细胞治疗涵盖使试剂接触细胞，W及使试剂接触流体，其中所述流体与细胞接触。 "施用"还涵盖通过试剂、诊断剂、结合组合物或通过另一个细胞进行的例如细胞体外和离 体治疗。"一起施用"并非意指将两种或更多种试剂作为单一组合物施用。虽然本发明涵盖 W单一组合物形式的施用，但此类试剂可作为单独的施用同时或在不同时间，且可通过相 同或不同施用途经递送给单一受试者。
[0041] 当其设及配体和受体时，"激动剂"包括刺激所述受体的分子、分子组合、复合体或 试剂组合。例如，粒细胞巨隧细胞集落刺激因子（GM-CS巧的激动剂可涵盖GM-CSF、GM-CSF 的突变蛋白质或衍生物、GM-CSF的肤模拟物、模拟GM-CSF的生物功能的小分子或刺激 GM-CSF受体的抗体。
[004引当其设及配体和受体时，"括抗剂"包括抑制、抵消、下调受体和/或使受体脱敏 的分子、分子组合或复合体。"括抗剂"涵盖抑制受体的固有活性的试剂。固有活性是在不 存在配体/受体相互作用下展现的活性。"括抗剂"还涵盖抑制或防止受体的受刺激（或 受调控）活性的任何试剂。举例来说，GM-CSF受体的括抗剂包括但不限制于，结合至配体 (GM-CS巧并防止其结合至受体的抗体，或结合至受体并防止配体结合至受体的抗体，或其 中抗体按非活性构象锁定受体的抗体。
[0043] 就本发明CDN而言的"大体上纯化的"意指指定物质占存在于组合物中的CDN活 性的至少50重量％，更常见占至少60重量％，通常占至少70重量％，更通常占至少75重 量％，最通常占至少80重量％，通常占至少85重量％，更通常占至少90重量％，最通常占 至少95重量％且习惯上占至少98重量％重量或更大。水、缓冲剂、盐、去污剂、还原剂、蛋 白酶抑制剂、稳定剂（包括诸如白蛋白的添加蛋白）和赋形剂一般不用于纯度测定。
[0044] 当指代配体/受体、核酸/互补核酸、抗体/抗原或其它结合对（例如细胞因子对 细胞因子受体）（在本文中各自一般称为"标祀生物分子"或"标祀"）时，"特异性"或"选 择性"结合指示与标祀存在于异质蛋白群体和其它生物制剂中有关的结合反应。特异性 结合可意指例如按所涵盖方法来源于抗体的抗原结合部位的结合化合物、核酸配体、抗体 或结合组合物W相比于非标祀分子亲和力大通常至少25%，更通常至少50%，最通常至少 100 % (2倍），正常至少10倍，更正常至少20倍且最正常至少100倍的亲和力结合至其标 祀。
[0045]"配体"是指结合至标祀生物分子的小分子、核酸、肤、多肤、糖、多糖、聚糖、糖蛋 白、糖脂或其组合。虽然运些配体可W是受体的激动剂或括抗剂，但配体还涵盖即不是激动 剂也不是括抗剂且不具有激动剂或括抗剂性质的结合剂。配体对其同源标祀的特异性结合 通常用"亲和力"表达。在优选实施方案中，本发明配体W介于约IO4Mi与约10% 1之间的 亲和力结合。亲和力被计算为Kd=kwf/k。。(kwf是解离速率常数，K。。是结合速率常数且Kd 是平衡常数）。
[0046] 可在平衡时通过测量各种浓度（C)的标记配体的结合比例（r)确定亲和力。利 用斯卡查德方程（Scatchardequation) :;r/c=K(n-;r)对数据作图：其中r=平衡时结 合配体摩尔数/受体摩尔数；C=平衡时的游离配体浓度；K=平衡结合常数；且n=毎个 受体分子的配体结合位点数。通过图形分析，在Y轴上对r/c作图对比在X轴上作图r， 从而产生斯卡查德图。本领域熟知通过斯卡查德分析的亲和力测量。参见例如vanErp 等人，J.Immunoassay12:425-43, 1991;Nelson和Griswold,Comput.MethodsPrograms Biomed. 27:65-8, 1988。在替代方案中，可通过等溫滴定量热法（ITC)测量亲和力。在常见 ITC实验中，将配体溶液滴定至其同源标祀的溶液中。随着时间监测它们相互作用时释放 的热（ah)。随着将连续量的配体滴定至ITC细胞，所吸收或释放的热量与结合量成正比。 当系统达到饱和时，热信号减小直至仅观察到稀释热。随后从来自每次注射的热相对于细 胞中配体与结合伴侣的比的图获得结合曲线。利用适当结合模型分析结合曲线W确定咕、 n和AHo注意Kb= 1/Kd。
[0047] 如本文所使用的术语"受试者"是指人或非人生物体。因此，本文描述的方法和组 合物适用于人和兽医学疾病。在某些实施方案中，受试者是"患者"，即针对疾病或疾患接受 医疗护理的活人。运包括正针对病理学迹象接受调查的无明确病态的人。优选是现已诊断 出患有本发明组合物和方法所祀向的特定癌症的受试者。用本文所描述组合物治疗的优选 癌症包括，但不限制于前列腺癌、肾癌、黑素瘤、膜腺癌、宫颈癌、卵巢癌、结肠癌、头颈癌、肺 癌和乳腺癌。
[0048]"治疗有效量"被定义为足W展现患者益处，即减轻、防止或改善正治疗疾患的症 状的试剂或药物组合物的量。当试剂或药物组合物包含诊断剂时，"诊断有效量"被定义为 足W产生信号、图像或其它诊断参数的量。药学制剂的有效量将根据各种因素变化，如个体 的易感程度、个体的年龄、性别和体重及个体的特异质反应。"有效量"涵盖，但不限制于，可 改善、逆转、缓和、防止或诊断医学疾患或病症的症状或迹象或其致病过程的量。除非另外 明确或随文说明，否则"有效量"不限制于足W改善疾患的最小量。
[0049]"治疗"（针对疾患或疾病）是获得有益或所需结果，包括且优选临床结果的方法。 出于本发明的目的，关于疾病的有益或所需结果包括，但不限制于，W下一种或多种：防止 疾病、改善与疾病相关的疾患、治愈疾病、缓解疾病的严重程度、延迟疾病恶化、减轻与疾病 相关的一个或多个症状、提高罹患疾病个体的生活质量且/或延长存活。类似地，出于本发 明的目的，关于疾患的有益或所需结果包括，但不限制于，W下一种或多种：防止疾患、改善 疾患、治愈疾患、缓解疾患的严重程度、延迟疾患恶化、减轻与疾患相关的一个或多个症状、 提高罹患疾患个体的生活质量且/或延长存活。例如，在将本文描述的组合物用于治疗癌 症的实施方案中，有益或所需结果包括，但不限制于，W下一种或多种：减小（或破坏）瘤 细胞或癌细胞增殖、减小癌症中存在的瘤细胞的转移、缩小肿瘤尺寸、减轻由癌症导致的症 状、提高罹患癌症个体的生活质量、减小治疗疾病所需的其它药物的剂量、延迟癌症恶化且 /或延长癌症患者的存活。根据本文，受试者的"治疗"可意指受试者需要治疗，例如，在受 试者包含预期通过施用试剂减轻的病症的情况中。
[0050] 如本文所使用，术语"抗体"是指由一个或多个免疫球蛋白基因或其片段衍 生、模制或大体编码的能够特异性结合抗原或表位的肤或多肤。参见例如化ndamental Immunology,第 3 版，W.E.Paul编辑，RavenPress,N.Y. (1993) ;Wilson(1994;J.Immunol. Methods175:267-273 ;Ya;rmush(1992)J.Biochem.Biophys.Methods25:85-97。术语抗体 包括抗原结合部分，即保留结合抗原的能力的"抗原结合部位"（例如片段、子序列、互补性 决定区仰R))，包括（i)F油片段，由VL、VH、化和CHl结构域组成的单价片段；（ii)F(油'）2 片段，包含通过在较链区的二硫桥连接的两个F油片段的二价片段；（iii)由VH和CHl结 构域组成的Fd片段；（iv)由抗体的单臂的化和VH结构域组成的Fv片段，（V)由VH结构 域组成的dAb片段（Ward等人，（1989)化化re341:544-546);和（Vi)单独的互补性决定区 (CDR)。单链抗体还通过引用并入术语"抗体"中。
[0051] 环嚷吟二核巧酸
[0052] 原核细胞W及真核细胞将各种小分子用于细胞信号传导和细胞内及细胞间通信。 已知环核巧酸，如cGMP、CAMP等在原核细胞和真核细胞中具有调节和引发活性。与真核细 胞不同，原核细胞还将环嚷岭二核巧酸用作调节分子。在原核细胞中，两个GTP分子的缩合 是通过酶二鸟巧酸环化酶值GC)催化W得到c-diGMP，其代表细菌中的重要调节剂。
[0053] 最近研究表明环diGMP或其类似物还可通过在哺乳动物中用作佐剂而刺激或增 强患者的免疫或炎性反应或可增强对疫苗的免疫反应。病原体衍生的DNA的细胞溶质检测 要求通过TANK结合激酶1灯服1)和其下游转录因子IFN-调节因子3 (IRF3)进行信号传 导。被称为STINGQFN基因刺激蛋白；还称为MITA、ERIS、MPYS和TMEM173)的跨膜蛋白用 作运些环嚷岭二核巧酸的信号传导受体，从而导致TBK1-IRF3信号传导轴的刺激和STING 依赖性I型干扰素反应。参见例如图1。Burdette等人在化化re478:515-18, 2011中证 实STING直接结合至环二鸟巧酸单憐酸，但不结合至其它不相关核巧酸或核酸。
[0054]用作获得本发明CDN的前体的环嚷岭二核巧酸详细描述于例如Gao等人， Cell(2013) 153:doi:10. 1016/j.cell. 2013. 04. 046 ;美国专利第 7,709458 号和第 7, 592, 326 号；W02007/054279 ;和Yan等人，Bioorg.Med.ChemLett. 18:5631 (2008)，运些 文献中的每个在此是W引用的方式并入。可利用标准有机化学技术修饰运些CDNW产生本 发明的CDN。
[00巧]优选的嚷岭包括，但不限制于，腺嚷岭、鸟嚷岭、肌巧、次黄嚷岭、黄嚷岭、异鸟嚷岭 等。本发明的CDN优选是硫逐憐酸醋类似物，且最优选是其大体上纯的Sp,Sp、化，化、Sp化， 或化,Sp立体异构体。
[0056] 如结构中所指示，每个核糖包含可被取代的2'或3'径基。如下文所描述，本发明 的CDN可包含在运些2'或3'径基中一个或两个（不作为环键的一部分）处的取代，其提供 不作为前药离去基团去除的嵌段部分。运种取代包括，但不限制于，0-甲基、0-乙基、0-丙 基、0-异丙基、0-苄基、0-甲氧基乙基、0-氨基乙基、0-烘丙基、0-締丙基等。运个列表不 意在加W限制。如本文所使用，术语"前药"是指所涵盖化合物的修饰，其中修饰的化合物 呈现较低药理学活性（相比于修饰的化合物）且其中修饰的化合物在体内通过酶促或非酶 促反应逆转化（例如，在标祀细胞或标祀器官中）为未修改形式。在某些实施方案中，在一 个核糖上的径基包含前药离去基团。前药可修改药物的理化、生物药学和药物代谢动力学 性质。传统前药被归类为通过在体内发生转变W形成活性药物的药物。前药开发的原因一 般是与母体药物相关的不良水溶性、化学不稳定、低经口生物利用率、缺少血脑屏障穿透性 和高首过代谢。合适前药部分描述于例如"Pro化UgandTargetedDelive巧"，J.Rautico 编，JohnWiley&Sons, 2011 中。
[0057] 优选环嚷岭二核巧酸是硫逐憐酸醋类似物，本文称为"硫代憐酸醋"。硫逐憐酸醋 是正常核巧酸的变体，其中非桥接氧中的一个被硫替换。核巧酸间键结的硫化显著地减小 内切酶和外切酶，包括5'至3'和3'至5'DNAP化1外切酶、核酸酶Sl和PU核糖核酸酶、 血清核酸酶和蛇毒憐酸二醋酶的作用。此外，脂质二重层交联的潜力增大。
[005引固有手性的硫逐憐酸醋键。技术人员将明白运个结构的憐酸醋可各自WR或S形 式存在。因此，可能存在化，化、Sp,Sp、Sp,化和化，Sp形式。
[0059] 如上所述，本发明的环嚷岭二核巧酸包含CDN的2' -0-和3' -0-取代形式，和具 体来说CDN硫代憐酸醋。可通过对核糖部分的2' -OH的取代提供额外稳定性和生物利用 率。本文中适用的取代基包括但不限制于面素、径基、烷基、締基、烘基、酷基（-C(O)RJ、簇 基（-C(O)O-R。。)、脂族基团、脂环族基团、烷氧基、取代的氧基（-0-R。。)、芳基、芳烷基、杂环 基、杂芳基、杂芳基烷基、氨基（-WRJ化。)）、亚氨基（=NRJ、酷氨基（-C(O)N(RJ(RCc) 或-^1?化)"〇)1〇、叠氮基州3)、硝基州〇2)、氯基（-〇脚、脈基（。日计日1111(1〇)(-〇"0)^尺化） (RJ或-NOUC(O)ORaa)、脈基（ureido)(-NOUC(O)-N她bHRcc))、硫脈基（-N(Rbb)C(S) N(RJ(RJ)、脈基（-N(RJC( =NRJNOUOU)、脉基（-C( =NRJN(RJ(Rcc)或-NOU C( =NRJ(RJ)、琉基（-SRJ、亚横酷基（-S(0)RJ、横酷基（-S(0) 2?)和横酷胺基 (-S做2N^b)化Ce)或-N^b)S(0) 2RJ。其中每个R。。、Rbb和RCC独立地是H、任选连接的化 学官能基或其它