一种简化的甘蔗试管苗生根及育苗方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种植物试管苗的异养+光合自养生根方法，具体涉及一种简化的甘 蔗试管苗生根及育苗方法。
【背景技术】
[0002] 植物组织培养一般要经过四个阶段，即初代培养（或建立无菌培养体系）、继代增 殖培养、生根培养和炼苗移栽。目前，已在生产上大规模应用的甘蔗试管苗快速繁育技术也 包括了以上四个阶段。然而这种传统的甘蔗试管苗生产过程复杂，且对培养环境条件高，致 使甘蔗组织培养工厂化生产试管苗的成本居高不下，已经不能为市场所接受，限制了甘蔗 健康种苗的种植和推广。因而，简化甘蔗试管苗生产程序，降低生产成本，是解决制约甘蔗 健康种苗大规模生产推广这一难题的最有效途径。
[0003] 研宄表明，在植物组织培养过程中，试管苗的生根成本占整个试管苗生产成本的 35%~75%，因此简化试管苗生根技术可使植物试管苗生产成本大幅度下降。试管苗瓶外 生根技术是近年研宄成功的一项先进的组培生根技术，是植物试管苗简化生产技术的重要 组成部分。试管苗瓶外生根技术是将无根试管苗直接栽培于温室苗圃中进行生根，将传统 的生根和驯化两个阶段结合起来，省去了无根试管苗的试管内生根的传统程序，用自养生 根代替传统的异养生根，缩短育苗周期，节约生产成本。同时，植物组织培养技术的发展非 常迅速，国内外对满天星、罗汉果、牡丹、甘蔗、草莓等一大批植物试管苗瓶外生根技术进行 了研宄，并获得了成功。
[0004] 一般的甘蔗试管苗生根需要15天以上，且试管苗素质差，生产成本高，严重制约 了生产效率和降低了生产效益。研宄一种科学合理的甘蔗试管苗生根及育苗方法，缩短试 管苗生根时间和育苗周期，对提高甘蔗试管苗的生产能力和应用范围，具有十分重要的意 义。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是克服传统甘蔗试管苗生根培养基及育苗方法的不足，提供一种简 化的甘蔗试管苗生根及育苗方法。
[0006] 本发明是通过如下方式实现的：
[0007] -种简化的甘蔗试管苗生根及育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0008] (1)配制生根培养基：按照如下配方配制生根培养基：1/2MS大量元素+MS微量元 素+MS铁盐+MS有机物+萘乙酸5~20mg/L+蔗糖50g/L。MS培养基各成分及含量如表1 所示。
[0009] 表1 MS培养基成分及含量 [0010]
[0011] (2)生根培养基灭菌：将生根培养基在121 °C下高温高压灭菌5~lOmin。本发明 的生根培养时间由原来的14-15天缩短为1-4天，因此将传统灭菌时间15min适当缩短不 会引起培养基污染，也不会影响试管苗的生长。
[0012] (3)无菌转管：在无菌室或超净工作台中将完成增殖培养周期的甘蔗试管苗转移 到冷却的生根培养基中。本发明的生根培养时间由原来的14-15天缩短为1-4天，甘蔗试 管苗不易受污染，无菌操作标准可适当降低，如减少擦洗超净工作台次数。
[0013] (4)生根培养：将生根培养基中的甘蔗试管苗移入培养室，控制培养室环境为温 度25~30°C，湿度65~80%，光照强度1000~20001ux，培育24-96小时。甘蔗试管苗不 定根发生理论上要经过4个阶段，即脱分化阶段（生根处理后0-24小时）、诱导阶段（24-96 小时）和分化阶段（96小时后），在分化阶段根原基伸长，并突破表皮，形成可见根。传统的 甘蔗试管苗生根培养周期要14-15天，即不定根完成上述三个生长发育阶段，且80%的试 管苗都出现可见根时，即完成生根培养后方可移栽苗圃。本发明利用了甘蔗试管苗不定根 发生发育在脱分化阶段后其生根进程不可逆转的原理，将生根培养1-4天的无根试管苗直 接移栽于苗圃中进行自养生根。
[0014] (5)分割试管苗：生根培养完成后，从瓶中取出试管苗，高度大于Icm的试管苗单 株分割，高度小于Icm的试管苗按2~3株连体分割，用清水洗净培养基，清除老叶。
[0015] (6)消毒：分割清洁后的试管苗用0. 2~0. 3%的高锰酸钾溶液浸泡消毒3~6分 钟。
[0016] (7)种植：将消毒后的试管苗分成单株或小丛种植于放有栽培基质的种植盆中， 浇足定根水。
[0017] (8)培育管理：将带有试管苗的种植盆移入自动调节温度湿度的育苗温室，盖 上遮阳网，调节育苗温室环境：种植后的10天内，温室湿度控制在80%以上，光照强度 2000~lOOOOlux ;种植10天后，温室湿度控制在70 %以上，光照强度2000~lOOOOlux ; 当90%的甘蔗试管苗长出新叶后，即揭开遮阳网，温室湿度控制为70%，每隔30分钟淋水 30秒，直到试管苗出圃；试管苗长出新叶后，开始施液体肥和除草，苗圃管理与常规甘蔗试 管苗育苗方法相同。
[0018] 优选的，所述增殖培养其培养基为MS+6-苄氨基腺嘌呤lmg/L+萘乙酸0. 01mg/L+ 鹿糖20g/L。
[0019] 优选的，所述栽培基质为体积比1:1的育苗蛭石与有机营养土混合物，或风化的 田园土，或体积比1:1的黄泥与河沙混合物。
[0020] 优选的，所述有机营养土的成分包括：有机质多30%，腐植酸多5%， Ν+Ρ205+Κ20 多 3%〇
[0021] 本发明的有益效果是：
[0022] 1.本发明的甘蔗试管苗生根时间从传统的15天缩短至1-4天，试管苗存活率最高 达90%以上，试管苗素质好，青绿，无黄叶，存活率达到有根试管苗圃移栽存活率水平，显著 提高了甘蔗试管苗的生产效率和经济效益。
[0023] 2.本发明的生根培养基高温高压灭菌时间从15分钟缩短为5至10分钟，节省了 高压时间、人力、电力。
[0024] 3.本发明的无菌转管操作简便，利于节约人力、物力，降低了生产成本。
[0025] 4.本发明用无根试管苗代替传统的有根试管苗进行移植，以异养+自养生根方法 代替传统的异养生根，节省培养室占用空间、提高培养室利用周转率、提高产量、节省劳动 力和能源投入，显著地提高了生产效率。
[0026] 5.本发明的试管苗生根栽培基质为价格较为低廉且营养较丰富的育苗蛭石与有 机营养土混合物，或风化的田园土，或黄泥与河沙混合物，代替昂贵的MS生根培养基，利于 降低成本。
[0027] 6.本发明将试管苗生根与苗圃驯化进行有机结合，生产周期比传统方法缩短 12-15 天。
[0028] 7.本发明操作简单、成本低廉、经济效益好，具有良好的市场前景。
【具体实施方式】
[0029] 下面结合具体实施例对本发明作进一步描述，但不限制本发明的保护范围和应用 范围。
[0030] 实施例1
[0031] 一种简化的甘蔗试管苗生根及育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0032] (1)配制生根培养基：按照如下配方配制生根培养基：1/2MS大量元素+MS微量元 素+MS铁盐+MS有机物+萘乙酸5~20mg/L+蔗糖50g/L ;
[0033] (2)生根培养基灭菌：将生根培养基在121 °C下高温高压灭菌5min ;
[0034] (3)无菌转管：在无菌室或超净工作台中将完成增殖培养周期的甘蔗试管苗转移 到冷却的生根培养基中；
[0035] (4)生根培养：将生根培养基中的甘蔗试管苗移入培养室，控制培养室环境为温 度25°C，湿度80%，光照强度12001UX，培育24小时；
[0036] (5)分割试管苗：生根培养完成后，从瓶中取出试管苗，高度大于Icm的试管苗单 株分割，高度小于Icm的试管苗按2株连体分割，用清水洗净培养基，清除老叶；
[0037] (6)消毒：分割清洁后的试管苗用0. 3%的高锰酸钾溶液浸泡消毒3分钟；
[0038] (7)种植：将消毒后的试管苗分成单株或小丛种植于放有栽培基质的种植盆中， 浇足定根水；
[0039] (8)培育管理：将带有试管苗的种植盆移入自动调节温度湿度的育苗温室，盖 上遮阳网，调节育苗温室环境：种植后的10天内，温室湿度控制在80 %以上，光照强度 400011?;种植10天后，温室湿度控制在70%以上，光照强度600011?;当90%的甘蔗试管 苗长出新叶后，即揭开遮阳网，温室湿度控制为70%，每隔30分钟淋水30秒，直到试管苗出 圃；试管苗长出新叶后，开始施液体肥和除草，苗圃管理与常规甘蔗试管苗育苗方法相同。
[0040] 其中，所述增殖培养其培养基为MS+6-苄氨基腺嘌呤lmg/L+萘乙酸0. 01mg/L+蔗 糖20g/L ;所述栽培基质为体积比1:1的育苗蛭石与有机营养土混合物，所述有机营养土的 成分包括：有机质彡30%，腐植酸彡5%，Ν+Ρ 205+Κ20彡3%。
[0041] 种植第20天对试管苗进行统计，种植50株/丛，存活46株/丛，存活率为92%。
[0042] 实施例2
[0043] 一种简化的甘蔗试管苗生根及育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0044] (1)配制生根培养基：按照如下配方配制生根培养基：1/2MS大量元素+MS微量元 素+MS铁盐+MS有机物+萘乙酸5~20mg/L+蔗糖50g/L ;
[0045] (2)生根培养基灭菌：将生根培养基在121 °C下高温高压灭菌IOmin ;
[0046] (3)无菌转管：在无菌室或超净工作台中将完成增殖培养周期的甘蔗试管苗转移 到冷却的生根培养基中；
[0047] (4)生根培养：将生根培养基中的甘蔗试管苗移入培养室，控制培养室环境为温 度28°C，湿度70%，光照强度lOOOlux，培育48小时；<