本发明涉及植物组织培养技术领域，具体为一种千里香种子组织培养的方法。
背景技术：
千里香是一种小乔木，千里香是我们生活中常见的调味料的一种，可去除异味，千里香不仅可作为调味料也可作为观赏植物，千里香四季常青，而且开花时花会有浓香味，果实红艳，南部地区多用作围篱材料，或作花圃及宾馆的点缀品，因此可作为盆栽供室内观赏，同时千里香也具有一定的药用价值，因此千里香被广泛种植，进而千里香种子的组织培养的方法也被广泛的研究；
近年来，科研人员对千里香的扦插育苗、嫁接育苗等无性繁殖方式进行了研究，但受季节和材料资源的限制，嫁接苗和扦插苗成活率和出苗率较低，不能高效的进行大规模的繁育，目前关于利用千里香种子为材料进行组织培养的方法还未见报道，为满足千里香种苗的大量需求，适应大规模林业生产，建立成熟的千里香种子组培技术具有极其重要的作用；
因此我们便提出了一种千里香种子组织培养的方法，以便于很好的解决上述问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种千里香种子组织培养的方法，以解决上述背景技术中提出受季节和材料资源的限制，嫁接苗和扦插苗成活率和出苗率较低，不能高效的进行大规模的繁育，不能适应大规模林业生产的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种千里香种子组织培养的方法，包括如下步骤，
s1：诱导培养：将一些千里香种子依次进行剥皮工作，剥皮结束后，对剥皮后的千里香种子依次喷洒75%浓度的酒精，然后倒入升汞溶液中进行30s时间的处理，处理结束后再用无菌水冲洗干净，接着将剥皮且消毒后的千里香种子接种于诱导培养基中进行芽诱导培养；
s2：增殖培养：将s1中萌发的芽依次接种于增殖培养基a和增殖培养基b上，分化出丛芽；
s3：壮苗培养：将步骤2分化出的丛芽接种于壮苗培养基上培养内，通过壮苗培养基给丛芽一定的营养成分，使得丛芽长至壮苗；
s4：生根培养：先将生根组培苗置于温室中炼苗一段时间，然后开盖取苗，再将壮苗进行洗净，接着用1000倍多菌灵或甲基托布津处理一段时间，然后放入基质中进行栽培，再将壮苗的丛芽切成单株接种于生根培养基中培养，生根后继续培养，得到有根的完整植株的时间为接种到生根培养基上25天后，当生根的苗长至5~8cm，根数3条以上时由此获得牛樟苗，再移栽到室外进行培养。
优选的，所述s1中的酒精体积分数为75%，且处理时间为30s，所述升汞处理时间为5~6min，且s1处理时间为20~30s，并且70~75%的酒精具有强渗。
优选的，所述s1中的诱导培养千里香种子的子叶萌芽，后展开叶片，且萌发新芽的时间为接种到诱导培养基上7-10天后，并且萌发出新芽后即可接种至s2中的增殖培养基上。
优选的，所述s2中增殖培养基a包括ms培养基，6-ba2.0mg/l，iba0.5mg/l，蔗糖30g/l，卡拉胶6.5g/l，ph值5.8，所述增殖培养基b包括ms培养基，6-ba1.5mg/l，iba0.05mg/l，蔗糖30g/l，琼脂6.5g/l，ph值5.8，所述s1、s2和s3中的所有培养条件均为每天光照10~12h，温度为25-30°c。
优选的，所述s2中的增殖培养基a培养时间为40-50天（2代）。
优选的，所述s2中的增殖培养基b培养时间为180~200天（9~10代）。
优选的，所述s1中的诱导培养基包括：ms培养基，6-ba2.0mg/l，iba0.5mg/l，活性炭0.5g/l，蔗糖30g/l，卡拉胶6.5g/l，ph值5.8。
优选的，所述s3中的壮苗培养基包括：ms培养基，蛋白胨1.0mg/l，蔗糖30g/l，卡拉胶6.5g/l，ph值5.8。
优选的，所述s4中的生根培养基包括：1/2ms培养基，iba1.0mg/l，活性炭1.5g/l，蔗糖30g/l，卡拉胶6.5g/l，ph值5.8。
优选的，所述s4中的炼苗天数为10~15天，且s4中的壮苗通过1000倍多菌灵或甲基托布津处理10-15min，并且s4中的基质为泥炭土和珍珠岩按体积比2：1混合所得。
优选的，所述s1、s2和s3中的所有培养条件均为每天光照10~12h，温度为25-30°c。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该千里香种子组织培养的方法：
（1）本发明以种子为外植体，诱导萌发芽，先接种至激素浓度高的增殖培养基a，诱导出丛芽，再接种于激素浓度低的增殖培养基b中，分化出大量正常的丛芽，月繁殖系数达到3-4倍，完全适合大规模工业化生产，以便于很好的进行种子组织培养；
（2）本发明的方法有效解决了千里香扦插和嫁接苗繁殖效率低的问题；
（3）本发明可快速批量地生产种苗，为中药材生产和药剂加工提供了充足的材料。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种技术方案：一种千里香种子组织培养的方法，包括如下步骤，
s1：诱导培养：将一些千里香种子依次进行剥皮工作，剥皮结束后，对剥皮后的千里香种子依次喷洒75%浓度的酒精，然后倒入升汞溶液中进行30s时间的处理，处理结束后再用无菌水冲洗干净，接着将剥皮且消毒后的千里香种子接种于诱导培养基中进行芽诱导培养；
s2：增殖培养：将s1中萌发的芽依次接种于增殖培养基a和增殖培养基b上，分化出丛芽；
s3：壮苗培养：将步骤2分化出的丛芽接种于壮苗培养基上培养内，通过壮苗培养基给丛芽一定的营养成分，使得丛芽长至壮苗；
s4：生根培养：先将生根组培苗置于温室中炼苗一段时间，然后开盖取苗，再将壮苗进行洗净，接着用1000倍多菌灵或甲基托布津处理一段时间，然后放入基质中进行栽培，再将壮苗的丛芽切成单株接种于生根培养基中培养，生根后继续培养，得到有根的完整植株的时间为接种到生根培养基上25天后，当生根的苗长至5~8cm，根数3条以上时由此获得牛樟苗，再移栽到室外进行培养。
本发明经过实验研究发现，用增殖培养基a培养一段时间后，腋芽萌发伸长快，且能分化出的大量的芽，后几代转接于增殖培养基b中培养，激素浓度降低，利于芽体生长正常，月繁殖系数达到3~4倍。
本发明首次建立了一套高效的千里香种子组织培养的方法，为具有极高药用价值的千里香种苗生产奠定基础。
s1中的酒精体积分数为75%，且处理时间为30s，升汞处理时间为5~6min，且s1处理时间为20~30s，并且70~75%的酒精具有强渗。
s1中的诱导培养千里香种子的子叶萌芽，后展开叶片，且萌发新芽的时间为接种到诱导培养基上7-10天后，并且萌发出新芽后即可接种至s2中的增殖培养基上。
s2中增殖培养基a包括ms培养基，6-ba2.0mg/l，iba0.5mg/l，蔗糖30g/l，卡拉胶6.5g/l，ph值5.8，增殖培养基b包括ms培养基，6-ba1.5mg/l，iba0.05mg/l，蔗糖30g/l，琼脂6.5g/l，ph值5.8，所述s1、s2和s3中的所有培养条件均为每天光照10~12h，温度为25-30°c。
s2中的增殖培养基a培养时间为40-50天（2代）。
s2中的增殖培养基b培养时间为180~200天（9~10代）。
s1中的诱导培养基包括：ms培养基，6-ba2.0mg/l，iba0.5mg/l，活性炭0.5g/l，蔗糖30g/l，卡拉胶6.5g/l，ph值5.8。
s3中的壮苗培养基包括：ms培养基，蛋白胨1.0mg/l，蔗糖30g/l，卡拉胶6.5g/l，ph值5.8。
s4中的生根培养基包括：1/2ms培养基，iba1.0mg/l，活性炭1.5g/l，蔗糖30g/l，卡拉胶6.5g/l，ph值5.8。
s4中的炼苗天数为10~15天，且s4中的壮苗通过1000倍多菌灵或甲基托布津处理10-15min，并且s4中的基质为泥炭土和珍珠岩按体积比2：1混合所得。
s1、s2和s3中的所有培养条件均为每天光照10~12h，温度为25-30°c。
实施例1
不同诱导培养基对千里香种子诱导的影响：
诱导培养基由基础培养基和激素组合组成，基础培养基包括以下组分：ms培养基，蔗糖30g/l，卡拉胶6.5g/l，ph值5.8。
每种处理接种30颗种子，试验重复3次，外植体诱导培养25天后，统计出芽时间、平均诱导率和平均诱导芽数。
表1不同激素配比对千里香种子萌发诱导的影响
由表1可知，不同的激素浓度配比对平均出芽时间，平均诱导率均有影响。当6-ba为2.0mg/l，iba为0.5mg/l时，在较短时间（8~10d）内诱导率为100%。
实施例2
不同增殖培养基对千里香增殖培养的影响：
把实施例1中诱导的芽接种到增殖培养基中（增殖培养基的具体配方见表3）进行增殖培养，培养光照强度为2000~3000lux，光照时间为12小时/天。
增殖培养基由基础培养基和激素组合组成，基础培养基包括以下组分：ms培养基，蔗糖30g/l，卡拉胶6.5g/l，ph值5.8。
每种处理接种30个芽，试验重复3次，芽每增殖培养一代（即每25天），统计相应的增殖系数和芽的长势。
表2不同激素配比对丛芽增殖的影响
据表2可知，不同时期对培养基激素浓度的适应性不同。6-ba浓度低于1.5mg/ml，不定芽的生长情况较好，增殖系数偏低，如果在增殖培养过程仅采用一种增殖培养基，往往会出现前两代苗健壮，产生大量从芽，但后几代芽微玻璃化，出现大量苗死亡的情况，或者前两代苗长势一般，丛芽诱导慢，造成总体芽体比较弱小、增殖系数低的情况，以上两种培养基均不能达到牛樟增殖培养的最佳效果，所以本试验千里香增殖的最佳方案为先把芽接种于基础培养基+ba2.5+iba0.5培养基中培养40-0天，诱导出芽后，再接种于基础培养基6-ba1.5+iba0.5中培养，这样既能提高增殖率又能使植株正常生长
实施例3
不同生根培养基对千里香种苗生根的影响：
丛生芽在壮苗培养基中培养20-25天后，分切成单株接种到生根培养基上（生根培养基的具体配方见表3）进行生根培养，培养光照强度为3000~3500lux，光照时间为12小时/天，每种培养基接种10株苗，试验重复3次，生根培养25天后，统计生根率、平均每株根数和植株长势。
生根培养基由基础培养基和激素组合组成，基础培养基包括以下组分：1/2ms培养基，活性炭1.5g/l，蔗糖30g/l，卡拉胶6.5g/l，ph值5.8。
表3不同激素配比千里香组培苗生根的影响
如表3可知，浓度高于1.5mg/l时不利于千里香生根，综合对照各指标进行分析，选取iba1.5mg/l为最优生根培养基，该组合下的生根率达98.6%，平均每株根数为3.32条。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。