一种铁皮石斛专用组织培养液的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物培养技术领域，尤其涉及一种铁皮石斛专用组织培养液的制备方法
【背景技术】
[0002]石斛为兰科石斛属多年附生草本植物，是我国传统常用的名贵中药材。早在《神农本草经》和《本草纲目》上列为上品药材，历代本草及当今《中华人民共和国药典》中均有收载。石斛以茎入药，含有石斛碱、石斛胺、石斛次碱、石斛宁等多种生物碱；味甘淡、性微寒；有滋阴养胃、清热生津功效，主要对消化系统、呼吸系统、心血管和眼科等疾病有明的治疗作用。现代医学证明，石斛可促进血液循环，增强心脏功能；促进肠胃蠕动，增强消化功能；能显著提高人体内的SOP(超氧歧化酶)水平，降低LPO(过氧化脂质)，起到显著的抗衰老作用。
[0003]铁皮石斛又称黑节草，属兰科石斛属，为兰科多年生附生草本植物，是一种珍贵的野生药用植物。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒，一般均能耐_5°C的低温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛和金钗石斛为石斛之极品，铁皮石斛被列为“中华九大仙草之首”，自唐宋以来，一直被列为皇室贡品，铁皮石斛因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛具有独特的药用价值，以其茎入药，中药名:石斛，属补益药中的补阴药，《中国药典》:益胃生津，滋阴清热。铁皮石斛等少数品种之嫩茎，扭成螺旋状或弹簧状，晒干，商品称为耳环石斛，然而，因生长周期缓慢，极难存活，野生铁皮石斛濒临灭绝，人工育苗，成活率较低。
【发明内容】
[0004]基于【背景技术】存在的技术问题，本发明提出了一种铁皮石斛专用组织培养液的制备方法，通过调整个组分之间的比例和添加的先后顺序，使最终得到的培养液，能够为铁皮石斛提供全面的营养物质，能够使铁皮石斛快速促根生茎，并能够提高铁皮石斛中多糖含
量、氨基酸含量°
[0005]本发明提出的一种铁皮石斛专用组织培养液的制备方法，包括如下步骤:
[0006]S1、按摩尔份称取2.2-2.5份碘化钾、40-42份硫酸锰、23-25份硫酸锌、70-72份硼酸、1-1.5份钼酸钠、0.1-0.3份硫酸铜、0.3-0.5份氯化钴，加水溶解后搅拌均匀得到第一组分，其中碘化钾与第一组分的摩尔体积比(mmol/L)为2.2-2.5:2.3-2.4 ；
[0007]S2、按摩尔份称取30-33份硫酸亚铁和59_62份乙二胺四乙酸二钠，加水溶解后搅拌均匀得到第二组分，其中硫酸亚铁与第二组分的摩尔体积比(mmol/L)为30-33:
1.9-2.1 ；
[0008]S3、按重量份称取1.4-1.6 X 15份肌醇、400-410份烟酸、780-800份盐酸吡哆醇、170-190份盐酸硫胺素和1550-1600份甘氨酸，加水溶解后搅拌均匀得到第三组分，其中盐酸吡哆醇与第三组分的质量体积比(g/L)为156-160:1000 ；
[0009]S4、按重量份称取3800-4000份去皮土豆，加入料理机中，加水后进行搅拌得到土豆泥，再加入1000-1200份椰子汁，混合均匀后得到物料A ;将57-60份硝酸铵、67-70份硝酸钾、16-20份氯化钙、14-17份硫酸镁、7-10份磷酸二氢钾加入水中溶解后混合均匀得到物料B ;接着将物料A加热，在加热过程中加入物料B，搅拌均匀后依次加入第一组分、第二组分和第三组分并搅拌均匀，继续加入3000-3200份红糖和300-320份琼脂并搅拌均匀，加水溶解后搅拌均匀后，调节PH值为5.5-6得到混合物料，其中琼脂与混合物料的质量体积比(g/L)为75-80:17-18，第一组分、第二组分、第三组分和混合物料的体积比为0.2-0.4:0.2-0.4:0.2-0.4:65-75 ；
[0010]S5、将混合物料分装后，进行高温高压灭菌，冷却至室温得到铁皮石斛专用组织培养液。
[0011]优选地，SI中，按摩尔份称取2.3-2.4份碘化钾、40.6-41.2份硫酸锰、23.7-24.5份硫酸锌、70.8-71.2份硼酸、1.2-1.4份钼酸钠、0.13-0.22份硫酸铜、0.36-0.45份氯化钴，加水溶解后搅拌均匀得到第一组分，其中碘化钾与第一组分的摩尔体积比(mmol/L)为
2.3_2.4:2_ 35_2.370
[0012]优选地，S2中，硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的摩尔比为31-32:60_61。
[0013]优选地，S3中，按重量份称取1.45-1.56X 15份肌醇、403-407份烟酸、785-795份盐酸吡哆醇、175-185份盐酸硫胺素和1580-1590份甘氨酸，加水溶解后搅拌均匀得到第三组分，其中盐酸吡哆醇与第三组分的质量体积比(g/L)为157-159:1000 ；
[0014]优选地，S4中，按重量份称取3850-3900份去皮土豆，加入料理机中，加水后进行搅拌得到土豆泥，再加入1050-1150份椰子汁，混合均匀后得到物料A ;将58-59份硝酸铵、68-69份硝酸钾、17-19份氯化钙、15-16份硫酸镁、8_9份磷酸二氢钾加入水中溶解后混合均匀得到物料B ;接着将物料A加热，在加热过程中加入物料B，搅拌均匀后依次加入第一组分、第二组分和第三组分并搅拌均匀，继续加入3100-3150份红糖和305-315份琼脂并搅拌均匀，加水溶解后搅拌均匀后，调节pH值为5.5-6得到混合物料，其中琼脂与混合物料的质量体积比(g/L)为77-78:17-18，第一组分、第二组分、第三组分和混合物料的体积比为0.3:0.3:0.3:68-72 ο
[0015]本发明配伍合理，通过调整个组分之间的比例和添加的先后顺序，使氮磷钾等常量元素和微量元素的处于合理的比例之中，使最终得到的培养液，能够为铁皮石斛提供全面的营养物质，而有机物质和无机盐相互配合，能够使铁皮石斛快速促根生茎，土豆泥、椰子汁、红糖和琼脂相互配合，能够提高铁皮石斛中多糖含量、氨基酸含量，提高铁皮石斛的生根率和生长速度，显著提高铁皮石斛的存活率。
【具体实施方式】
[0016]下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
[0017]实施例1
[0018]本发明提出的一种铁皮石斛专用组织培养液的制备方法，包括如下步骤:
[0019]S1、按摩尔份称取2.2份碘化钾、42份硫酸锰、23份硫酸锌、72份硼酸、I份钼酸钠、0.3份硫酸铜、0.3份氯化钴，加水溶解后搅拌均匀得到第一组分，其中碘化钾与第一组分的摩尔体积比(mmol/L)为25:23 ；
[0020]S2、按摩尔份称取33份硫酸亚铁和59份乙二胺四乙酸二钠，加水溶解后搅拌均匀得到第二组分，其中硫酸亚铁与第二组分的摩尔体积比(mmol/L)为33:1.9 ;
[0021]S3、按重量份称取1.6 X 15份肌醇、400份烟酸、800份盐酸吡哆醇、170份盐酸硫胺素和1600份甘氨酸，加水溶解后搅拌均匀得到第三组分，其中盐酸吡哆醇与第三组分的质量体积比(g/L)为156:1000 ;
[0022]S4、按重量份称取4000份去皮土豆，加入料理机中，加水后进行搅拌得到土豆泥，再加入1000份椰子汁，混合均匀后得到物料A ;将60份硝酸铵、67份硝酸钾、20份氯化钙、14份硫酸镁、10份磷酸二氢钾加入水中溶解后混合均匀得到物料B ;接着将物料A加热，在加热过程中加入物料B，搅拌均匀后依次加入第一组分、第二组分和第三组分并搅拌均匀，继续加入3000份红糖和320份琼脂并搅拌均匀，加水溶解后搅拌均匀后，调节pH值为5.5得到混合物料，其中琼脂与混合物料的质量体积比(g/L)为80:17，第一组分、第二组分、第三组分和混合物料的体积比为0.4:0.2:0.4:65 ；
[0023]S5、将混合物料分装后，进行高温高压灭菌，冷却至室温得到铁皮石斛专用组织培养液。
[0024]实施例2
[0025]本发明提出的一种铁皮石斛专用组织培养液的制备方法，包括如下步骤:
[0026]S1、按摩尔份称取2.5份碘化钾、40份硫酸锰、25份硫酸锌、70份硼酸、1.5份钼酸钠、0.1份硫酸铜、0.5份氯化钴，加水溶解后搅拌均匀得到第一组分，其中碘化钾与第一组分的摩尔体积比(mmol/L)为11:12 ;
[0027]S2、按摩尔份称取30份硫酸亚铁和62份乙二胺四乙酸二钠，加水溶解后搅拌均匀得到第二组分，其中硫酸亚铁与第二组分的摩尔体积比(mmol/L)为10:0.7 ;
[0028]S3、按重量份称取1.4X 15份肌醇、410份烟酸、780份盐酸吡哆醇、190份盐酸硫胺素和1550份甘氨酸，加水溶解后搅拌均匀得到第三组分，其中盐酸吡哆醇与第三组分的质量体积比(g/L)为16:100 ;
[0029]S4、按重量份称取3800份去皮土豆，加入料理机中，加水后进行搅拌得到土豆泥，再加入1200份椰子汁，混合均匀后得到物料A ;将57份硝酸铵、70份硝酸钾、16份氯化钙、17份硫酸镁、7份磷酸二氢钾加入水中溶解后混合均匀得到物料B ;接着将物料A加热，在加热过程中加入物料B，搅拌均匀后依次加入第一组分、第二组分和第三组分并搅拌均匀，继续加入3200份红糖和300份琼脂并搅拌均匀，加水溶解后搅拌均匀后