一种铁皮石斛的组培繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于农业技术领域，特别涉及一种铁皮石斛的组培繁殖方法。
【背景技术】
[0002] 铁皮石斛（Musa balbisiana Colla)是我国南方的重要热带水果之一，同时也是 许多地区的重要经济收入来源，并且许多农户依靠种植铁皮石斛脱贫致富。大多数的栽培 食用铁皮石斛都是单性三倍体AAA，具有高度的不育特性，主要靠无性繁殖，生产上通常利 用吸芽进行繁殖，种苗不足时，也可采用铁皮石斛的地下茎切块来繁殖种苗，但是该方法长 期使用会累积许多病毒，如：束顶病、花叶病等。造成严重的危害。另外，不良的铁皮石斛种 苗会导致生长不良，果品不佳，收获不统一等问题。铁皮石斛组织培养技术能够在短时间内 快速繁殖出大量规格统一的优质的无病虫害的健康种苗，并且，新品种的培育和引进也需 要利用脱病毒和组培快繁技术加快名优品种的发展。铁皮石斛组培技术是我国农业科研工 作者在20世纪80年代后期研发推广，该技术的应用对我国铁皮石斛产业的迅速发展起到 了重大的推进作用，也使得种苗工厂化生产得以实现，在短时间内将优良品种大面积推广， 达到大规模商品化铁皮石斛生产。但是该产业经过20多年的应用，我们发现该技术存在不 足，在生产应用中主要问题是：
[0003] 1.组培期间，易出现褐化现象，无法防止连带的影响，造成成活率低。
[0004] 2.由于生产周期长，导致生产场地周转慢，占用大量培养架，从而导致厂房面积增 加。
[0005] 以上缺点是传统组培生产中普遍存在的问题，在中国南方的热带及亚热带地区， 铁皮石斛组培苗已经成为大宗种苗品种，每年都有超过上亿株的市场需求，但是由于生产 成本在逐年的递增（人工费用，场地租金等）极大的阻了种苗工厂化产业的发展，因此开发 一种新的铁皮石斛组培繁殖的技术以克服原有培养方式的缺点，确保铁皮石斛种苗产业的 进一步发展。
【发明内容】
[0006] 本发明针对上述存在的问题，本发明提供了一种铁皮石斛的组培繁殖方法，不仅 能缩短生产培养单周期和生长周期，而且能提高育苗成活率，从而减少投资资金，降低生产 成本，提尚工业化生广的利润。
[0007] 为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现的：
[0008] -种铁皮石斛的组培繁殖方法，包括如下步骤：
[0009] (1)外植体准备：选取健康一年生的铁皮石斛的茎段作为外植体材料，所述茎段 为切取两节间间的节，且距离节左端和右端各〇. 5-lcm为外植体，然后进行外植体消毒；
[0010] (2)愈伤组织培养：将消毒后的2-3份外植体放入愈伤组织培养基中在30°C下进 行培养20天，得到愈伤组织；
[0011] (3)分化培养：将愈伤组织接入分化培养基在28°C下进行培养7天，得到铁皮石斛 苗；
[0012] (4)壮苗培养：将铁皮石斛苗转接至壮苗培养基上，在28°C下继续培养7天；
[0013] (5)生根培养：将壮苗培育后的铁皮石斛苗转接至生根培养基上28°C下培养5 天；
[0014] (6)炼苗与移栽：选取根系发达及健壮的铁皮石斛幼苗洗净根部培养基，再驯化 5-10天后，移栽至种植基质中。
[0015] 在本发明中，作为进一步说明，所述外植体消毒为体积浓度为75%乙醇+体积浓 度为2 %次氯酸钠溶液或体积浓度为75 %乙醇+体积浓度为2 %次氯酸钠+体积浓度为 0. 1 %氯化汞溶液进行消毒。
[0016] 在本发明中，作为进一步说明，所述愈伤组织培养的培养基配方为：1/2MS+NAA 0· lmg/L+KT 0· 3mg/L+BA 0· lmg/L+8g/L 琼脂 +30g/L 鹿糖 +8g/L 马铃薯汁。
[0017] 在本发明中，作为进一步说明，所述分化培养的培养基配方为：MS+IBA 0.4~ 0· 5mg/L+NAA 0· 3 ~0· 5mg/L+2, 4-D 0· 8 ~I. 0mg/L+10 ~15g/L 琼脂 +30 ~50g/L 鹿糖 +10~15g/L香蕉泥。
[0018] 在本发明中，作为进一步说明，所述壮苗培养的培养基配方为：MS+IBA 0.3~ 0· 5mg/L+NAA 0· 3 ~0· 5mg/L+2, 4-D 0· 3 ~0· 5mg/L+10 ~15g/L 琼脂 +35g/L 鹿糖 +15g/L 香焦泥；
[0019] 在本发明中，作为进一步说明，所述生根培养的培养基配方为MS+IBA 2~5mg/ L+NAA 2 ~5mg/L+0. 1 ~0· 2g/L 活性炭 +5 ~10g/L 琼脂 +20 ~30g/L 蔗糖 +10 ~15g/L 马铃薯泥。
[0020] 本发明具有的有益效果为：
[0021] 1、本发明巧妙采取两节间间的节作为外植体，与现有技术中直接采用茎段且每 2-3节为一段，不仅在组培时占用培养基的位置，需要选用规格较大的培养基，进而增加了 培养基配方的使用量，增加了组培的成本，本发明采用距离节左右两端0.5-lcm的距离为 外植体，完全避免的现有技术出现的弊端，现有技术中一般采用在一个培养基放2个外植 体，外植体过长在组培期间若出现霉变现象容易出现交叉感染，本发明的外植体长度的选 取就降低了组培期间霉变的交叉感染的机率，进而使本发明更有可行性，适合大规模生产 应用。
[0022] 2、本发明采用的消毒方法，能防止外植体褐变，保证外植体进行组培的成活率。
[0023] 3、本发明针对不同的培养阶段添加不同的激素和外源物质，能缩短生产培养单周 期和生长周期。
【具体实施方式】
[0024] 下面通过具体实施例进一步说明本发明，以使本发明的优点和特征更易于被理 解，应该理解的是，本发明的实施例仅仅是用于本发明，而不是对本发明的限制。
[0025] 实施例1 :
[0026] -种铁皮石斛的组培繁殖方法，包括如下步骤：
[0027] (1)外植体准备：选取健康一年生的铁皮石斛的茎段作为外植体材料，所述茎段 为切取两节间间的节，且距离节左端和右端各〇. 5cm为外植体，然后使用体积浓度为75 % 乙醇+体积浓度为2%次氯酸钠溶液进行外植体消毒；
[0028] (2)愈伤组织培养：将消毒后的2份外植体放入培养基配方为1/2MS+NAA 0· Img/ L+KT 0. 3mg/L+BA 0. lmg/L+8g/L琼脂+30g/L蔗糖+8g/L马铃薯汁的愈伤组织培养基中在 30°C下进行培养20天，得到愈伤组织；
[0029] (3)分化培养；将愈伤组织接入配方为MS+IBA 0· 4mg/L+NAA 0· 3mg/L+2, 4-D 0. 8mg/L+10g/L琼脂+30g/L蔗糖+10g/L香蕉泥的分化培养基在28°C下进行培养7天，得 到铁皮石斛苗；
[0030] (4)壮苗培养；将铁皮石斛苗转接至配方为MS+IBA 0· 3mg/L+NAA 0· 3mg/L+2, 4-D 0. 3mg/L+10g/L琼脂+35g/L蔗糖+15g/L香蕉泥的壮苗培养基上，在28°C下继续培养7天；
[0031] (5)生根培养；将壮苗培育后的铁皮石斛苗转接至配方为MS+IBA 2mg/L+NAA 2mg/L+0. lg/L活性炭+5g/L琼脂+20g/L蔗糖+10g/L马铃薯泥的生根培养基上28°C下培 养5天；
[0032] (6)炼苗与移栽：选取根系发达及健壮的铁皮石斛幼苗洗净根部培养基，再驯化5 天后，移栽至种植基质中。
[0033] 实施例2 :
[0034] -种铁皮石斛的组培繁殖方法，包括如下步骤：
[0035] (1)外植体准备：选取健康一年生的铁皮石斛的茎段作为外植体材料，所述茎段 为切取两节间间的节，且距离节左端和右端各Icm为外植体，然后使用浓度为体积浓度为 75%乙醇+体积浓度为2 %次氯酸钠+体积浓度为0. 1 %氯化汞溶液进行外植体消毒；
[0036] (2)愈伤组织培养：将消毒后的3份外植体放入培养基配方为1/2MS+NAA 0.1 mg/ L+KT 0. 3mg/L+BA 0. lmg/L+8g/L琼脂+30g/L蔗糖+8g/L马铃薯汁的愈伤组织培养基中在 30°C下进行培养20天，得到愈伤组织；
[0037] (3)分化培养；