下培养5d得到培养液，采用纱布将培养液过滤除菌后得到慢生根瘤菌发酵液；所述培养基配方为蛋白胨2g，大豆蛋白5g、琼脂6g、葡萄糖12g，kh2po4、mgso4、水100ml。将所述慢生根瘤菌萃取物和所述慢生根瘤菌发酵液混合得到所述慢生根瘤菌提取物。其中，所述慢生根瘤菌萃取物中黄酮的含量不低于84mg/100g。
所述的慢生根瘤菌提取物在芒果嫁接上的应用方法为：将所述慢生根瘤菌提取物制备成促进嫁接伤口愈合剂涂膜于芒果嫁接口，用聚乙烯薄膜条自下而上将砧木和接穗绑扎牢固，再将接穗扎密；所述的促进嫁接伤口愈合剂由质量份的如下组分组成：慢生根瘤菌提取物900份、杀菌剂0.2份、微量元素3份、双氧水5份、成膜剂5份、腐殖酸7份、杀虫剂0.2份、月桂酸2份。所述杀菌剂为苦参碱、小檗碱、鱼藤酮、白僵菌，所述杀虫剂为除虫菊素和印楝素。所述成膜剂由质量份的如下组分组成：壳聚糖2份、大豆蛋白5份、玉米淀粉3份、卡拉胶3份。
实施例4
一种慢生根瘤菌提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)慢生根瘤菌的选取培养：从花生根部挑选出慢生根瘤菌，再将花生根干燥后粉碎，采用乙醇进行粗提取得到粗提取物，再将粗提取物进行超临界二氧化碳萃取，将粗萃取物置于超临界萃取斧中进行超临界萃取，以等质量比的乙醇、乙酸乙酯、正丁醇混合液为夹带剂萃取20min得到所述慢生根瘤菌萃取物；所述超临界二氧化碳萃取温度为35℃，萃取压力为35kpa，二氧化碳流速为25l/min。将挑选出的慢生根瘤菌置于培养基中，于27℃下培养5d得到培养液，采用纱布将培养液过滤除菌后得到慢生根瘤菌发酵液；所述培养基配方为蛋白胨2g，大豆蛋白5g、琼脂6g、葡萄糖12g，kh2po4、mgso4、水100ml。将所述慢生根瘤菌萃取物和所述慢生根瘤菌发酵液混合得到所述慢生根瘤菌提取物。其中，所述慢生根瘤菌萃取物中黄酮的含量不低于84mg/100g。
所述的慢生根瘤菌提取物在芒果嫁接上的应用方法为：将所述慢生根瘤菌提取物制备成促进嫁接伤口愈合剂涂膜于芒果嫁接口，用聚乙烯薄膜条自下而上将砧木和接穗绑扎牢固，再将接穗扎密；所述促进嫁接伤口愈合剂由慢生根瘤菌提取物80质量份、微量元素3质量份、成膜剂10质量份组成。
应用例1
将实施例1提取得到的慢生根瘤菌提取物应用芒果嫁接，具体的应用方法为：采用双芽切接法，在砧木离地10～12cm择平直光滑部位作嫁接口，在嫁接口背面用嫁接刀自下而上斜削，削而为45度角，然后在斜面上沿皮层纵切一刀，深达木质部，但不伤木质部，切面长约2.8～3.6cm，再在切面顶部平割一刀，割去初进刀切面的不平整切面；选取粗度与砧木相当的穗条，选平滑一面作削面，用刀从平滑的背面以45度角向下斜削，然后用刀在平滑面从上而下削去皮层，略带木质部，削而应比砧木略长，把削好的接穗插入砧木切口，对准形成层，贴合后用促进伤口嫁接愈合剂涂膜芒果嫁接口用聚乙烯薄膜条自下而上绑扎牢固，再将接穗扎密，芒果芽眼部位只扎单层。
应用例2
将实施例2提取得到的慢生根瘤菌提取物应用芒果嫁接，具体的应用方法为同应用例1。
应用例3
将实施例4提取得到的慢生根瘤菌提取物应用芒果嫁接，具体的应用方法为同应用例1。
应用例4
将实施例4提取得到的慢生根瘤菌提取物应用芒果嫁接，具体的应用方法为同应用例1。
为了说明本发明的提取得到的慢生根瘤菌提取物在芒果嫁接应用的技术效果，设置如下对照组。
对照组1
对照组1的与应用例1的应用方法基本相同，区别在于，对照组1的促进嫁接伤口愈合剂中不含有慢生根瘤菌提取物。
对照组2
对照组2的与应用例1的应用方法基本相同，区别在于，对照组2的促进嫁接伤口愈合剂中不含有慢生根瘤菌提取物，但含有吲哚乙酸。
对照组3
对照组3的与应用例1的应用方法基本相同，区别在于，对照组3的慢生根瘤菌提取物中仅含有慢生根瘤菌萃取物。
对照组4
对照组4的与应用例1的应用方法基本相同，区别在于，对照组4的慢生根瘤菌提取物中仅含有慢生根瘤菌发酵液。
为了说明本发明的技术效果，如下实验；
依照应用例1～应用例3以及对照组1～对照组4提供的慢生根瘤菌提取物在芒果嫁接应用方法，将慢生根瘤菌提取物应用于芒果嫁接上，芒果嫁接成活率记录在表1中。
表1
由表1可知，应用例1～应用例4的芒果嫁接成活率相比于对照组1～对照组4高，说明采用含有慢生根瘤菌萃取物和慢生根瘤菌发酵液的促进嫁接伤口愈合剂，可促进芒果嫁接后的愈合，嫁接口愈合时间短，嫁接成活率高。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。