一种杀菌组合物及其应用的制作方法

1.本发明涉及农药技术领域，尤其涉及一种杀菌组合物及其应用。


背景技术：

2.西葫芦猝倒病又叫长朝子，是西葫芦苗期主要病害之一。西葫芦猝倒病的病原为坪草腐霉枯萎病菌(pythium aphanidermatum)，种芽感病，苗未出土，种芽或胚茎、子叶已腐烂；幼苗受害，近土面的胚茎基部开始有黄色水渍状病斑，随后变为黄褐色，干枯收缩成线状，子叶尚未凋萎，幼苗已猝倒。有时带病幼苗外观与健苗无异，但贴服土面，不能挺立茎基部已干缩成线状。猝倒病发病速度快，往往子叶不蔫，病幼苗就己折倒地面。倒伏幼苗在短期内仍为绿色，易拔出，触摸病部，表皮很易脱落。严重时苗畦大片死亡，危害很大。
3.申嗪霉素是由荧光假单胞菌m18经生物培养分泌的一种抗菌素，作用原理主要是利用吩嗪-1-羧酸其氧化还原能力，在真菌细胞内积累活氧，抑制线粒体中呼吸转递链的氧化磷酸化用，从而抑制菌丝的正常生长，引起植物病原真菌菌丝体的断裂、肿张、变形和裂解，主要用于防治土壤处理土传病害。
4.四唑吡氨酯(picarbutrazox)属氨基甲酸酯类杀菌剂，其作用机理为通过抑制病菌细胞膜的形成、抑制菌丝生长和孢子萌发，减少孢子囊形成和游动孢子的数量，主要用于防治卵菌纲病害霜霉病和疫病。
5.目前防治猝倒病的高效杀菌剂种类较少如五氯硝基苯、乙酸铜等活性较低且毒性较高，对环境危害较大。而精甲霜灵等因使用时间较长，已产生较为严重的抗性。因此，选取对病害较高活性的有效化学成分，并应用现有技术将不同药剂进行组合，继而进行病害的防治，是探索开发新植物保护技术的有效方式。但是不同药剂的组合其效果并不确定，其可能产生增效作用，也可能产生拮抗作用。且不同药剂的组合对于不同病害的效果并不确定。因此，本领域仍在寻找能够有效杀灭病原菌，从而防治西葫芦猝倒病的杀菌剂。


技术实现要素：

6.为解决背景技术中存在的技术问题，本技术提出一种杀菌组合物及其应用。
7.本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
8.一种杀菌组合物，该杀菌组合物的活性成分为申嗪霉素和四唑吡氨酯，所述申嗪霉素和四唑吡氨酯的质量比为(1～5):(33～17)。进一步优选的，所述申嗪霉素和四唑吡氨酯的质量比为8:15。进一步优选的，所述申嗪霉素占杀菌组合物总质量的1％～40％，所述四唑吡氨酯占杀菌组合物总质量的1％～60％。
9.作为优选的技术方案，所述杀菌组合物还包括辅料，所述杀菌组合物还包括辅料，所述辅料包括分散剂、增稠剂、防腐剂、润湿剂中的至少一种。
10.进一步优选的，所述分散剂为由阴离子分散剂经聚羧酸盐嫁接形成的羧酸盐类共聚物，如木质素磺酸钠经聚羧酸盐嫁接形成的羧酸盐类共聚物。
11.作为优选的技术方案，所述杀菌组合物中各组分含量的质量百分比为：申嗪霉素
1％～40％、四唑吡氨酯1％～60％、分散剂5～8％、增稠剂0.1～0.2％、防腐剂1～1.5％、润湿剂3～4.2％，其余量为水。
12.作为优选的技术方案，所述杀菌组合物的剂型为干悬浮剂。
13.本发明的另一个目的是提供上述所述的杀菌组合物的应用，所述杀菌组合物用于防治西葫芦猝倒病。
14.作为优选的技术方案，所述杀菌组合物的施用量为5～15g/亩。
15.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
16.1.本发明通过将申嗪霉素和四唑吡氨酯进行复配，二者能够产生增效作用，对坪草腐霉枯萎病菌具有良好地抑制效果，对西葫芦猝倒病具有防治地防治效果；同时，本杀菌组合物副作用低，不会对农作物安全性和产量等造成影响。
17.2.本发明杀菌组合物的剂型为干悬浮剂，具有持效期长、减少用药，省工省时、避免药害，提高产品安全性、消除异味、与不良环境隔离。
18.3.本发明的分散剂采用羧酸盐类共聚物，即木质素磺酸钠经聚羧酸盐嫁接得到羧酸盐类共聚物。由于羧酸盐类共聚物具有强疏水性的骨架长链与亲水性的阴离子低分子接枝共聚形成的，是具有梳型结构特征的高分子化合物，有效地阻止干悬浮剂再分散过程中颗粒间的团聚及沉降，提高了产品的分散性。
具体实施方式
19.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
20.本发明实施例提供一种杀菌组合物，该杀菌组合物的活性成分为申嗪霉素和四唑吡氨酯。本发明实施例特定地选择申嗪霉素、四唑吡氨酯进行复配，二者能够产生增效作用，对坪草腐霉枯萎病菌具有良好地抑制和抑制增殖的效果。
21.对坪草腐霉枯萎病菌的抑制包括抑制菌丝体形成、破坏菌丝体结构、抑制坪草腐霉枯萎病菌增殖和/或杀灭坪草腐霉枯萎病菌；对坪草腐霉枯萎病菌的抑制增殖包括杀灭卵孢子、抑制卵孢子形成、抑制孢子囊形成、抑制孢子释放和/或杀灭孢子。
22.本发明实施例提供的杀菌组合物还包括辅料，辅料包括分散剂、增稠剂、防腐剂、润湿剂中的至少一种。分散剂包括但不限于木质素磺酸钠、异构十醇聚氧乙烯醚、萘磺酸钠、聚羧酸盐、十二烷基硫酸钠等现有的分散剂，增稠剂包括但不限于黄原胶等现有的增稠剂，防腐剂包括但不限于苯甲酸钠等现有的防腐剂，润湿剂包括但不限于硫酸钠等现有的润湿剂。
23.本发明实施例提供的杀菌组合物中各组分含量的质量百分比为：申嗪霉素1％～40％、四唑吡氨酯1％～60％、分散剂5～8％、增稠剂0.1～0.2％、防腐剂1～1.5％、润湿剂3～4.2％，其余量为水。
24.本发明实施例提供的杀菌组合物为固体制剂，优选为干悬浮剂。杀菌组合物经湿法砂磨制得悬浮液，再经喷雾干燥造粒，脱去水分直接得到的固体微粒即为干悬浮剂。使用时用水稀释又恢复成悬浮液状态，颗粒粒径小，易在靶标上发挥作用，既能保证药剂的速效
性和持效性，又能保证药剂与作物表面能完全接触，可快速崩解、喷施均匀、耐雨水冲刷；不使用任何有机溶剂，无溶剂污染问题；不黏附于包装袋，利用更充分；也无粉尘和扬尘，可避免药剂漂移产生的药害问题，对操作者及周围环境安全使用人员安全，具有持效期长、减少用药，省工省时、避免药害，提高产品安全性、消除异味、与不良环境隔离等优点；
25.本发明提供的杀菌组合物用于防治西葫芦猝倒病，包括预防和/或治疗西葫芦猝倒病。预防包括在植株发病前，施用含有所述杀菌组合物的药物以避免猝倒病的发生。治疗包括在植株发病后，施用含有所述杀菌组合物的药物，以抑制猝倒病的发展和/或消除猝倒病。
26.本发明提供的杀菌组合物施用的方式为喷雾施用。施用的制剂剂量为5～15g/亩，每亩用水40kg。具体的，施用采用二次稀释法，每5～15g制剂以40kg水稀释。稀释后的溶液在猝倒病发病前期或初期施药一次，施药的量皆为40kg/亩。
27.以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
28.实施例1
29.本发明实施例提供一种杀菌组合物，该杀菌组合物的有效成分为申嗪霉素和四唑吡氨酯，且申嗪霉素、四唑吡氨酯的质量比为5:17。
30.实施例2
31.本发明实施例提供一种杀菌组合物，该杀菌组合物的有效成分为申嗪霉素和四唑吡氨酯，且申嗪霉素、四唑吡氨酯的质量比为4:21。
32.实施例3
33.本发明实施例提供一种杀菌组合物，该杀菌组合物的有效成分为申嗪霉素和四唑吡氨酯，且申嗪霉素、四唑吡氨酯的质量比为3:25。
34.实施例4
35.本发明实施例提供一种杀菌组合物，该杀菌组合物的有效成分为申嗪霉素和四唑吡氨酯，且申嗪霉素、四唑吡氨酯的质量比为2:29。
36.实施例5
37.本发明实施例提供一种杀菌组合物，该杀菌组合物的有效成分为申嗪霉素和四唑吡氨酯，且申嗪霉素、四唑吡氨酯的质量比为1:33。
38.实施例6
39.本发明实施例提供一种杀菌组合物，将申嗪霉素：四唑吡氨酯配比为3:25的杀菌组合物制成干悬浮剂。具体配制过程为：将6％申嗪霉素和50％四唑吡氨酯、分散剂、增稠剂、防腐剂、润湿剂和水加入配制釜混合均匀后进行高剪切，高剪切后进入砂磨机进行砂磨，砂磨至5微米以下抽入干悬浮剂干燥塔进行干燥造粒，造粒出料后检验合格，然后分装即得到杀菌组合物的干悬浮剂。其各组分用量配比如下表1。
40.表1杀菌组合物中各组分用量配比
41.成分名称含量(％)申嗪霉素6四唑吡氨酯50木质素磺酸钠5异构十醇聚氧乙烯醚1.5
黄原胶0.2苯甲酸钠1.5硫酸钠3水补足余量
42.实施例7
43.本发明实施例提供一种杀菌组合物，将申嗪霉素:四唑吡氨酯配比为3:25的杀菌组合物，按照实施例6的方法制成干悬浮剂，其各组分用量配比如下表2。
44.表2杀菌组合物中各组分用量配比
45.成分名称含量(％)申嗪霉素6四唑吡氨酯50萘磺酸钠5异构十醇聚氧乙烯醚1.5黄原胶0.2苯甲酸钠1.5硫酸钠3水补足余量
46.实施例8
47.本发明实施例提供一种杀菌组合物，将申嗪霉素:四唑吡氨酯配比为3:25的杀菌组合物，按照实施例6的方法制成干悬浮剂，其各组分用量配比如下表3。
48.需要说明的是，本实施例中的分散剂采用了高分子的木质素磺酸钠形成空间位阻，配合使用高分子阴离子分散剂，高分子阴离子分散剂采用聚羧酸盐，木质素磺酸钠经聚羧酸盐嫁接得到羧酸盐类共聚物。
49.表3杀菌组合物中各组分用量配比
50.成分名称含量(％)申嗪霉素6四唑吡氨酯50木质素磺酸钠5聚羧酸盐1.5异构十醇聚氧乙烯醚1.5黄原胶0.2苯甲酸钠1.5硫酸钠3水补足余量
51.实施例9
52.本发明实施例提供一种杀菌组合物，将申嗪霉素:四唑吡氨酯配比为3:25的杀菌组合物，按照实施例6的方法制成干悬浮剂，其各组分用量配比如下表4。
53.表4杀菌组合物中各组分用量配比
54.成分名称含量(％)申嗪霉素6四唑吡氨酯50木质素磺酸钠5十二烷基硫酸钠1.5黄原胶0.2苯甲酸钠1.5硫酸钠3水补足余量
55.实验例10：组合物生物活性测试
56.根据农药室内生物测定试验准则ny/t 1156.12-2008、ny/t1156.6-2006，通过测定申嗪霉素、四唑吡氨酯及其不同质量比例混配对上述西葫芦猝倒病的杀菌效果，筛选这两种杀菌剂的最优混合质量比。
57.坪草腐霉枯萎病菌(pythium aphanidermatum)由安徽丰乐农化技术中心分离保存提供；试验药剂为申嗪霉素原药、四唑吡氨酯原药；申嗪霉素：四唑吡氨酯的混合比例为：5:17；4:21；3:25；2:29；1:33；以甲醇溶解将组合物配制成药液，配制浓度见表5。
58.表5杀菌组合物各物质用量配比
[0059][0060]
在无菌操作条件下，根据试验处理将预先融化的灭菌培养基定量加入无菌锥形瓶中，从低浓度到高浓度依次定量吸取药液，分别加入上述锥形瓶中，充分摇匀。然后等量倒入4个直径为9cm的培养皿中，制成相应浓度的含药平板，待产生孢子囊后，用无菌水将孢子囊洗下，用双层纱布过滤，置于4℃低温下，黑暗处理3h，使其释放出游动孢子，直接配制成孢子溶液使用。
[0061]
实验处理前24h用孢子悬浮液接种，接种后每天连续光照/黑暗12h处理，温度为室温，相对湿度90％下培养7d。试验设七个处理，含有等量丙酮溶液的0.1％的吐温80水溶液的处理作为空白对照，将药液均匀喷洒于叶面至全部湿润，待药液自然风干后备用，每处理4次重复。
[0062]
空白对照达到50％后，分级调查各处理发病情况，根据调查结果，按公式(1)计算各处理浓度防治效果，单位为百分率(％)，计算结果保留小数点后两位：
[0063][0064]
式中：
[0065]
i—防治效果；
[0066]
d0—空白对照病情指数；
[0067]dt
—药剂处理病情指数。
[0068]
统计分析：
[0069]
根据各药剂浓度的对数值及对应的病情指数作回归分析，计算各药剂的ec
50
、ec
90
及95％置信限。
[0070]
根据wadley法计算混剂的增效系数(sr)，评价混剂的联合作用类型。根据增效系数(sr)来评价药剂混用的增效作用，即sr＜0.5为拮抗作用，0.5≤sr≤1.5为相加作用，sr＞1.5为增效作用。增效系数(sr)按式(2)、式(3)计算：
[0071][0072]
式中：
[0073]
x1—混剂ec
50
理论值，单位为毫克每升(mg/l)；
[0074]
pa—混剂中a的百分含量；
[0075]
pb—混剂中b的百分含量；
[0076]
a—混剂中a的ec
50
值，单位为毫克每升(mg/l)；
[0077]
b—混剂中b的ec
50
值，单位为毫克每升(mg/l)。
[0078][0079]
式中：
[0080]
sr—混剂的增效系数；
[0081]
x1—混剂ec
50
理论值，单位为毫克每升(mg/l)；
[0082]
x2—混剂ec
50
实测值，单位为毫克每升(mg/l)。
[0083]
检测结果如下表6。
[0084]
表6检测结果
[0085]
[0086][0087]
根据上述结果可知：1.申嗪霉素、四唑吡氨酯单剂及其各混合比例对西葫芦猝倒病均有明显的杀菌效果，即对坪草腐霉枯萎病菌具有良好地抑制效果。
[0088]
2.申嗪霉素、四唑吡氨酯混配后在试验配比下均表现为增效作用，增效协同系数sr为1.53～5.47。
[0089]
3.申嗪霉素:四唑吡氨酯配比为3:25时增效作用最高，其增效系数为5.47，lc
50
为0.7348mg/l、lc
90
为3.9292mg/l。
[0090]
实验例11、干悬浮剂的理化性质试验
[0091]
根据农药水分散粒剂耐磨性测定方法gb/t 33031，对实施例6～9制得干悬浮剂的分散性进行检测，干悬浮剂的分散性测定结果见表7。
[0092]
表7干悬浮剂分散性测定结果
[0093]
项目分散性(％)实施例682实施例785实施例895实施例981
[0094]
由上述结果可知，实施例6～9制得干悬浮剂的分散性均可达到80％以上。其中，实施例8制得的干悬浮剂的分散性超过90％，这是因为实施例8的分散剂选用了木质素磺酸钠，木质素磺酸钠经聚羧酸盐嫁接得到羧酸盐类共聚物，羧酸盐类共聚物具有强疏水性的骨架长链与亲水性的阴离子低分子接枝共聚形成的，是具有梳型结构特征的高分子化合物，有效地阻止干悬浮剂再分散过程中颗粒间的团聚及沉降，提高了产品的分散性。
[0095]
实验例12田间药效试验
[0096]
应用实施例8制备得到的杀菌组合物用于田间防治西葫芦猝倒病。
[0097]
1.试验方法
[0098]
试验药剂见下表8。
[0099]
表8各药剂试验用量表
[0100][0101]
试验地安排在云南昆明市呈贡区，播种情况：西葫芦2020年5月10日播种，行距约50厘米、株距约30厘米，田间西葫芦生长均匀一致。空白对照区先喷施等量清水，药剂处理区按试验设置的药剂剂量计算出各小区用药量，采用二次稀释法，每亩地用水40kg，表8中各组药剂(处理1～5的体积依次为5g、10g、15g、20g、50g)皆以40kg水稀释。稀释后的溶液在西葫芦猝倒病发病前期或初期施药一次，施药的量皆为40kg/亩，组6给予等量的水。由低浓度向高浓度逐个对小区匀速均匀喷雾，不重喷、不漏喷。不同药剂处理间施药前均用清水洗涤喷雾器。施药时间及作物生育期：第一次用药为2020年6月22日天，西葫芦处于苗期。
[0102]
药效调查：药后14天进行西葫芦猝发病情况调查(2020年7月1日)。
[0103]
安全性调查：观察药剂对作物有无药害，是否出现矮化、褪绿、畸形等。
[0104]
2.试验结果
[0105]
不同药剂处理对西葫芦猝倒病的防治效果见下表9。
[0106]
表9不同药剂处理对西葫芦猝倒病的防治效果
[0107]
[0108]
根据上述表格可知，防效调查结果表明：1.实施例8处理的制剂用药量为15g/亩的防治效果最好，药后14d防效为89.1％。
[0109]
2.实施例8处理的低、中、高三个剂量对应用药量分别为5g/亩、10g/亩、15g/亩，其用量显著低于两个对照药剂的用量，而药效却显著优于两个对照药剂，表明本杀菌组合物具有用药量少、防效效果好的优势。
[0110]
3.经田间观察，上述供试药剂和对照药剂处理，都对试验作物西葫芦安全，没有发现药害症状(如矮化、褪绿、畸形等)，表明本杀菌组合物副作用低，不会对农作物安全性和产量等造成影响。
[0111]
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。