一种卵巢组织冷冻用冷冻外管的制作方法

1.本发明涉及一种组织冷冻配套使用的工具及工具的使用方法，更具体地说，涉及卵巢组织冷冻保存技术使用的工具及方法。


背景技术：

2.卵巢组织冷冻保存技术对于待放化疗治疗的成年女性是最快且最有效保存生育力的方法，对于青春期前的女性来说，卵巢组织冷冻是保存生育能力的唯一途径。
3.目前卵巢组织冻存尚无统一标准，常用冻存方法有慢速程序化冷冻和玻璃化冷冻。传统慢速程序化冷冻，因仪器价格昂贵、冷冻时间长、操作繁琐等缺点难以进行临床推广。而卵巢组织玻璃化冷冻，能在极快的降温过程和极短的时间内使卵巢组织处于玻璃化状态，避免细胞内冰晶的形成，具有快速、高效、简便和经济的特点而得到广泛应用。
4.冷冻载体是卵巢组织玻璃化冷冻成功的关键因素之一。目前卵巢组织冷冻使用的玻璃化冷冻载体主要包括：冷冻麦管、冷冻环、细胞筛网、针刺式载体以及kitazato公司商品化载体等，其中冷冻麦管和冷冻环仅能装载较小体积的卵巢组织；细胞筛网放入液氮罐储存时占用体积过大，不易批量储存；针刺式载体会造成卵巢组织不可逆机械损伤；kitazato公司商品化载体，与卵巢组织接触面积小，易脱落，在临床及科研工作中难以普及。
5.此外，在传统卵巢组织玻璃化冷冻过程中，还往往存在以下问题：
6.1.操作者需要将手术获取的大块卵巢组织用医用镊子切割为几片至数十片不等，规格为10mm x 10mm x 1mm大小的组织片。操作者在卵巢组织玻璃化冷冻全程需要用医用镊子对每一片卵巢组织进行夹持移动，以达到卵巢组织片在不同浓度冷冻保护剂中脱水的目的，此过程大大增加了操作者的劳动强度。
7.2.组织片在进入冷冻液时，由于浮力原因会漂浮在冷冻液面，需不断用镊子将漂浮的组织片按压浸入冷冻液，以保证组织充分脱水，达到冷冻效果。此过程繁琐，大大增加操作者的劳动强度。
8.3.在冷冻过程中，使用医用镊子进行不同浓度冷冻液间的组织片转移时，存在以下两个问题。一是从低浓度转移至高浓度冷冻液时，医用镊子非常容易触碰到高浓度冷冻液，此时必须将镊子清理干净，否则再次进行此操作时，会将部分高浓度液体带入低浓度液体之中，影响冷冻液成分及浓度，进而影响冷冻效果。二是在两种不同浓度冷冻液转移组织片时，由于需要反复用镊子转移组织片，大大增加了镊子污染的风险，进而使组织片发生污染现象。
9.4.传统卵巢组织冷冻方式为开放式，卵巢组织片直接与液氮接触，增加了组织片之间交叉污染的风险。
10.综上，临床上迫切需要设计一种操作简便，储存安全可靠、无毒无污染的封闭式卵巢组织冷冻载体，以克服诸多不便。


技术实现要素：

11.针对以上卵巢组织玻璃化冷冻过程的不足之处，本发明提供一种操作简便，储存安全可靠、兼容有序且无毒无污染的封闭式卵巢组织冷冻载体，以及提供了一种上述冷冻载体使用的方法。旨在达到方便操作、提高操作适用性的目的。
12.为了达到上述目的，本发明提供了一种冷冻载体用冷冻外管，试管形式的管体内壁位于径向的两侧对应设置有管体轴向的卡槽。
13.优选方式下，所述冷冻载体用冷冻外管，选用医用无毒pvc软管制成，冷冻外管内宽度为12mm，长度为25-30mm；所述卡槽宽度略宽于被卡接物的直径。
14.本发明提供了一种上述工具用于实现组织冷冻的冷冻载体方法，其特征在于，包括冷冻过程和解冻过程，所述冷冻过程包括如下步骤：
15.s1、用医用镊子将切割为10mm x 10mm x 1mm大小的组织切片，依次固定在回形针夹持式装置；组织片在所述夹持式装置的外夹持圈1上方，所述夹持式装置的内夹持圈2下方，手持所述夹持式装置的手柄3，依次将夹持好组织切片的所述夹持式装置的直立插入含有es液的冷冻皿卡槽中平衡25分钟；
16.s2、手持所述夹持式装置的手柄3，将所述夹持式装置从es液中捞出，并用无菌滤纸将组织切片上多余的es液吸附后，依次将所述夹持式装置直立插入含有vs液的冷冻皿卡槽中平衡15分钟；
17.s3、手持所述夹持式装置的手柄3，依次将所述夹持式装置从vs液中捞出，并用无菌滤纸将组织片上多余的vs液吸附后，插入设置有卡槽的冷冻外管，正好插入外管的卡槽之中，用加热器热封冷冻外管管口后，投入液氮中保存。
18.所述解冻过程包括如下步骤：
19.s4、在液氮中，一只手用医用镊子夹住所述冷冻外管，并小心将所述冷冻外管热封部分露出液氮之外，另一只手用医用剪刀将冷冻外管热封部分剪开，迅速将冷冻外管中的所述夹持式装置取出，直接插入含有ts液并已预温至37℃的解冻皿内管卡槽中，60秒；
20.s5、按照以上操作，在室温下，依次经过含有ds液的解冻皿中3分钟， ws1液的解冻皿中5分钟，ws2液的解冻皿中5分钟；随后将复苏后的组织片从所述夹持式装置上取下，放入组织培养液中，37摄氏度培养2小时后，待移植。
21.本发明的有益效果在于：
22.1.回形针夹持式固定装置(冷冻内管)设计，在冷冻解冻过程中，避免了使用镊子逐个夹取组织片，手持冷冻内管即可完成组织片的转移，大大降低了操作者的劳动强度，并且降低了由于镊子反复使用造成冷冻液浓度改变和污染的风险。
23.2.增加了直立插入式冷冻解冻皿(内置内管卡槽)设计，组织片在冷冻液和解冻液中，由于组织片被固定在内管上，且冷冻内管可卡紧在冷冻解冻皿的卡槽上，避免了组织片的漂浮现象，充分保证了冷冻解冻效果。
24.3.封闭式冷冻外管设计，通过加热封闭的方式隔绝液氮与组织片直接接触，降低了污染的风险。冷冻外管内有卡槽设计，方便固定冷冻内管，保证操作稳定性。
附图说明
25.图1是本发明冷冻载体用夹持式装置的结构示意图。
26.图2是图1所示夹持式装置的使用状态示意图。
27.图3是本发明使用过程中冷冻皿和解冻皿的结构示意图。
28.图4是图3所示冷冻皿和解冻皿的使用状态示意图。
29.图5是冷冻外管的结构示意图。
30.图6是图3所示冷冻外管的使用状态示意图。
31.图中：1、外夹持圈，2、内夹持圈，3、手柄，4、冷冻解冻皿，5、内管卡槽，6、冷冻外管，7、冷冻内管卡槽，8、热封区。
具体实施方式
32.如图1和2所示，本发明首先提供了一种冷冻载体用夹持式装置——回形针夹持式固定装置：又称冷冻内管，由内夹持圈2、外夹持圈1和手柄3部分组成，内外夹持圈均为304不锈钢材质，夹持圈内径为0.1-0.2mm，手柄为无毒医用塑料材质。外夹持圈宽度为7-8mm(略小于卵巢组织片直径10mm)，长度为20mm。内夹持圈宽度为4-5mm，长度为15-18mm。
33.如图5和6所示，本发明还提供了一种插入式组织冷冻热封管：又称冷冻外管6，冷冻外管6由医用无毒pvc软管制成。冷冻外管内宽度为12mm，长度为25-30mm。内置冷冻内管卡槽7，卡槽间距小于冷冻内管的外夹持圈宽度。热封区8位于冷冻外管6管口，可通过热封装置加热后封闭。
34.如图3和图4所示，本发明选用现有技术的直立插入式冷冻解冻皿4和解冻皿(内置多个内管卡槽5，医用无毒塑料材质制成)。
35.本发明的工作过程包括冷冻过程和解冻过程。
36.所述冷冻过程为：
37.1.用医用镊子将切割为10mm x 10mm x 1mm大小的组织切片，依次固定在回形针夹持式固定装置上(以下均用冷冻内管代替)。组织片在外夹持圈1上方，内夹持圈2下方，依靠内外夹持圈固定(如图1和图2所示)。手持冷冻内管手柄3部分，依次将冷冻内管直立插入含有es液(平衡液)的冷冻皿卡槽中平衡 25分钟(如图3和图4所示)。
38.2.再次手持冷冻内管手柄3部分，将冷冻内管从es液中捞出，并用无菌滤纸将组织片上多余的es液吸附后，依次将冷冻内管直立插入含有vs液(玻璃化冷冻液)的冷冻皿卡槽中平衡15分钟。
39.3.平衡时间完成后，手持冷冻内管手柄3部分，依次将冷冻内管从vs液中捞出，并用无菌滤纸将组织片上多余的vs液吸附后，插入冷冻外管6中(冷冻外管内部设计一个卡槽，冷冻固定装置正好能插入外管的卡槽之中)，用加热器热封冷冻外管管口后，投入液氮中保存(如图5和图6所示)。
40.所述解冻过程为：
41.1.在液氮中，左手用医用镊子夹住冷冻外管，并小心将冷冻外管热封部分露出液氮之外，右手用医用剪刀将冷冻外管热封部分剪开，迅速将冷冻外管中的冷冻内管取出，直接插入含有ts液(解冻液)并已预温至37℃的解冻皿内管卡槽中，60秒。
42.2.按照以上操作，在室温下，依次经过含有ds液(稀释液)的解冻皿中3 分钟，ws1(清洗液1)液的解冻皿中5分钟，ws2液(清洗液2)的解冻皿中 5分钟。随后将复苏后的组织片从回形针夹持式固定装置上取下，放入组织培养液中，37摄氏度培养2小时后，待移植。
43.以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。