技术特征：
1.一种油橄榄营养体体细胞胚胎发生方法，包括以下步骤：1)对营养体进行灭菌，将灭菌后的营养体置于胚性愈伤组织诱导培养基上，进行第一暗培养，得到胚性愈伤组织；所述营养体包括幼嫩枝叶和/或未裂花粉囊；2)将所述胚性愈伤组织置于体细胞胚胎发生培养基上，进行第二暗培养至胚性愈伤组织表面长出胚状体且胚状体发育至子叶胚时期，获得子叶胚状体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述胚性愈伤组织诱导培养基以ms为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：2,4d1.0～3.0mg/l、6
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ba 0.1～0.2mg/l、蔗糖30～40g/l和琼脂7～10g/l；所述胚性愈伤组织诱导培养基的ph值为5.8～6.5。3.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述第一暗培养的温度为22～25℃；所述第一暗培养的时间为25～35d。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述对枝叶或花粉进行灭菌的方法包括依次采用酒精浸泡和升汞水溶液；所述酒精浸泡包括：采用体积浓度为70％～80％的酒精浸泡20～30s；所述升汞水溶液浸泡包括：采用0.08～0.15％的升汞浸泡8～15min。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述第二暗培养的温度为22～25℃；所述第二暗培养的时间为60～70d。6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述第二暗培养包括第一次继代培养和第二次继代培养；所述第一次继代培养采用第一次继代培养基；所述第一次继代培养基以ms为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：iaa 1.0～3.0mg/l、kt0.2～0.3mg/l、6
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ba 0.1～0.5mg/l、蔗糖35～45g/l和琼脂7～10g/l；所述第一次继代培养基的ph为5.8～6.5；所述第二次继代培养采用第二次继代培养基；所述第二次继代培养基以ms为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：iaa 1.0～3.0mg/l、kt0.1～0.2mg/l、6
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ba 0.1～0.3mg/l、蔗糖35～50g/l和琼脂7～10g/l；所述第二次继代培养基的ph为5.8～6.5；所述第一次继代培养和第二次继代培养的时间独立为25～35d，条件分别为暗培养，温度独立为22～25℃。7.一种油橄榄植株再生的方法，包括以下步骤：按照权利要求1～6任意一项所述方法获得子叶胚状体；将所述子叶胚状体转移至增殖培养基，进行光照培养至形成再生植株。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述增殖培养基以ms基本培养基，还包括以下浓度的组分：蔗糖25～30g/l、和琼脂7～10g/l和活性炭0.8～2g/l所述增殖培养基的ph值为5.8～6.5。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述光照培养的光照强度为5000～8000lux；所述光照培养的时间为60～90d；光照周期为光培养16h，暗培养8h，所述光照培养的温度为22～25℃。10.根据权利要求7～9任意一项所述的方法，其特征在于，所述形成再生植株后，还包括将所述再生植株驯化后移栽。
技术总结
本发明公开了一种油橄榄营养体体细胞胚胎发生及植株再生方法，属于植株组织培养技术领域，所述方法包括以下步骤：对营养体(幼嫩枝叶、未裂花粉囊)进行灭菌，将灭菌后的营养体置于胚性愈伤组织诱导培养基上，进行第一暗培养，得到胚性愈伤组织；再将获得的胚性愈伤组织置于体细胞胚胎发生培养基进行第二暗培养；待愈伤组织表面长出胚状体并发育至子叶胚时期后，置于光照培养基进行光照培养，直至形成再生植株，将再生植株驯化后移栽。本发明的方法可以高效便捷地获得高质量体细胞胚胎再生植株。植株。植株。
技术研发人员：龙伟 姚小华 任华东
受保护的技术使用者：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
技术研发日：2021.08.11
技术公布日：2021/10/26