一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物扩繁领域，主要是涉及一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法。
【背景技术】
[0002]十二卷属(Haworthia Dural)是一类多年生草本小型多肉植物，隶属百合科芦荟族，为纪念19世纪初英国植物学家Adrian Hardn Haworth而得名，该属按植株和叶的形态，分为硬叶类和软叶类二类。十二卷属植物原产地大多在南非，我国沙漠干燥地区也有野生种类分布，现今在世界各地种植广泛。本属约分为20个系，150多各种，园艺变种和杂交品种繁多，价格从几元到上万元不等。十二卷属植物叶形富于变化，外观美丽，具有很高的观赏价值，很多种类习性强健，栽培要求不高，是我国目前最受欢迎的室内观赏植物之一。
[0003]十二卷属植物传统繁殖方法主要有扦插、分株及播种等。扦插成活率极低，适合植物爱好者对植株进行小规模繁殖，不适用于商品化的大规模繁殖。分株是较为常用的十二卷属传统繁殖方法，但每年繁殖量仅3-5株，名贵品种更少，繁殖率极低。播种法受到十二卷属种子数量极少的限制，同时，种子发芽率又极低，需2年甚至更长时间才能够长成，且由于为有性繁殖，性状不稳定，不符合商业生产的要求。上述因素使得十二卷属植物价格居高不下，普通百姓消费不起。
[0004]组培繁殖方法是近年来研究和常用的十二卷属植物繁殖方法，能够获得性状稳定，无菌的幼苗，较传统繁殖方法，繁殖率有所提高，但仍存在组培繁殖速度慢，成活率不高，增值量不多的问题。为了解决上述十二卷属植物组培繁殖率低的问题，本发明提供了一种增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的培养基及组培方法，能够显著提高十二卷属植物的扩繁速度，在短期内获得大量十二卷属多肉植物植株幼苗。
【发明内容】
[0005]为解决上述【背景技术】中存在的组培繁殖速率低的问题，本发明提供了一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基，培养基成分为:基础培养基和低剂量的2，4-D ;所述基础培养基成分为:MS20g、卡拉胶lg、6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)0.lmg、KT (氯吡脲)0.5mgo，所述2，4-D为2，4- 二氯苯氧乙酸，含量范围是0.1-0.25mg/L。
[0006]—种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基组培方法是通过如下步骤实现的:
[0007](I)外植体的选择和消毒
[0008]取生长发育很好的待组培的植株的叶片(或侧芽)，进行消毒，切成I X Icm2大小，背面划伤的叶片，待接种。
[0009](2)接种及无菌系的建立
[0010]用无菌摄子将切好的叶片接种到无菌培养基上(侧芽直接斜插入，顶端向上)，叶片平放在培养基面上，划过伤口的那侧向下接触培养基，1-2周后外置体迅速膨大，部分边缘分化出小苗，获得无菌系。
[0011](3)转接与扩繁
[0012]将获得的无菌系，切成小段，接种在本发明的增殖培养基上，进行增殖培养，2-3周后，将大的植株单个切下，放入壮苗培养基或生根培养基上，继续培养2-3周，可将植株取出，洗出培养基，放入阴凉处晾干1-2天，移栽到培养土中，即可获得十二卷类植株幼苗。
[0013]所述步骤(I)中的消毒方法为:将选好的叶片或侧芽用清水中冲洗，再放入质量含量约为5%的多菌灵溶液中浸泡10-15分钟，再用清水冲洗干净；在超净工作台上放入无菌瓶中用1%生汞处理3-5分钟(根据幼嫩程度和污染程度决定浸泡时间长短)，倒出生汞，用冷却的无菌水冲洗3-6次。叶片(或侧芽)切割过程需放到无菌培养皿上，并采用无菌刀片。
[0014]所述步骤(2)中无菌培养基置于无菌培养基瓶中，其成分为:MS20g、卡拉胶lg、6-BA0.lmg、KT0.5mg中无菌系建立的培养条件是:将接种好的无菌培养基瓶抒紧，放于光照培养箱中进行培养，控制培养箱的温度为25摄氏度，光照时间为16小时/天。
[0015]所述步骤(3)中的增殖培养过程可重复操作，即可将增殖出的组织或植株作为无菌系接种于本发明的增殖培养基上，能够在短期内获得大量的十二卷类幼苗。
[0016]与现有技术相比，本发明的优点在于:
[0017]1、在多肉植物组培繁殖过程中，首次在培养基中添加了低剂量的2，4-D，在增殖培养阶段，同时会产生大量的芽和愈伤组织，增繁量为不添加2，4_D的培养基时的1.5-2.5倍，为以后愈伤组织的扩繁和芽的分化提供了大量的基础材料；
[0018]2、本发明能够显著增加十二卷属多肉植物的繁殖速度，为降低整个组培成本，提高产品上市速度，奠定了坚实的基础。
【具体实施方式】
[0019]实施例1:
[0020]1.外植体的选择和消毒:
[0021]取生长发育良好的待组培植株的叶片用清水中冲洗，再放入质量含量约为5%的多菌灵溶液中浸泡10-15分钟，再用清水冲洗干净。
[0022]在超净工作台上放入无菌瓶中倒I %氯化汞溶液处理3-5分钟(根据幼嫩程度和污染程度决定浸泡时间长短)，倒出氯化汞溶液，用冷却的无菌水冲洗3-6次，放到无菌培养皿，用无菌刀片切成I X Icm2大小的叶片，并将叶片背面划伤，待接种。
[0023]2.接种及无菌系的建立:
[0024]用无菌摄子将切好的叶片，平放在无菌培养基面上，划过伤口的那侧向下接触培养基，拧紧无菌培养基瓶口，做好记号，放入光照培养箱培养，调节温度为25摄氏度，光照时间为16小时/天，培养1-2周，外植体迅速膨大，产生愈伤组织，并在部分边缘分化出幼苗。
[0025]3.转接与扩繁:
[0026]将分化的外植体取出，切成小段，接种在本发明的专用培养基上，其中2，4-D含量为0.lmg/L，继续培养2-3周后，能够获得大量的愈伤组织和无菌丛生芽，增殖量为不添加2，4-D的培养基的1.7倍。重复以上过程，愈伤组织及丛生芽数量迅速增加。此时选取大的芽体单个切下，放入壮苗培养基或生根培养基上，培养2-3周后，将植株取出，洗去培养基，放入阴凉处晾干1-2天，即可移栽到培养土中，获得十二卷属多肉植物幼苗。
[0027]实施例2
[0028]1.外植体的选择和消毒:
[0029]取生长发育良好的待组培植株的叶片用清水中冲洗，再放入质量含量约为5%的多菌灵溶液中浸泡10-15分钟，再用清水冲洗干净。
[0030]在超净工作台上放入无菌瓶中倒I %氯化汞溶液处理3-5分钟(根据幼嫩程度和污染程度决定浸泡时间长短)，倒出氯化汞溶液，用冷却的无菌水冲洗3-6次，放到无菌培养皿，用无菌刀片切成I X Icm2大小的叶片，并将叶片背面划伤，待接种。
[0031]2.接种及无菌系的建立:
[0032]用无菌摄子将切好的叶片，平放在无菌培养基面上，划过伤口的那侧向下接触培养基，拧紧无菌培养基瓶口，做好记号，放入光照培养箱培养，调节温度为25摄氏度，光照时间为16小时/天，培养1-2周，外植体迅速膨大，产生愈伤组织，并在部分边缘分化出幼苗。
[0033]3.转接与扩繁:
[0034]将分化的外植体取出，切成小段，接种在本发明的专用培养基上，其中2，4-D含量为0.15mg/L，继续培养2-3周后，能够获得大量的愈伤组织和无菌丛生芽，增殖量为不含有2，4-0的1.9倍。重复以上过程，丛生芽数量迅速增加。此时选取大的芽体单个切下，放入壮苗培养基或生根培养基上，培养2-3周后，将植株取出，洗去培养基，放入阴凉处晾干1-2天，即可移栽到培养土中，获得十二卷属多肉植物幼苗。
[0035]实施例3
[0036]1.外植体的选择和消毒:
[0037]取生长发育良好的待组培植株的叶片用清水中冲洗，再放入质量含量约为5%的多菌灵溶液中浸泡10-15分钟，再用清水冲洗干净。
[0038]在超净工作台上放入无菌瓶中倒I %氯化汞溶液处理3-5分钟(根据幼嫩程度和污染程度决定浸泡时间长短)，倒出氯化汞溶液，用冷却的无菌水冲洗3-6次，放到无菌培养皿，用无菌刀片切成I X Icm2大小的叶片，并将叶片背面划伤，待接种。