一种曙箣竹组培快繁方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种曙箣竹组培快繁方法。
【背景技术】
[0002]上个世纪六十年代植物组织培养技术日渐成熟，并开始在生产上得到大规模应用。对于有较高观赏价值的珍稀竹种，常规繁殖难以满足社会需要，采用试管快繁可以规模化生产竹苗。竹类植物的组织培养起步于1968年，80年代国外开始进行比较系统的研宄。迄今已对箣竹属、刚竹属、牡竹属、寒竹属、箬竹属等20多属70多个竹种开展了组织培养的研宄，且主要集中于丛生竹种，有关散生竹种组织培养及试管快繁的成功报道较少。
[0003]曙箣竹(5: mrsicWor)为禾本科竹亚属，原产日本。为优良观赏竹种，不耐寒。初发新叶白色，随后转为花叶，最后变为全绿，具有很高的观赏价值。由于常规的竹子繁育不仅效率低、耗费大，无法解决竹产业种苗需求的问题。利用植物组织培养技术，可对植物进行大量并快速的繁殖，竹子的再生体系的建立对其遗传转化研宄具有重要的基础作用，可通过遗传转化改变植株的遗传性状，使其更好的适应生存的环境，同时可以改变其观赏性质。因此，本发明以曙箣竹带芽茎段为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了曙箣竹离体再植株，建立曙箣竹组织培养快速繁殖技术体系，对促进曙箣竹规模化发展具有重要意义。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供出一种曙箣竹组培快繁方法，本发明以曙箣竹带芽茎段为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了曙箣竹离体再植株，建立曙箣竹组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
[0005]本发明的一种曙箣竹组培快繁方法，包括以下的步骤:
(I)外植体消毒:选取曙箣竹当年生带芽茎段，在流水下冲洗I?3h，用软毛刷3%?5%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗60?90min。于超净工作台中以70%?80%乙醇溶液浸泡20?60s，无菌水冲洗3?5次，再用0.1%?0.5%升汞溶液消毒5?15min，无菌水冲洗3?5次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用。
[0006](2)诱导培养:将经步骤(I)处理后的茎段剥去杆箨后接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001χ，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养30天后统计诱导情况。
[0007](3)增殖培养:将步骤(2)诱导培养得到长度为1.5?2.5cm左右长势的无菌芽接种到增殖培养基进行丛生芽增殖培养。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养30天后统计发芽数。
[0008](4)生根培养:切取步骤(3)增殖中获得高3.5?4.5cm左右的幼苗并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养30天后统计生根情况。
[0009](5)炼苗移栽:将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下4?5天后，打开瓶盖2?3天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩:蛭石=1:1:1的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽I株生根苗，移栽时需将基质压实，并进行单株套袋，早晚喷雾，保证生长环境潮湿。移栽7天后剪去塑料袋两角，14天后完全脱袋，移栽30天后统计成活率。
[0010]上述步骤(2)所述的诱导培养基为:MS+3.0?8.0mg/L6-BA+0.1?1.0mg/LZT+1.0 ?3.0g/L AC+ 15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0011]上述步骤(3)所述的增殖培养基为:MS+0.001?0.01mg/L TDZ+1.0?3.0mg/LZT+1.0 ?4.0mg/L 6-BA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0012]上述步骤(4)所述的生根培养基为:MS+0.1?1.0mg/L IBA+1.0?3.0mg/LIAA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0013]与现有技术相比本发明的优点是:曙箣竹(5: Mr1SicoJor)为禾本科的优良观赏竹种。由于常规的竹子繁育不仅效率低、耗费大，无法解决竹产业种苗需求的问题。利用植物组织培养技术，可对植物进行大量并快速的繁殖，竹子的再生体系的建立对其遗传转化研宄具有重要的基础作用，可通过遗传转化改变植株的遗传性状，使其更好的适应生存的环境，同时可以改变其观赏性质。本发明以曙箣竹带芽茎段为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了曙箣竹离体再植株，建立曙箣竹组织培养快速繁殖技术体系，对促进曙箣竹规模化发展具有重要意义。
【具体实施方式】
[0014]以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0015]实施例1
(O外植体消毒:选取曙箣竹当年生带芽茎段，在流水下冲洗lh，用软毛刷3%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗60min。于超净工作台中以75%乙醇溶液浸泡30s，无菌水冲洗3?5次，再用0.1%升未溶液消毒5min，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用。
[0016](2)诱导培养:将经步骤(I)处理后的茎段剥去杆箨后接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为20001χ，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后诱导率为78.92%。所述的诱导培养基为:MS+5.0mg/L6-BA+0.5mg/L ZT+1.5g/L AC+ 18g/L 蔗糖 +4.5g/L 琼脂，pH 为 5.5。
[0017](3)增殖培养:将步骤(2)诱导培养得到长度为1.5?2.5cm左右长势的无菌芽接种到增殖培养基进行丛生芽增殖培养。接种后置于每天光照13小时，光照强度为20001x，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养30天增殖系数为3.62。所述的增殖培养基为:MS+0.005mg/L TDZ+2.0mg/L ZT+2.5mg/L 6_BA+18g/L 蔗糖+4.5g/L 琼月旨，pH为5.5。
[0018](4)生根培养:切取步骤(3)增殖中获得高3.5?4.5cm左右的幼苗并接种至