一种颅骨瓣储存方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医学和生物工程领域，具体涉及一种颅骨瓣的储存方法。
【背景技术】
[0002]神经外科去骨瓣减压术是解除因脑外伤、脑出血、脑肿瘤以及大面积脑梗塞等所致颅内高压的有效手段。但是，手术中去除骨瓣所造成的颅骨缺损，使患者失去正常颅骨的屏障作用，并严重影响外观，对患者将来回归社会的生理和心理均造成很大影响，因此，一般在手术后3-6月，待颅内高压完全解除，患者基本康复后，大多数患者需要接受颅骨缺损的修补手术。
[0003]目前，在异质材料中，钛合金相对早年的有机玻璃、硅胶等材料，其组织相容性好，排斥反应小，在临床上已被广泛应用，但钛合金的网板仍有诸多问题:(1)起皱、变形、边缘翘曲和网板松动等是金属特有的缺陷，尤其当其受冲击时产生的塑性变形，不仅影响美观，而且锐利的边缘易刺破皮肤，导致钛网外露和皮肤感染；(2)非自体组织，易使患者产生心理障碍；(3)在影像学检查时会产生伪影；(4)钛网仅覆盖颅骨外表面，在颅骨较厚区域的内表面，缺损的颅骨内缘可因棱角造成脑组织的切割伤；(5)导热性强，患者无法忍受长时间阳光暴晒和严寒，不能起到隔热、隔冷、防震、隔音和缓冲的功能，容易出现头痛和癫痫发作；(6)价格高。自体颅骨瓣作为颅骨缺损的修补材料，具有无需塑形，无排斥反应，患者心理易接受，并能够再生复活，恢复颅骨隔温、隔音、防震和缓冲等自然属性，具有广阔的临床应用前景。
[0004]然而，自体颅骨的储存方法仍是困扰业界的巨大难题。现有技术中，自体颅骨的储存方法主要包括两种:体内储存和体外储存。所谓体内储存，是指将手术中取出的颅骨瓣直接植入患者的大腿内侧或腹部皮下备用，待患者3-6月后需行颅骨修补时，再将颅骨瓣取出。然而，由于“自体骨吸收现象”，颅骨瓣植入后，随时间的延长而逐渐缩小，以至于无法修补原来的缺损。同时，这种储存方式必须经历两次创伤，不仅增加新的疤痕，还增加了感染风险。因此，越来越多的研宄者将目标放在自体颅骨瓣的体外储存方法上。
[0005]中国专利文献CN103623464A公开了一种自体颅骨瓣回植技术的制备方法，包括如下步骤:(I)去污工艺:采用普通洗涤剂将骨表面的油污等杂质清洗干净，然后再用蒸馏水冲洗干净，晾干后获得完全的自体颅骨基质；(2)病毒灭活工艺:在室温条件下，用1g/L过氧乙酸和体积分数24%乙醇组成的过氧乙酸-乙醇混合液，微波震荡浸泡自体颅骨基质4-6小时；(3)去蛋白工艺:在室温条件下，将自体颅骨基质放入浓度为10-20%的双氧水中微波震荡浸泡48-72小时，然后再用纯化水冲洗干净；(4)脱脂工艺:用95%的酒精、乙醚，及洗洁净浸泡脱脂和纯化水冲洗，把自体颅骨基质放入离心机脱水后，在常温下自然干燥；(5)脱细胞工艺:在2-5°C条件下，将上述去脂步骤后获得的骨头基质放入浓度为0.5-1.0 %的十二烷基硫酸钠和浓度为0.8-1.2%的蛋白酶抑制剂PMSF的混合液中采用搅拌震荡的方式浸泡24-48小时，然后再用纯化水循环冲洗24-48小时；在2_5°C条件下，再将自体颅骨基质放入浓度为0.1-0.4%的胰蛋白酶中浸泡12-24小时，然后再用纯化水循环冲洗20-28小时，获得脱细胞基骨；(6)冻干工艺:将经脱细胞工艺后制备好的自体颅骨，放入冷冻干燥机冻干；(7)包装、灭菌工艺:在洁净间内封装，采用环氧乙烷或Co-60进行灭菌。
[0006]上述方法，为达到灭菌目的，需采用洗涤剂去污，过氧乙酸与乙醇的混合液病毒灭活，双氧水去蛋白，乙酸和乙醚脱脂以及十二烷基硫酸钠、蛋白酶抑制剂脱细胞等工艺步骤，不但工序复杂，无法实现规模化处理，而且，大量化学制剂的应用，使颅骨瓣中的活性物质大量丧失，甚至使颅骨瓣完全丧失活性而成为死骨。更令人困惑的是，如何排尽那些残留于颅骨瓣中的化学物质，以及这些化学物质是否对身体产生长远危害，目前尚无确凿的理论依据和最终定论。
【发明内容】
[0007]为此，本发明提供了一种工艺简单，保留骨瓣活性物质，无化学物质残留，易实现标准化、规模化和可追溯化的自体颅骨瓣体外储存方法。
[0008]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下:
[0009]本发明所述的一种颅骨瓣储存方法，包括如下步骤:
[0010]S1、采用清洗液清洗取下的颅骨瓣；
[0011]S2、用所述清洗液浸没所述颅骨瓣；
[0012]S3、低温速冻，使得所述颅骨瓣固定在所述清洗液形成的冰块中；
[0013]S4、在第一洁净区中，经所述冰块，钻取若干个颅骨瓣通孔；
[0014]S5、融化所述冰块，取出所述颅骨瓣并对其进行干燥处理；
[0015]S6、在第二洁净区中，对所述颅骨瓣进行密封处理；
[0016]S7、对经密封处理的所述颅骨瓣进行辐照灭菌；
[0017]S8、将辐照灭菌后所述颅骨瓣置于低温环境下保存。
[0018]所述步骤S2包括:
[0019]在第一容器中放置所述清洗液形成的冰块；
[0020]将所述颅骨瓣凸面朝上放置在所述冰块上；
[0021]在所述第一容器中注入所述清洗液，以浸没所述颅骨瓣；
[0022]对第一容器进行封盖。
[0023]在所述步骤S3与所述步骤S4之间还包括:
[0024]将所述第一容器置于第二容器中，并对所述第二容器进行封盖。
[0025]在所述第二容器进行封盖之后还包括:
[0026]将所述第二容器置于无菌PE包装袋中，并进行密闭封装。
[0027]所述步骤S7中所述辐照灭菌步骤为电子束灭菌或Y射线灭菌。
[0028]所述电子束由电子加速器产生，所述γ射线由Co-60产生。
[0029]对所述颅骨瓣采用所述电子束或所述γ射线的灭菌剂量为25kGy?35kGy。
[0030]所述步骤S3中所述低温速冻步骤的温度为_4°C?_80°C。
[0031]所述步骤S4中所述第一洁净区的等级不低于十万级，所述第一洁净区中的环境温度为-18 °C?8°C。
[0032]所述步骤S5中所述颅骨瓣的干燥步骤采用冷冻干燥工艺，干燥至所述颅骨瓣的水分含量不高于6wt%。
[0033]所述步骤S6中所述第二洁净区的等级不低于十万级，所述第二洁净区中的环境温度为0°C?8°C。
[0034]所述步骤S6包括:
[0035]将所述颅骨瓣置于第三容器中；
[0036]在所述颅骨瓣上方设置隔离盖；
[0037]对所述第三容器进行密闭封盖。
[0038]对所述第三容器进行密闭封盖之后，还包括:
[0039]将所述第三容器置于第四容器中，并对所述第四容器进行密闭封盖。
[0040]对所述第四容器进行密闭封盖之后，还包括:
[0041 ] 将所述第四容器置于无菌PE包装袋中，并进行密闭封装。
[0042]将所述颅骨瓣置于第三容器中之前，还包括:
[0043]对干燥后的所述颅骨瓣进行真空封装的步骤。
[0044]对所述第三容器进行密闭封盖之后，还包括:
[0045]将所述第三容器置于第五容器中，所述第五容器中装有干冰和/或液氮。
[0046]所述第一容器、所述第二容器、所述第三容器以及所述第四容器为由高分子材料制成的无菌敞口箱体。
[0047]所述高分子材料为耐辐射的聚对苯二甲酸乙二醇酯-1，4-环己烷二甲醇酯(PETG)或耐辐射的聚酰胺(PA)或耐辐射的聚乙烯(PE)。
[0048]所述步骤S6中，所述第三容器与所述第四容器通过铝塑复合膜或聚酰胺/聚乙烯(PA/PE)复合多层膜进行密闭封盖。
[0049]所述第一容器通过第一盖体扣合封盖；所述第二容器通过所述第二盖体扣合封至
ΠΠ O
[0050]所述第一容器与所述第三容器为同一个容器，和/或，所述第二容器与所述第四容器为同一容器。
[0051 ] 所述清洗液为氯化钠水溶液。
[0052]所述清洗液还包括乳酸钠、碳酸氢钠、硫酸镁、氯化钾、碳酸钙、葡萄糖中的至少一种。
[0053]还包括在盛装所述颅骨瓣的各所述容器上设置图形标识的步骤。
[0054]所述图形标识为二维码或条形码。
[0055]本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点:
[0056]1、本发明所述的自体颅骨瓣体外储存方法，不使用任何化学制剂，全程在低温下处理，既能有效避免所述颅骨瓣在储存过程中容易遇到的微生物污染问题，又能彻底解决化学物质的残留问题。
[0057]2、本发明所述的颅骨瓣储存方法，能在最大程度上实现颅骨瓣回植后成为活骨。由于自体颅骨的回植无