提高甘蔗试管苗光合自养生根效率的生长促进液及方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物试管苗的光合自养生根方法，具体涉及一种提高甘蔗试管苗光合 自养生根效率的生长促进液配方及方法。
【背景技术】
[0002] 植物组织培养一般要经过四个阶段，即初代培养(或建立无菌培养体系)、继代增 殖培养、生根培养和炼苗移栽。目前，已在生产上大规模应用的甘蔗试管苗快速繁育技术也 包括了以上四个阶段。然而这种传统的甘蔗试管苗生产过程复杂，且对培养环境条件高，致 使甘蔗组织培养工厂化生产试管苗的成本居高不下，已经不能为市场所接受，限制了甘蔗 健康种苗的种植和推广。因而，简化甘蔗试管苗生产程序，降低生产成本，是解决制约甘蔗 健康种苗大规模生产推广这一难题的最有效途径。
[0003] 研宄表明，在植物组织培养过程中，试管苗的生根成本占整个试管苗生产成本的 35°/『75%，因此简化试管苗生根技术可使植物试管苗生产成本大幅度下降。试管苗瓶外生根 技术是近年研宄成功的一项先进的组培生根技术，是植物试管苗简化生产技术的重要组成 部分。试管苗瓶外生根技术是将无根试管苗直接栽培于温室苗圃中进行生根，将传统的生 根和驯化两个阶段结合起来，省去了无根试管苗的试管内生根的传统程序，用自养生根代 替传统的异养生根，缩短育苗周期，节约生产成本。同时，植物组织培养技术的发展非常迅 速，国内外对满天星、罗汉果、牡丹、甘蔗、草莓等一大批植物试管苗瓶外生根技术进行了研 宄，并获得了成功。
[0004] 促进自养生根的生长调节剂是影响试管苗存活率的关键因素，良好的生长调节剂 配方可以有效提高试管苗的抗逆性和存活率。然而目前很多生长调节剂配方成分复杂，缺 乏科学合理的搭配，调节机理不明确，反而容易对试管苗产生损害，不利于试管苗的生产。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是克服传统甘蔗试管苗生长调节剂不理想，生产过程复杂，培养环 境要求严格，成本高的难题，提供一种提高甘蔗试管苗光合自养生根效率的生长促进液配 方及方法。
[0006] 本发明是通过如下方式实现的： 一种提高甘蔗试管苗光合自养生根效率的生长促进液，其特征在于，包括生长促进液 1:吲哚丁酸5~200 mg/L + 6-苄氨基腺嘌呤0.025~20 mg/L + L-脯氨酸28~230 mg/L +吐温-80 2. 5 ml/L，或生长促进液2 :萘乙酸5~300 mg/L + L-脯氨酸28~230 mg/L +吐温-80 2.5 ml/L。6-苄氨基腺嘌呤和L-脯氨酸可以延缓甘蔗试管苗叶片衰老 和增强试管苗抗环境胁迫的能力；在生长促进液中加入表面活性剂吐温-80,可以增强生 长促进液的渗透效果。
[0007] 优选的，所述生长促进液1中，吲哚丁酸与6-苄氨基腺嘌呤的重量比为10~ 200:1。在此比例下，吲哚丁酸与6-苄氨基腺嘌呤对试管苗生根的协同促进作用最好。
[0008] 优选的，所述生长促进液1为吲哚丁酸200 mg/L + 6-苄氨基腺嘌呤5 mg/L + L-脯氨酸56 mg/L +吐温-80 2.5 ml/L。在此比例下，生长促进液1处理的甘蔗试管苗 存活率最高，达92%。
[0009] 优选的，所述生长促进液2为萘乙酸100 mg/L + L-脯氨酸115 mg/L +吐温-80 2. 5 ml/L。在此比例下，生长促进液2处理的甘蔗试管苗存活率最高，达88%。
[0010] 一种提高甘蔗试管苗光合自养生根效率的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 炼苗：将完成继代增殖培养周期，且含继代增殖培养基的无根甘蔗苗瓶放于阴凉、 避风处，打开瓶盖，喷施生长促进液1 :吲哚丁酸5~200 mg/L + 6-苄氨基腺嘌呤0.025~ 20 mg/L + L-脯氨酸28~230 mg/L +吐温-80 2. 5 ml/L，或生长促进液2 :萘乙酸5~ 300 mg/L + L-脯氨酸 28 ~230 mg/L + 吐温-80 2.5 ml/L，在温度 20 ~30°C，湿度 65 ~ 80%，光照强度2000~10000 Iux下，炼苗24-48小时； (2) 分割试管苗：炼苗后从瓶中取出试管苗，高度大于I cm的试管苗单株分割，高度小 于I cm的试管苗按2~3株连体分割，用清水洗净培养基，清除老叶； (3) 消毒：将分割清洁后的试管苗用0. 2~0. 3%的高锰酸钾溶液浸泡消毒3~6分钟； (4) 种植：将消毒后的试管苗分成单株或小丛种植于放有栽培基质的种植盆中，浇足定 根水； (5) 生根培育管理：将带有试管苗的种植盆移入自动调节温度湿度的育苗温室，盖上遮 阳网，调节育苗温室环境：种植后的12天内，温室湿度控制在80%以上，光照强度2000~ 10000 Iux ;种植12天后，温室湿度控制在70%以上，光照强度2000~10000 Iux ;当90% 的甘蔗试管苗长出新叶后，揭开遮阳网，温室湿度控制为70%，每间隔30分钟淋水30秒，直 到试管苗出圃；试管苗长出新叶后，开始施液体肥和除草，苗圃管理与常规甘蔗试管苗育苗 方法相同。
[0011] 优选的，所述继代增殖培养基为MS + 6-苄氨基腺嘌呤I mg/L +萘乙酸0.01 mg/ L + 鹿糖 20 g/L。
[0012] 优选的，所述栽培基质为体积比1:1的育苗蛭石与有机营养土混合物，或风化的 田园土，或体积比1:1的黄泥与河沙混合物。
[0013] 优选的，所述有机营养土的成分包括：有机质彡30%，腐植酸彡5%，N + P2O5 + K2O 彡 3% 〇
[0014] 优选的，所述甘蔗其品种为桂糖44号。
[0015] 本发明的有益效果是： 1.本发明的生长促进液配方渗透效果好，可以显著提高甘蔗试管苗存活率，延缓叶片 衰老和增强抗环境胁迫的能力，甘蔗试管苗的存活率最高达90%以上，达到有根试管苗圃 移栽存活率水平，且增强了甘蔗试管苗的抗逆性，品质得到明显提高。
[0016] 2.本发明的生长促进液成本低廉、配制简单、使用方便，利于大规模生产和应用。
[0017] 3.本发明的生长促进液处理过的甘蔗试管苗消毒后可直接用于种植，省去了生 长素浸泡的操作，简化了操作流程，节约了试剂成本。
[0018] 4.本发明的方法将甘蔗无根试管苗直接栽培于日光温室中进行自养生根，用自 养生根方法代替了传统的试管内生根或异养生根方法，甘蔗试管苗组织培养过程由传统 的四个阶段简化为三个阶段，节省培养室占用空间、劳动力、生根培养基化学试剂和能源投 入，显著地提高了生产效率。
[0019] 5本发明的方法在温室培育生根过程中不要求无菌环境，操作简单，节省能源及 劳动力投入。
[0020] 6.本发明的方法中试管苗生根栽培基质为价格较为低廉且营养较丰富的育苗蛭 石与有机营养土混合物，或风化的田园土，或黄泥与河沙混合物，代替昂贵的MS生根培养 基，利于降低成本。
[0021] 7.本发明的方法由于试管苗生根与苗圃驯化进行有机结合，生产周期比传统方 法缩短12_15天。
[0022] 8.本发明的一种提高甘蔗试管苗光合自养生根效率的生长促进液配方，加之 方法中甘蔗试管苗组织培养过程由传统的四个阶段简化为三个阶段，方法操作简单，与 传统苗圃移栽及管理方法没有太大差异，甘蔗试管苗生产成本比传统方法生产成本降低 35-40%，经济效益显著。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合具体实施例对本发明作进一步描述，但不限制本发明的保护范围和应用 范围。
[0024] 实施例1 一种提高甘蔗试管苗光合自养生根效率的生长促进液配方，为生长促进液1 :吲哚丁 酸200 mg/L + 6-苄氨基腺嘌呤5 mg/L + L-脯氨酸56 mg/L +吐温-80 2. 5 ml/L。
[0025] 相应的提高甘蔗试管苗光合自养生根效率的方法，包括以下步骤： (1) 炼苗：甘蔗品种选择桂糖44号，将完成继代增殖培养周期，且含继代增殖培养基的 无根甘蔗苗瓶放于阴凉、避风处，打开瓶盖，喷施生长促进液1 :吲哚丁酸200 mg/L + 6-苄 氨基腺嘌呤5 mg/L + L-脯氨酸56 mg/L +吐温-80 2.5 ml/L，在温度25°C，湿度80%，光 照强度5000 Iux下，炼苗24小时； (2) 分割试管苗：炼苗后从瓶中取出试管苗，高度大于I cm的试管苗单株分割，高度小 于I cm的试管苗按2株连体分割，用清水洗净培养基，清除老叶； (3) 消毒：将分割清洁后的试管苗用0. 2%的高锰酸钾溶液浸泡消毒4分钟； (4) 种植：将消毒后的试管苗分成单株或小丛种植于放有栽培基质的种植盆中，浇足定 根水； (5) 生根培育管理：将带有试管苗的种植盆移入自动调节温度湿度的育苗温室，盖上遮 阳网，调节育苗温室环境：种植后的12天内，温室湿度控制在80%以上，光照强度2000 Iux ; 种植12天后，温室湿度控制在70%以上，光照强度2000 Iux ;当90%的甘蔗试管苗长出新 叶后，揭开遮阳网，温室湿度控制为70%，每间隔30分钟淋水30秒，直到试管苗出圃；试管 苗长出新叶后，开始施液体肥和除草，苗圃管理与常规甘蔗试管苗育苗方法相同。
[0026] 其中，所述继代增殖培养基为MS + 6-苄氨基腺嘌呤I mg/L +萘乙酸0.01 mg/L +蔗糖20 g/L;所述栽培基质为体积比为1:1的育苗蛭石与有机营养土混合物，有机营养 土的成分包括：有机质彡30%，腐植酸彡5%，N + P2O5 + K2O彡3%。
[0027] 种植第20天对试管苗进行统计，种植50株，存活46株，存活率为92%。
[0028] 实施例2 一种提高甘蔗试管苗光合自养生根效率的生长促进液配方，为生长促进液2 :萘乙酸5 mg/L + L-脯氨酸 230 mg/L + 吐温-80 2. 5 ml