新颖的抗真菌组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明公开了用于控制植物疾病和预防农作物微生物腐败的新的抗微生物组合 物。
【背景技术】
[0002] 据估计世界农作物产量的约25%由于微生物腐败而损失，其中真菌导致的腐败是 迄今为止最重要的原因。从经济学观点以及人道主义观点来看，预防食品腐败均非常重要。 毕竟，世界上许多地区的人在遭受饥饿。
[0003] 在对抗植物和农作物疾病以及减轻它们对产量和品质造成的损害方面的成功在 很大程度上取决于抗真菌剂的及时应用。由于抗性现象的产生，许多抗真菌剂（例如苯并 咪唑）的长期和频繁的使用促成了它们有效性的降低。
[0004] 在过去40年期间，已开发出新型抗真菌剂并已在市场上销售。这些类型中的一种 是苯基吡咯类型。
[0005] 苯基吡咯抗真菌剂在开发和维持方面并非不面临挑战。一个大的关注点 是抗性的产生。现在已在若干种疾病中观察到对苯基吡咯抗真菌剂的抗性（参见 Iacomi-Vasilescuet 等人，2004 ;Kanetiset 等人，2006 ;Kinayet 等人，2007)。
[0006] 几十年来，多稀大环内醋杀真菌剂（antimycotic)那他霉素（natamycin)已 被用于预防食品如乳酪和香肠上的真菌生长。通过使用纳塔尔链霉菌（Streptomyces natalensis)发酵生成的此天然防腐剂在全世界被广泛用作食物防腐剂并且在食品工业中 具有安全使用的悠久历史。其对所有已知的食物腐败真菌均非常有效。尽管那他霉素在例 如乳酪业中被应用多年，但迄今为止从未观察到抗性真菌物种的产生。
[0007] 因此可得出结论：急需用于处理植物和农作物中和植物和作物上的真菌生长的更 有效的抗微生物组合物，例如抗真菌组合物。
[0008] 发明描沐
[0009] 本发明通过提供包含多烯抗真菌化合物和至少一种来自苯基吡咯抗真菌剂家族 的抗真菌化合物的新的协同抗微生物（例如抗真菌）组合物，解决了上述问题。在本文中 使用时，术语"协同的"表示组合使用时抗真菌化合物的组合效果大于他们各自使用时的效 果之和。
[0010] 通常，两种活性成分的协同活性可以例如使用处理交互作用层（treatment interaction stratum，见Slinker，1998)在方差分析模型中测试。相对有效性可以通过下 式计算：（（未经处理的对照的进化状态值-组合物的进化状态值V(未经处理的对照的 进化状态值））X 100。然后可以通过下式计算交互作用系数：化合物A+化合物B的组合 的相对有效性）八化合物A的相对有效性+化合物B的相对有效性））X 100。大于100的 交互作用系数表示化合物之间的协同作用。
[0011] 或者可以如下计算协同作用：可以通过计算与用对照组合物处理的产品上的霉菌 生长相比，用活性成分处理的产品上观察到的霉菌生长的减少，来测定个体活性成分的抗 真菌活性（以％计）。可以根据Colby方程（Colby，1967)计算包含两种活性成分的组合抗 真菌组合物的预期抗真菌活性出，以％计）：
[0012] E = X+Y - [ (X ·Υ) /100]，其中X和Y分别是个体活性成分X和Y的观察到的抗真 菌活性（以％计）。如果组合的观察到的抗真菌活性（0,以％计）超出组合的预期抗真菌 活性（Ε，以％计）并且因而协同因子0/Ε>1. 0,那么活性成分的组合应用导致协同的抗真菌 效应。
[0013] 在本发明的一个实施方案中，来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合 物选自略菌腈（fludioxonil)和拌种略（fenpiclonil)。
[0014] 在一个实施方案中，所述组合物还可含有来自苯基吡咯抗真菌剂家族的两种或更 多种不同抗真菌化合物。应当理解，来自苯基吡咯抗真菌剂家族的抗真菌化合物的衍生 物（包括但不限于来自苯基吡咯抗真菌剂家族的抗真菌化合物的盐或溶剂化物）或来自 苯基吡咯抗真菌剂家族的抗真菌化合物的经修饰形式也可应用于本发明的组合物中。含 有苯基吡咯抗真菌剂例如咯菌腈的商业产品的实例为具有商标名Maxim?、Celest? 和Switch?的产品。包含苯基吡咯抗真菌剂例如拌种咯的商业产品的实例为具有商标名 Beret?、Galbas?和Gambit?的产品。所述商业产品可并入本发明中。
[0015] 在一个实施方案中，多烯抗真菌化合物选自那他霉素、制霉菌素（nystatin)、两 性霉素 B、三稀菌素（trienin)、意北霉素（etruscomycin)、菲律宾菌素（filipin)、钦氏 菌素（chainin)、制皮菌素（dermostatin)、lymphosarcin、杀念珠菌素（candicidin)、 金色制霉素（aureofungin)A、金色制霉素 B、哈霉素（hamycin)A、哈霉素 B和鲁斯霉素 (Iucensomycin)。在一个优选的实施方案中，多稀抗真菌化合物为那他霉素。在一个实施 方案中，所述组合物还可包含两种或更多种不同的多烯抗真菌化合物。应当理解，多烯抗真 菌化合物的衍生物（包括但不限于多烯抗真菌化合物的盐或溶剂化物）或多烯抗真菌化合 物的经修饰形式也可应用于本发明的组合物中。包含那他霉素的商业产品的实例为具有商 标名Delvocid?的产品。此类产品由DSM Food Specialties (荷兰）生产，并且可为包含 例如50% (w/w)那他霉素的固体或是包含例如2-50% (w/v)那他霉素的液体。所述商业 产品可并入本发明的组合物中。
[0016] 本发明的组合物通常包含约0· 005g/l至约100g/l和优选地约0· 01g/l至约50g/ 1的多稀抗真菌化合物。优选地，所述量为〇. 〇lg/l至3g/l。
[0017] 本发明的组合物通常包含约0. 0001g/l至约2000g/l和优选地约0. 0005g/l至约 1500g/l的来自苯基吡咯抗真菌剂家族的抗真菌化合物。更优选地，所述量为0. 001g/l至 1000g/l〇
[0018] 在一个实施方案中，本发明的组合物还包含至少一种选自以下的额外的化合物： 粘着剂（Sticking agent)、载体、着色剂、保护性胶体、粘合剂（adhesive)、除草剂、肥料、 增稠剂、螯合剂、触变剂、表面活性剂、其他抗微生物化合物、去污剂、防腐剂、铺展剂、填 充剂、喷洒油、流动添加剂、矿物质、溶剂、分散剂、乳化剂、润湿剂、稳定剂、消泡剂、缓冲 剂、UV吸收剂和抗氧化剂。其他抗微生物抗真菌化合物可为抗真菌化合物（例如抑霉唑 (imazalil)、噻苯挫（thiabendazole))或对抗昆虫、线虫、螨虫和/或细菌的化合物。当 然，根据本发明的组合物还可包含两种或更多种任何上述额外的化合物。在分开应用抗真 菌化合物的情况下，任何上述额外的化合物还可与多烯抗真菌化合物和/或来自苯基吡咯 抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物组合。在一个实施方案中，额外的化合物对于特定 用途（例如食物、饲料、药物、化妆品或农业）可接受的添加剂。适合用于食物、饲料、药物、 化妆品或农业的额外的化合物是本领域技术人员所已知的。
[0019] 在一个具体实施方案中，其他抗微生物化合物为属于亚磷酸类的天然农作物保护 化合物，例如腿#0 3或K 2ΗΡ03或两种亚磷酸盐的混合物。如本文所用，含亚磷酸类化合物 (phosphite containing compound)是指包含亚磷酸基团即P03(呈例如H2POf, HPO广或 PO广的形式）的化合物，或允许释放亚磷酸离子的任何化合物，包括化合物例如亚磷酸和 膦酸及其衍生物例如其酯和/或碱金属盐或碱土金属盐。在本发明的组合物包含多烯抗 真菌化合物（例如那他霉素）和至少一种含亚磷酸类化合物的情况下，对于每克多烯抗真 菌化合物，它们优选地包含0.1 g或更少的木质素磺酸盐，更优选0.1 g或更少的多酚。优 选地，对于每克多烯抗真菌化合物，它们包含0.0 lg或更少的木质素磺酸盐，更优选0.0 lg 或更少的多酚。特别地，它们不含木质素磺酸盐以及优选地不含多酚。含亚磷酸类化合物 的合适实例是亚磷酸及其（碱金属或碱土金属）盐，例如亚磷酸钾例如KH 2POjP K 2ΗΡ03、 亚磷酸钠和亚磷酸铵，和亚磷酸的（C1-C 4)烷基酯及其盐，例如乙基亚磷酸铝（三乙膦酸铝 (fosetyl-Al))、乙基亚磷酸钙、异丙基亚磷酸镁、异丁基亚磷酸镁、仲丁基亚磷酸镁和正丁 基亚磷酸铝。当然，含亚磷酸类化合物的混合物也包括在内。例如KH 2POjP K 2即03的混合 物可以通过例如向KH2PO3溶液中添加 KOH或K 20)3至5. 0-6. 0的最终pH来容易地获得。如 上所述，农作物或植物中被代谢成亚磷酸类化合物的前体-型化合物也可包含在本发明的 组合物中。实例为膦酸盐/酯，例如三乙膦酸铝络合物。在例如农作物或植物中，该分子的 膦酸乙酯部分被代谢成亚磷酸类。此类化合物的一个实例是被称为Aliette? (Bayer，德 国）的商业膦酸氢乙醋（ethyl hydrogen phosphonate)产品。组合物中亚磷酸类与那他霉 素的比率（以重量计）通常为2:1至500:1 (w/w)之间，优选地3:1至300:1 (w/w)之间， 更优选地5:1至200:1 (w/w)之间。
[0020] 根据本发明的组合物的pH可为1至10、优选2至9、更优选3至8、最优选4至7。 它们可为固体例如粉末组合物或可为液体。本发明的组合物可为水性或非水性即用型组合 物，但是也可为水性或非水性浓缩组合物/悬浮液，或在使用前必须用合适的稀释剂例如 水或缓冲体系稀释的储备组合物、悬浮液和/或溶液。或者，本发明的组合物还可用于制备 涂料乳剂。本发明的组合物还可具有浓缩干产品（例如粉末、颗粒和片剂）的形式。它们 可用于制备用于对诸如农产品（包括植物、农作物、蔬菜和/或水果）的产品进行浸没或喷 洒的组合物。当然，当多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌 化合物作为分开的组合物应用时，以上也适用。
[0021] 在另一个方面，本发明涉及试剂盒，其包含多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗 真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物。多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的 至少一种抗真菌化合物可存在于两个独立的包装例如容器中。所述试剂盒的组分在包装中 可为干燥形式或液体形式。如果需要，所述试剂盒可包含用于溶解所述化合物的说明书。此 外，所述试剂盒可包含用于应用所述化合物的说明书。
[0022] 在另一方面，本发明涉及一种通过用多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂 家族的至少一种抗真菌化合物处理产品来保护所述产品抵抗真菌的方法。此外，可在用多 烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物处理产品之前、同 时或之后，用其他抗真菌和/或抗微生物化合物处理产品。可通过顺次应用多烯抗真菌化 合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物来处理产品，或反之亦然。或 者，可通过同时应用多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化 合物的来处理产品。在同时应用的情况下，所述化合物可存在于同时应用的不同的组合物 中，或所述化合物可存在于单一组合物中。在另一实施方案中，可通过以分开（separate) 模式或交替（alter