一种黑曲霉微丸的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，特别设及黑曲霉（Aspergillusnigerxj)微丸及其制 备方法。
【背景技术】
[0002] 黑曲霉，半知菌亚口，丝抱纲，丝抱目，丛梗抱科，曲霉属真菌中的一个常见种。广 泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和±壤中。是重要的发酵工业菌种，可生产淀粉酶、 酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、巧樣酸、葡糖酸和没食子酸等。本申请是利 用黑曲霉在生长过程中所产生的次生代谢产物来对白絹病菌、软腐病菌进行抑制。白絹病 又称菌核性根腐病和菌核性苗枯病，危害苗木和幼树的根茎部。该病可危害多种植物，主要 为害油茶、油桐、揪树、相枯、苹果、梧桐、泡桐、核桃、马尾松等多种树种，还可引起花生，大 葱等许多农作物发病。软腐病可使植物的组织或器官发生腐烂。病菌均为弱寄生菌，主要为 害植物的多汁肥厚的器官，如块根、块茎、果实、茎基等。发病不限于田间，运输途中和胆藏 期间也有发生，且为害更重。为害的作物种类甚多。本发明主要针对魔芋白絹病、软腐病。
[0003] 黑曲霉发酵液虽然有良好的抗菌活性，但因其液体的性质不宜大量储存与运输， 长期储存时如保藏不当更会被杂菌污染，对生防效果及植物生长产生未知的危害，因此我 们对黑曲霉发酵液产品进行了进一步的加工和优化。
[0004] 根据魔芋生长及大田生防的具体情况，将黑曲霉发酵液加工成生防微丸缓释剂。 微丸缓释剂，W缓控释理论为基础，应用现代药用新辅料、制备技术和设备制备直径在 0. 5-1. 5mm范围内的球形或类球形制剂，发挥平稳、持久、安全有效的作用。微丸直接施用后 既能满足首剂量要求的抑菌浓度，亦能产生维持剂量的抑菌浓度，且抑菌浓度曲线平稳，有 重演性，缓释时间长达72h。根据白絹菌、软腐病生长繁殖的特点，在雨后高热高湿的环境中 能稳定释放，有效抑制病原菌的增殖，在人力物力有限的情况下能最大限度的防止魔芋白 絹病、软腐病的发生。采用30%黑曲霉发酵产物微丸缓释剂在有效剂量1. 3g/m3下对白絹 病菌、软腐病菌的平均防效分别在77. 52%、95. 92%，具有较强的抑制作用。本发明人目的 在于提供一种易于生产、剂型加工，又利于存活的括抗菌制剂，将其用于魔芋白絹病，软腐 病防治。
[0005] 所述括抗菌为黑曲霉（Aspergillusnigerxj)由贵州大学真菌资源研究所分离， 已经于2006年3月7日保藏于中国典型培养物保藏中屯、，（地址：中国武汉武汉大学），保 藏号：CCTCCNO:M206021
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是解决稳定性和药效最优化，并且实现黑曲霉的可控 制释放。
[0007] 本发明提供了一种稳定的黑曲霉微丸。
[0008] 本发明还提供了所述黑曲霉微丸的生产方法。
[0009] 本发明还提供了所述黑曲霉微丸的使用方法。
[0010] 本发明还提供了所述黑曲霉微丸可用于防治白絹病，软腐病。
[0011] 为了实现上述目的，本发明提供了一种括抗菌，所述括抗菌为黑曲霉 (AspergillusnigerXj)由贵州大学真菌资源研究所分离，已经于2006年3月7日保藏于 中国典型培养物保藏中屯、，（地址：中国武汉武汉大学），保藏号：CCTCCN0 :M206021。
[0012] 为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案：
[0013] 一种黑曲霉微丸，其包括下述组分：黑曲霉、微晶纤维素、乳糖、径丙基甲基纤维 素。
[0014] 优选地，黑曲霉为黑曲霉发酵浓缩液粗提物粉剂。
[0015] 优选地，黑曲霉发酵浓缩液粗提物粉剂10~40重量份、微晶纤维素10~45重量 份、乳糖15~50重量份和径丙基甲基纤维素1~10重量份。
[0016] 优选地，黑曲霉发酵浓缩液粗提物粉剂30重量份、微晶纤维素32重量份、乳糖35 重量份和径丙基甲基纤维素3重量份。
[0017] 其中，黑曲霉发酵浓缩液粗提物粉剂是通过下述方法制备得到：
[001引A.取灭菌发酵液过滤，在25°C浓缩至相对密度为1. 12,喷雾干燥，干燥条件为进 风溫度150°C;排气溫度95°C;流速20血/s;
[0019] 或
[0020] B.取灭菌发酵液过滤，在25°C浓缩至相对密度为1. 12,置70°C烘箱中，鼓风干燥 36h，取出后使用高速粉碎机粉碎，过100目筛既得。
[0021] 所述的微丸可用于防治魔芋白絹病和软腐病。
[0022] 当防治防治魔芋白絹病时：将黑曲霉微丸菌剂与基质按1 : 80~120混匀，种植 时将菌剂灌根，之后每隔30天灌根一次，待魔芋收获后，应在大田大面积喷洒3-5次。
[0023] 当防治防治魔芋软腐病时：将黑曲霉微丸菌剂与基质按1 : 400~600混匀，种植 时将菌剂灌根，之后每隔30天灌根一次。 实施例
[0024] 本发明根据下述实施例做进一步的描述，本领域技术人员可W明了的是，下述实 施例对本发明仅仅起到说明的作用。在不背离本发明精神的前提下，对本发明所做的任意 改进和替代均在本发明保护的范围之内。
[00巧]使用的仪器和试药：球型微丸造粒机，华东理工大学机械工业研究院；标准检验 筛，浙江省上虞县纱筛厂；CJY-300脆碎度测定仪，上海黄海药检仪器厂）。微晶纤维素 (MCC)，常熟药用辅料厂；乳糖，北京奥博星生物技术责任有限公司；径丙基甲基纤维素 化PMCK4M)，山东泰安瑞泰纤维素有限公司；95%乙醇，沈阳试剂一厂；所述括抗菌为黑曲 霉（Aspergillusnigerxj)由贵州大学真菌资源研究所提供，其发酵液按照现有技术中方 法进行制备。
[002引实施例1 :缓释微丸的制备
[0027] 黑曲霉发酵浓缩液粗提物粉剂制备：
[0028] A.取灭菌发酵液过滤，浓缩至相对密度为1. 12 (25°C)，喷雾干燥，干燥条件为：进 风溫度150°C;排气溫度95°C;流速20血/s。
[0029] 利用喷雾干燥及在进风溫度150°C;排气溫度95°C;流速20血/s下对黑曲霉发酵 液进行浓缩干燥加工，采用空气经过滤和加热，进入干燥器顶部空气分配器，热空气呈螺旋 状均匀地进入干燥室。料液经塔体顶部的高速离屯、雾化器，（旋转）喷雾成极细微的雾状 液珠，与热空气并流接触在极短的时间内可干燥为成品。产品具有良好的均匀度、流动性和 溶解性，产品纯度高，质量好。生产过程简化，操作控制方便。对于含湿量40-60% (特殊物 料可达90% )的液体能一次干燥成粉粒产品，干燥后不需粉碎和筛选，减少生产工序，提高 产品纯度。对产品粒径，松密度，水份，在一定范围内可通过改变操作条件进行调整，控制和 管理都很方便。
[0030] 或
[0031] B.取灭菌发酵液过滤，浓缩至相对密度为1. 12(25°C)，置70°C烘箱中，鼓风干燥 36h，取出后使用高速粉碎机粉碎，过100目筛既得。
[0032] 发酵液高溫鼓风干燥技术：利用鼓风烘箱在烘箱溫度70°C，鼓风干燥时间36h，对 黑曲霉发酵液进行浓缩干燥加工。高溫鼓风干燥箱的采用进口多个大功率风机，双风道式 热循环系统，将不诱钢高溫电加热器通过风循环，快速加热工作室内，使产品迅速干燥，取 出后使用高速粉碎机粉碎，过100目筛既得。
[003引微丸制备：
[0034] 黑曲霉微丸由下列组分按重量百分比组成：
[0035] 黑曲霉发酵浓缩液粗提物粉剂质量 30重量份；
[0036] 乳糖 30重量份； MCC 30重量份； 怒丙基甲基纤维素(HPMCK4M) 10重量份；
[0037] 过筛混匀用适量的质量分数为30%的50mL乙醇水溶液作为黏合剂制粒得到湿度 适中的湿物料，干燥即得。
[003引实施例2 :缓释微丸的制备
[0039] 按照实施例1相同的方法进行制备，不同之处在于采用下述重量份的组分：
[0040] 黑曲霉发酵浓缩液粗提物粉剂质量 30重量份； 乳糖 35重量份； MCC 32重量份；