一种噬菌蛭弧菌生物消毒剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物制剂领域，具体涉及一种噬菌蛭弧菌生物消毒剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]■菌輕弧菌(Bdellovibr1 bacter1vorus)是一种具有寄生特性的弧形或杆形细菌，菌体大小为0.2?0.5微米X0.8?1.2微米，是养殖水体环境致病菌滋生的天然生物控制因子，能够有效地控制养殖水体的化学耗氧量以及硫化物和氨氮的含量，对开拓水产动物病害生物防治新途径具有重要的意义。噬菌蛭弧菌作为一种具有寄生特性的细菌，是养殖水体中病原菌滋生的天然生物控制因子。
[0003]目前我国市售的噬菌蛭弧菌制剂的剂型较少，主要以水剂和冻干粉剂为主，但水剂运输不方便，杀菌效果不稳定；冻干粉剂生产成本高，杀菌效果也不佳。因此，针对目前噬菌蛭弧菌制剂菌含量低、应用效果不稳定、生产成本高的缺陷，开发新型优质的噬菌蛭弧菌制剂无疑是提高其在水产养殖应用价值的迫切需要，针对现有技术中噬菌蛭弧菌存在的这种情况，本发明提出了一种噬菌蛭弧菌生物消毒剂及其制备方法。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种噬菌蛭弧菌生物消毒剂及其制备方法，解决了目前噬菌蛭弧菌制剂菌含量低、应用效果不稳定、生产成本高的问题，提高了噬菌蛭弧菌对水产动物病害防治与水质改良效果。
[0005]为解决上述技术问题，本发明提供的一种噬菌蛭弧菌生物消毒剂及其制备方法，具体实现步骤为:
[0006]第一步，噬菌蛭弧菌F16培养液的制备:
[0007]将终浓度为2.0 X 14个/ml的噬菌蛭弧菌F16接种于100ml pH8.0的5倍稀释的普通营养肉汤中，同时加入50 μ I终浓度为1.0X 1ltl个/ml的鲍曼氏不动杆菌AQ-1，于36°C,250转/min条件下摇床振荡培养直至噬菌蛭弧菌F16的活菌含量达到19个/ml ；
[0008]第二步，噬菌蛭弧菌F16生物消毒剂的制备:
[0009]在10ml活菌含量为19个/ml的噬菌蛭弧菌F16培养液中加入8g埃洛石粉、Ig核桃皮粉，在漩涡振荡仪上充分振荡30min直至均匀，打开鼓风机，紧接着打开喷雾干燥仪、蠕动泵和通针泵，设置参数为:风量显示110%，进风温度170°C，出风温度50 °C，进料量400ml/h，通针频率3s，喷雾干燥期间保持空气流量为800m3/h，气体通过鼓风机后被过滤并加热到设置温度100°C，蠕动泵将活菌含量为16个/ml的噬菌蛭弧菌F16培养液与埃洛石粉、玉米粉混合物传送到喷雾器，噬菌蛭弧菌F16生物消毒剂则通过旋风分离器收集，用水分测定仪测定噬菌蛭弧菌F16生物消毒剂的水分含量，将噬菌蛭弧菌F16生物消毒剂用无菌蒸馏水10倍梯度稀释后用自来水双层琼脂平板检测噬菌蛭弧菌F16的活菌含量。
[0010]另外，在噬菌蛭弧菌F16生物消毒剂制备完成之后，对其对水产养殖常见病原菌的杀菌效果进行测试，具体为:将Ig噬菌蛭弧菌F16生物消毒剂与Iml终浓度为1.0X 101°个/ml的水产养殖病原菌同时加入100无菌蒸饱水中于36°C、250转/min条件下摇床振荡培养96h，用稀释涂布无菌营养琼脂平板计数水产养殖病原菌的浓度，以同样剂量的粉状噬菌蛭弧菌制剂的杀菌率作为对照。
[0011]水产养殖病原菌包括霍乱弧菌GYL、霍乱弧菌LD081008B-1、溶藻弧菌BYK0834、溶藻弧菌BYK00019、哈维氏弧菌ZL0022、哈维氏弧菌BYK00034、创伤弧菌BYK000965、副溶血弧菌ZL0025、副溶血弧菌ZL0040、鳗弧菌BYK0638。
[0012]本发明相对于现有技术具有如下有益效果:
[0013]噬菌蛭弧菌F16生物消毒剂水分含量为1%，噬菌蛭弧菌活菌含量为1.8X 1ltl个/g，对水产养殖常见病原菌的杀菌率均达到了 99%，显著优于粉状噬菌蛭弧菌制剂的杀菌效果，可以作为一种替代抗生素的水产用生物消毒剂。
【附图说明】
[0014]图1为噬菌蛭弧菌F16生物消毒剂对水产养殖常见病原菌的杀菌效果表。
【具体实施方式】
[0015]下面结合附图和实施例对本发明作进一步的描述。
[0016]本发明以一株噬菌蛭弧菌BDF-H16为研宄对象，制备了噬菌蛭弧菌生物消毒剂，并通过其对水产养殖病原菌杀菌效果的考察，证实了其作为一种生物消毒剂在水产养殖应用的可行性与有效性。
[0017]本发明技术方案包括以下实验材料。
[0018]终浓度为2.0X 14个/ml的噬菌蛭弧菌F16和终浓度为1.0X 10 1CI个/ml的鲍曼氏不动杆菌AQ-1，以及终浓度为1.0X 101°个/ml的霍乱弧菌GYL、霍乱弧菌LD081008B-1、溶藻弧菌BYK0834、溶藻弧菌BYK00019、哈维氏弧菌ZL0022、哈维氏弧菌BYK00034、创伤弧菌BYK000965、副溶血弧菌ZL0025、副溶血弧菌ZL0040、鳗弧菌BYK0638。
[0019]埃洛石粉、核桃皮粉、普通营养肉汤、无菌营养琼脂平板、琼脂粉和无菌生理盐水、粉状噬菌蛭弧菌制剂；pH8.0的5倍稀释的普通营养肉汤、pH8.0的普通营养肉汤、自来水双层琼脂平板，底层琼脂浓度1.0%，上层软琼脂浓度0.5 %，均在I X 15Pa高压湿热灭菌20min后备用；温控摇床、生化培养箱和水分测定仪、全自动灭菌锅和高速离心机、漩涡振荡仪和小型喷雾干燥仪SY-6000。
[0020]其中，粉状噬菌蛭弧菌制剂采用现有技术，具体为以沸石粉作为赋形载体，所述的粉状制剂成品水分含量为0.5%?3%。所述的粉状制剂成品水分含量为1%。
[0021]应当理解，下面实施例中未说明的常规条件和方法，通常按照所属领域实验人员常规采用方法:如萨姆布鲁克和拉塞尔主编的《分子克隆实验指南》第三版，或按照制造厂商所建议的步骤和条件。
[0022]一、噬菌蛭弧菌F16培养液的制备。
[0023]将终浓度为2.0 X 14个/ml的噬菌蛭弧菌F16接种于100ml pH8.0的5倍稀释的普通营养肉汤中，同时加入50 μ I终浓度为1.0X 1ltl个/ml的鲍曼氏不动杆菌AQ-1，于36°C,250转/min条件下摇床振荡培养直至噬菌蛭弧菌