北美红杉离体生根培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种北美红杉离体生根培养方法，属于杉木培养繁殖技术领域。
【背景技术】
[0002] 北美红杉原产于美国加尼福尼亚州海岸，最早由尼克松访华时引种至中国杭州。 北美红杉属于特大乔木，在原产地可高达110米。北美红杉树姿雄伟，枝叶密生，生长迅速。 适用于湖畔、水边、草坪中孤植或群植，景观秀丽，也可沿园路两边列植，气势非凡，是非常 优良的园林树种。
[0003] 但由于北美红杉杆插成活率低，组织培养方法生根阶段困难，国内繁殖的情况罕 见报道，因此克服北美红杉培育技术难关，提高离体培养效率，对中国园林植物的丰富具有 重要意义。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是为了解决北美红杉杆插成活率低，组织培养生根阶段较困难的问 题，提供了一种方法简便易于操作，生根速度较快，成活率较高的北美红杉离体生根培养方 法。 阳〇化]本发明采用如下技术方案：一种北美红杉离体生根培养方法，包括如下步骤：
[0006] (1)无菌材料的获得：选取当年生的北美红杉枝条为材料，经过消毒、清洗后用无 菌滤纸吸干多余水分后接种到MS培养基中，20~22天后蔽芽长出无菌苗；
[0007] (2)增殖培养：将无菌苗作为材料，切下顶芽或蔽芽作为外植体，接种至增殖培养 基上，所述增殖培养基的为MS+0. 1~1.Omg/L6-节氨基腺嚷岭+0. 1~1.Omg/L糞乙酸 +30g/L薦糖巧g/L琼脂粉，P册.5~6,培养25~30天时间；
[0008] (3)壮苗：将增殖的无菌苗切下后，移入壮苗培养基，壮苗培养基为MS+0. 1~0.4 糞乙酸，P册.5~6,培养2~3周，溫度为16~25°C; 阳009] (4)生根培养基的配制：将MS培养基中的大量元素、微量元素、肌醇、有机物的用 量分别减至常规用量的1/4,配制成1/4MS培养基；
[0010] (5)生根培养：将壮苗后的组培苗接种到生根培养基上，生根培养基为 1/4MS+0. 1~1.Omg/L吗I噪下酸+30g/L薦糖巧g/L琼脂粉，P册.5~6,12~16天后，基部 长出3~6条主根，主根长度均值达到4. 5~6cm; 1] (6)炼苗与移栽：将高度在2~5cm，根系长度在3~6cm的组培苗进行炼化打开 瓶盖3~7天，使其适应外界环境，3~7天后洗掉根部的生根培养基，用800~1000倍的 多菌灵浸泡1~lOmin，移栽至大棚内，覆膜保湿，适度遮光。
[0012] 进一步的，所述步骤（4)中生根培养基的培养条件溫度为20~24°C。
[0013] 进一步的，所述步骤（1)中的消毒、清洗方法为：在超净工作台上用70~75%的 酒精消毒10~40s，用无菌水冲洗3~5次，然后用次氯酸钢溶液消毒10~30min，用无菌 水冲洗4~6次。
[0014] 进一步的，所述大量元素为硝酸钟、硝酸锭、屯水硫酸儀、憐酸二氨钟和二水氯化 巧。
[0015] 进一步的，所述微量元素为四水硫酸儘、屯水硫酸锋、棚酸、舰化钟、屯水钢酸钢、 五水硫酸铜和六水氯化钻。
[0016] 进一步的，所述有机物为甘氨酸、盐酸化唉醇、盐酸硫锭素和烟酸。
[0017] 本发明培养方法简单，步骤易于操作，将北美红杉离体生根中壮苗的步骤提前到 生根培养之前，有效的提高了组培苗移栽后的成活率，将生根培养基进行改良，能够加速北 美红杉离体培养时的生根效率。
【具体实施方式】
[0018] 下面将结合具体实施例对本发明作进一步的描述。
[0019] 实施例一：一种北美红杉离体生根培养方法，包括如下步骤：
[0020] (1)无菌材料的获得：选取当年生的北美红杉枝条为材料，在超净工作台上用 75%的酒精消毒20s，用无菌水冲洗3次，然后用次氯酸钢溶液消毒lOmin，用无菌水冲洗4 次，然后用无菌滤纸吸干多余水分后接种到MS培养基中，20天后蔽芽长出无菌苗；
[0021] (2)增殖培养：将无菌苗作为材料，切下顶芽或蔽芽作为外植体，接种至增殖培养 基上，增殖培养基的为MS+0.1 mg/L 6-节氨基腺嚷岭+0.1 mg/L糞乙酸+30g/L薦糖巧g/L 琼脂粉，P册.5,培养30天时间，溫度在16°C ;
[0022] (3)壮苗：将增殖的无菌苗切下后，移入壮苗培养基，壮苗培养基为MS+0. 1糞乙 酸，P册，培养2周，溫度16°C。
[0023] (4)生根培养基的配制：将MS培养基中的大量元素硝酸钟、硝酸锭、屯水硫酸儀、 憐酸二氨钟和二水氯化巧，微量元素四水硫酸儘、屯水硫酸锋、棚酸、舰化钟、屯水钢酸钢、 五水硫酸铜和六水氯化钻，肌醇、有机物甘氨酸、盐酸化唉醇、盐酸硫锭素和烟酸的用量分 别减至常规用量的1/4,组成改良后的1/4MS培养基；
[0024] 妨生根培养：将步骤做中壮苗后的组培苗接种到生根培养基上，生根培养基为 1/4MS+0.1 mg/L吗I噪下酸+30g/L薦糖巧g/L琼脂粉，P册.5,生根培养的溫度为20°C，16天 后基部长出3条主根； 阳0巧](6)炼苗与移栽：将高度在2cm，根系长度在3cm的组培苗进行炼苗，打开瓶盖3 天，使其适应外界环境，3天后洗掉根部的生根培养基，用800倍的多菌灵浸泡lOmin，移栽 至大棚内，覆膜保湿，适度遮光。
[00%] 实施例二：一种北美红杉离体生根培养方法，包括如下步骤：
[0027] (1)无菌材料的获得：选取当年生的北美红杉枝条为材料，在超净工作台上用 75%的酒精消毒40s，用无菌水冲洗4次，然后用次氯酸钢溶液消毒20min，用无菌水冲洗5 次，然后无菌滤纸吸干多余水分后接种到MS培养基中，21天后蔽芽长出无菌苗；
[0028] (2)增殖培养：将无菌苗作为材料，切下顶芽或蔽芽作为外植体，接种至增殖培养 基上，所述增殖培养基的为MS+1. Omg/L 6-节氨基腺嚷岭+1. Omg/L糞乙酸+30g/L薦糖 +7g/L琼脂粉，P册.8,培养28天时间，溫度在20°C ;
[0029](3)壮苗：将增殖的无菌苗切下后，移入壮苗培养基，壮苗培养基为MS+0. 4糞乙 酸，P册.8,培养3周，溫度25°C ;
[0030] (4)生根培养基的配制：将MS培养基中的大量元素硝酸钟、硝酸锭、屯水硫酸儀、 憐酸二氨钟和二水氯化巧，微量元素四水硫酸儘、屯水硫酸锋、棚酸、舰化钟、屯水钢酸钢、 五水硫酸铜和六水氯化钻，肌醇、有机物甘氨酸、盐酸化唉醇、盐酸硫锭素和烟酸的用量分 别减至常规用量的1/4,组成改良后的1/4MS培养