一种非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，具体涉及一种能够在短时间内 扩繁出大量优良非洲菊脱毒种苗的扩繁方法，属于花卉种植技术领域。
【背景技术】
[0002] 非洲菊（CferAeraJawesofliiBolus)别名扶郎花、太阳花，为菊科多年生草本植 物，原产于南非德瓦士兰地区，后引入英国，现在世界各地广泛栽培。非洲菊性喜冬季温暖， 夏季凉爽的气候，花朵大、清秀挺拔、飘洒俊逸、花色艳而不妖、丽若云霞、娇媚高雅、爽心悦 目，给人以潇洒柔和、恬淡宁静之感。非洲菊常用来切花插瓶，若配以肾藏、文竹等绿色观 叶植物，更令人神往心醉，非洲菊也很适宜用作盆栽观赏，是点缀案头、橱窗、装饰客厅的佳 品，观赏价值较高，在设施条件下能四季供花，现已跻身世界市场畅销切花之列，是国内外 名贵的鲜花品种，是世界著名的五大切花之一，以其独特的魅力风靡全球。
[0003] 随着人们生活水平的提高，我国无论对非洲菊鲜切花，还是非洲菊优良品种种苗 的需求日益增加。据统计，我国自上世纪90年代以来曾大量从荷兰引种栽培以来，全国非 洲菊种植规模从2006年的3. 27万亩增加到2015年的10. 1万亩，非洲菊已成为国内很多 地区发展花卉产业的"入门"产品。然而，我国对非洲菊优良品种选育工作比较滞后，具有 自主知识产权的优良品种极少，品质高的良种非洲菊品种的研发为国外垄断技术，国内花 卉公司的非洲菊良种原生种的种子和种苗几乎全部从国外引进，成本非常高。同时，由于气 候条件、栽培技术的限制，普遍出现品质退化现象，优良种性严重退化甚至丧失，失去了栽 培利用价值，不得不从生产中逐步淘汰。
[0004] 非洲菊为异花传粉植物，自交不孕，其种子后代必然会发生变异，变异类型普遍表 现为花梗变细，变软，花形变小，切花价值大大降低。非洲菊种子寿命极短，发芽率低，其发 芽率几乎不到30%，而且，采用种子繁殖，营养生长期长，开花迟。非洲菊常用分株繁殖，但 每株每年仅可分出5-6个新株，无法满足产业化生产的要求，并且一直用分株繁殖，容易使 病毒逐代积累，从而造成非洲菊品种退化严重。除了分株繁殖，造成非洲菊品种退化的原因 还包括：栽培环境如光照、水分、温度、营养不适宜非洲菊生长发育，土壤板结和盐渍化；连 作土地的病原菌大量积累并复合浸染等，导致品种失去原有的典型性；在非洲菊组织培养 过程中，培养温度、增殖芽的继代代数以及激素浓度等因素都可能造成非洲菊种苗发生无 性变异。非洲菊品种退化通常表现为花朵变小、过渡色多、花型紊乱、双杆现象、株高参差不 齐、生活力下降、抗性和产量降低等。
[0005] 组织培养技术是目前非洲菊商品化生产的主要繁殖方式，既可在短期内生产优良 种苗，也可用于生产脱毒苗，防止种质退化。20世纪70年代后，国内外相继展开了对非洲 菊组织培养和快速繁殖的研究，非洲菊采用离体培养方法进行快繁，短期内就可得到大量 整齐的种苗。然而，目前非洲菊脱毒之后的快繁方法存在诱导率较低、诱导苗质量差且多弱 苗、幼苗增殖效率低、苗移栽成活率低等问题，严重制约了非洲菊种苗工厂化、规模化生产。 因此，建立健全简单经济的非洲菊脱毒种苗扩繁技术，对促进非洲菊脱毒种苗工厂化、规模 化生产，对非洲菊优良品种的推广具有广阔的市场前景。
【发明内容】
[0006] 为解决目前非洲菊脱毒苗扩繁方法存在的诱导率较低、诱导苗质量差且多弱苗、 幼苗增殖效率低、苗移栽成活率低等问题，本发明提供了一种非洲菊脱毒种苗的高效扩繁 方法，通过建立健全了培养程序、培养条件和培养组分的配比，提高了诱导苗的质量和增殖 效率、移栽成活率，从而建立了高品质和高数量快繁体系。
[0007] 本发明的目的是通过以下技术方案解决的： 一种非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：该方法步骤如下： 1) 非洲菊脱毒苗前处理：将非洲菊脱毒苗清洗干净并表面消毒，在无菌条件下切取叶 柄和花托，移入装有配制好的不定芽诱导培养基广口瓶中； 2) 不定芽的诱导：将接种有脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过 的培养室中光培养，诱导出不定芽； 3) 切割不定芽继代增殖：在无菌条件下将不定芽切下，移入装有增殖培养基的广口瓶 中培养，得到大量非洲菊幼苗； 4) 炼苗：逐步采用增强培养光照、降低培养温度的方法进行炼苗； 5) 水培生根处理：将炼苗后的脱毒试管苗从广口瓶中取出，保留原有根系，再将组培苗 栽于水培盘中的栽培板上，水培盘中加入生根营养液； 6) 水培壮苗：生根培养7天后，倒掉生根营养液，加入壮苗营养液； 7) 移栽：将脱毒苗移栽到消过毒的基质上，置于室外自然光下生长。
[0008] 该方法的详细步骤如下： 1) 非洲菊脱毒苗前处理： 将非洲菊脱毒苗先用自来水反复冲洗，用毛刷蘸取洗洁精洗一遍后接着用超纯水冲 洗干净，用70%酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗两次，0. 1%升汞内加数滴吐温20溶液浸泡 5min，用无菌水冲洗4-5次，滤纸吸干，将非洲菊脱毒苗的叶柄和花托移入装有不定芽诱导 培养基的广口瓶中； 2) 不定芽的诱导： 为防非洲菊脱毒苗在生产过程中被病毒再浸染，培养室先经过消毒，消毒剂选用40% 甲醛10ml/m3、高锰酸钾5g/m3,对整个培养室进行熏蒸2小时，熏蒸后，再采用75%乙醇擦拭 培养架进行表面消毒，然后将接种有非洲菊脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于 消毒处理过的培养室中光培养，培养室温度控制为26土 1°C，以荧光灯为光源，光照强度控 制为1600-2000LX，光周期控制为光14h/暗10h，25-30天诱导出不定芽； 3) 切割不定芽继代增殖： 在无菌条件下将诱导2-3cm的不定芽从外植体上完整的切下，转接到装有增殖培养基 的广口瓶中，培养室温度控制为24± 1°C、光照强度控制为1600-2000LX、光周期控制为光 12h/暗12h下培养，培养15-25天后可得到大量非洲菊幼苗； 4) 炼苗： 筛选5-8cm的非洲菊脱毒试管苗，转移到光照强度为2500-35001x的条件下，3-5天后， 将培养温度降低为20-22 °C，再过3-5天，打开广口瓶封口，继续炼苗3-5天； 5) 水培生根处理： 为减少转接对脱毒试管苗根系带来的伤害，转接前向广口瓶内加入少量水，并用镊子 轻轻搅动培养基，以免把苗子倒出时损伤根，试管苗倒出后洗净根上的培养基，移栽到装有 生根培养液的水培盘中的栽培板上，栽培密度1000-1200苗/m2,株距2-3cm，行距2-3cm， 水培器皿用盆底长X宽=44X32cm，盆高=15cm的塑料盆作为栽培盆，每盆放2L营养液， 并有定植孔间距为2cm-3cm的栽培板漂浮在营养液上，将脱毒苗上方搭上一层透明的塑料 薄膜，使其处于温度22-25°C、湿度多90%、光照强度为2000-30001x的清洁的温室内环境生 长； 6) 水培壮苗： 生根培养7天后，脱毒苗根系基本发育完全，此时，撤掉塑料薄膜，倒掉生根营养液，给 幼苗浇施壮苗营养液； 7) 移栽： 当非洲菊脱毒苗长到12-15cm时，移栽到消过毒的基质上，移栽密度为行距15cm、株距 10cm，塑料薄膜覆盖保湿，10-15天后逐步除去薄膜，置于室外自然光下生长。
[0009] 非洲菊品种选为阳光海岸或玲珑。
[0010] 步骤1)和2 )中的不定芽诱导培养基的配方为：MS+0.lmg/L2,4-D+O.2mg/L NAA+0. 3mg/LIBA+0. 3g/LCH+3% 蔗糖 +6.Og/L琼脂，pH为 5. 8。
[0011]步骤3)中的增殖培养基配方为：MS+3. 0mg/L6-BA+0. 5mg/LNAA+0. 5mg/ LGA+2. 5mg/L 氯化胆碱+4%鹿糖+6. Og/L琼脂，pH为5. 8。
[0012]步骤5)和 6)中的生根培养液配方为：500mg/LKN03, 500mg/LNH4N03,92. 5mg/L MgS04 ? 7H20,173mg/LCa(N03)2 ? 4H20,150mg/LKH2P04, 32mg/LKC1，17mg/LMnS04 ? 7H20， 19mg/LNa2-EDTA，14mg/LFeS04 ? 7H20,2. 2mg/LMnS04 ? 4H20,0. 8mg/LZnS04 ? 7H20,0. 8mg/ LH3B03,0? 4mg/LKI，50mg/L肌醇，lmg/L甘氨酸，0?OSmg/LVBi，0? 05mg/LVB6,混合制成生根 营养液。
[0013] 步骤5 )和6 )中的生根培养液的另一种可选配方为：950mg/LKN03，825mg/L NH4N03,85mg/LKH2P04,2 20mg/LCaCl2 ? 2H20,185mg/LMgS04 ? 7H20,19mg/LNa2-EDTA，14mg/ LFeS04 ? 7H20,1lmg/LMnS04 ? 4H20, 0. 4mg/LKI, 3.lmg/LH3B03,4. 3mg/LZnS04 ? 7H20, 0.125mg/LNa2Mo04,0 . 0 1 25mg/LCuS04,0 . 0 1 25mg/LCoCl2.6H20,50mg/L肌醇，lmg/L甘氨 酸，0?OSmg/LVBi，0? 05mg/LVB6，混合制成生根营养液。
[0014] 步骤 6)中的壮苗营养液配方为：850mg/LKN03, 750mg/LNH4N03,165mg/L MgS04 ? 7H20,75mg/LKH2P04,200mg/LCaCl2 ? 2H20,20mg/LNa2-EDTA，15mg/LFeS04 ? 7H20， 10. 5mg/LMnS04 ? 4H20,4. 25mg/LZnS04 ? 7H20,3.Omg