一种金黄垂直链霉菌hn6可湿性粉剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 发明涉及生物农药技术领域，尤其涉及一种金黄垂直链霉菌HN6可湿性粉剂及其 制备方法。
【背景技术】
[0002] 香蕉枯萎病又名巴拿马病，由尖孢镰刀菌古巴专化型 /. 5Aci/AeweF0C)侵染引起，属国际检疫对象，发病严重时可致蕉园丢荒，严重影响了香蕉 种植业的发展。近年来化学农药引起农药残留、破坏生态环境等负面影响日益严重，利用生 防微生物防治农作物病害逐渐受到重视。放线菌是生防微生物中极为重要的一类菌群，已 经广泛应用于农业生物防治领域。生防放线菌的应用主要有两方面，一方面是利用放线菌 产生的次生代谢产物，主要是抗生素类物质；另一方面是利用活体放线菌菌株进行生物防 治。由于近年来抗生素在人类环境中也产生不利影响，应用逐渐受到限制。而活体放线菌 菌株可以通过在作物根际的繁殖保证防病效果的持久性，甚至有些放线菌还可以通过在作 物根际固氮、分泌生长素对作物起到促生、增产作用；或者通过诱导植物抗病性提高防病效 果等，因此放线菌活体制剂的研究已成为当今应用研究的主流。已报道防治香蕉枯萎病的 活体菌株制剂主要是芽胞杆菌，放线菌较少，因此开展放线菌活体制剂的研究具有重要的 意义。
[0003] 金黄垂直链霉菌HN6 (5^6>/^咖尺6>6· )HN6,已于 2010 年 11月5日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国武汉市武汉大学，邮编 430072)，保藏号为CCTCCNo.M2010293。经过研究发现：金黄垂直链霉菌HN6对香蕉枯 萎病原菌在内的多种植物病原菌有极强的抑菌活性；金黄垂直链霉菌HN6对尖孢镰刀菌古 巴专化型F0C)侵染引起的香蕉枯萎病有很好的防治 作用；金黄垂直链霉菌HN6能明显提高组培香蕉苗苯丙氨酸解氨酶和超氧化物歧化酶的活 性；金黄垂直链霉菌HN6可以增加组培香蕉苗株高、茎粗、地上部分鲜重及地下部分鲜重； 金黄垂直链霉菌HN6可以提高植株叶片叶绿素、可溶性蛋白质及可溶性糖含量；金黄垂直 链霉菌HN6可有效增强组培香蕉苗根系活力。由此申请了"一株金黄垂直链霉菌HN6及其应 用ZL201110062146. 5"的发明专利和相关论文"王兰英，王琴，骆焱平.金黄垂直链霉菌 HN6对香蕉的防病促生作用[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2015, 43(05): 1-6"。以往该菌株的研究与应用主要采用孢子悬浮液或液体发酵物，但孢子悬浮液与液体 发酵物均不耐储存，也不宜运输，必将限制该菌株的大规模应用。因此研制该菌株的活体制 剂具有重要的意义。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种金黄垂直链霉菌HN6可湿性粉剂，该粉剂可以用于防 治香蕉枯萎病。
[0005] 本发明的另一个目的在于提供该金黄垂直链霉菌HN6可湿性粉剂的制备方法。
[0006] 为实现所述目的，本发明采用以下技术方案： 一种金黄垂直链霉菌HN6可湿性粉剂，其由以下质量百分比的组分制成：金黄垂直链 霉菌HN6液体发酵物5%~20%、润湿剂1 %~5 %、分散剂1 %~5 %、稳定剂0. 5 %~2 %、 填料补足到100%。
[0007] 其中，所述的金黄垂直链霉菌HN6液体发酵物通过以下步骤制备：1)活化金黄 垂直链霉菌HN6 :以划线法将金黄垂直链霉菌HN6接种在高氏一号培养基(培养基的质量 百分比组成：可溶性淀粉 2%，ΚΝ03(λ1%，Κ2ΗΡ04 0· 05%、MgS04 0· 05%、NaCl0· 05%、FeS04 0. 001%，琼脂2%，补水至100%)平板上，28°C恒温培养5天；2)将活化的金黄垂直链霉菌 HN6接种于一级种子培养液(一级种子培养液的质量百分比组成：溶性淀粉2%，ΚΝ03 0. 1%， K2HP04 0 . 05%、MgS04 0 . 05%、NaCl0.05%、FeS04 0· 001%，补水至 100%)中，180r.min 培养72h;3)将制备好的一级种子培养液接种在二级种子培养液(二级种子培养液的质量 百分比组成：葡萄糖 〇· 05%、可溶性淀粉 0· 05%、K2HP04 0· 05%、NaCl0· 05%、MgS04 0· 05%、蛋 白胨0. 05%、酵母膏0. 05%和黄豆粉0. 05%，补水至100%)中，180r·min\ 28°C培养72h， 离心分离，得到金黄垂直链霉菌HN6液体发酵物，低温干燥，水分含量低于5%。
[0008] 优选的，所述润湿剂选用十二烷基硫酸钠、吐温-80、亚甲基双萘磺酸钠中的一种 或几种。
[0009] 优选的，所述分散剂选用ΝΝ0、聚乙二醇、聚天门冬氨酸、CMCC-Na中的一种或几 种。
[0010] 优选的，所述稳定剂选用维生素E、磷酸二氢钾、特丁基对苯二酚中的一种或几种。
[0011] 优选的，所述填料选用硅藻土、膨润土、白炭黑、轻质碳酸钙、高岭土中的一种或几 种。
[0012] 上述的金黄垂直链霉菌HN6可湿性粉剂的制备方法，包括以下步骤： 按照上述重量投入润湿剂、分散剂、稳定剂、填料到气流粉碎机中粉碎，过325目筛，降 温后，加入金黄垂直链霉菌HN6液体发酵物，继续粉碎，水分含量< 5%，活性孢子数为0. 1~ 10亿/克，经检验合格，包装贮存。
[0013] 本发明有益效果：该药剂属于微生物活体制剂，对香蕉枯萎病有显著效果，对其它 病害有较好的防治作用，对生态环境无毒副作用，能保障农产品的质量与安全。
【具体实施方式】
[0014] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施 例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通 技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0015] 实施例1金黄垂直链霉菌HN6可湿性粉剂的制备方法 (1)菌种活化： 本发明所用菌种为金黄垂直链霉菌HN6( ayreoKeriiciWaiiA?HN6)。将 菌种以划线法接种在扩大培养基(可溶性淀粉2%，ΚΝ03 0. 1%，Κ2ΗΡ04 0 . 05%、MgS04 0 . 05%、NaCl0. 05%、FeS04 0 . 001%，琼脂2%，补水至100%，待药品全部溶解后，调节pH至7. 0-7. 2， 121°C高温高压灭菌20min)固体平板上，28°C恒温培养5天。
[0016] (2)-级种子制备： 将活化的金黄垂直链霉菌HN6制成浓度为109cfug1孢子悬浮液，然后按照5%的接种 量接种于装有一级种子培养液(溶性淀粉2%，ΚΝ03 0. 1%，Κ2ΗΡ04 0 . 05%、MgS04 0 . 05%、NaCl 0. 05%、FeS04 0 . 001%，补水至100%，待药品全部溶解后，调节pH至7. 0-7. 2,121°C高温高压 灭菌20min)的三角瓶中，180r?11^11-1，28°(：培养7211，制得一级种子，备用。
[0017] (3)二级种子制备： 将制备好的一级种子培养液按照5%接种量接种在装有二级种子培养液(葡萄糖 0· 05%、可溶性淀粉 0· 05%、Κ2ΗΡ04 0· 05%、NaCl0· 05%、MgS04 0· 05%、蛋白胨 0· 05%、酵母膏 0. 05%和黄豆粉0. 05%，补水至100%，待药品全部溶解后，调节pH至6. 8-7. 0,121°C高温高 压灭菌20min)的三角瓶中，180r·min\28-C培养72h，制得二级种子，离心分离，得到金 黄垂直链霉菌HN6液体发酵物。
[0018] (4 )可湿性粉剂的制备： 黄垂直链霉菌液体发酵物0. 1~10亿/克，润湿剂1 %~5 %，分散剂1 %~5 %，稳定 剂0.5%~2%，填料补足到100%组成。按照上述重量投入到气流粉碎机中粉碎，过325目 筛，水分含量< 5%，活性孢子>0. 1~10亿/克，经检验合格，包装贮存。
[0019] 实例1 0. 1亿/克金黄垂直链霉菌HN6可湿性粉剂的制备方法 由金黄垂直链霉菌液体发酵物5%、十二烷基硫酸钠1 %、ΝΝ0 5 %、磷酸二氢钾2 %和硅 藻土 87%制成。按照上述重量投入到气流粉碎机中粉碎，过325目筛，水分含量< 5%，活性 孢子检测为0. 1亿/克，经检验合格，包装贮存。
[0020] 实例2 3亿/克金黄垂直链霉菌HN6可湿性粉剂的制备方法 由金黄垂直链霉菌液体发酵物10%、亚甲基双萘磺酸钠5%、ΝΝ0 1%、聚天门冬氨酸 1%、维生素E0. 5%和膨润土 82. 5%制成。按照上述重量投入到气流粉碎机中粉碎，过325 目筛，水分含量< 5%，活性孢子检测为3亿/克，经检验合格，包装贮存。
[0021 ] 实例3 5亿/克金黄垂直链霉菌HN6可湿性粉剂的制备方法 由金黄垂直链霉菌液体发酵物15%、十二烷基硫酸钠2 %、吐温-80 1 %、聚乙二醇2 %、 聚天门冬氨酸1%、磷酸二氢钾〇. 5%、特丁基对苯二酚1%、白炭黑30%和高岭土47. 5%制成。 按照上述重量投入到气流粉碎机中粉碎，过325目筛，水分含量< 5%，活性孢子检测为5亿 /克，经检验合格，包装贮存。
[0022] 实例4 10亿/克金黄垂直链霉菌HN6可湿性粉剂的制备方法 由金黄垂直链霉菌液体发酵物20%、十二烷基硫酸钠5%、NN0 4%、CMCC-Na1%、磷酸 二氢钾3%、特丁基对苯二酚2%、硅藻土 40%和轻质碳酸钙25%制成。按照上述重量投入到 气流粉碎机中粉碎，过325目筛，水分含量< 5%，活性孢子检测为10亿/克，经检验合格，包 装贮存。
[0023] 实施例2金黄垂直链霉菌HN6可湿性粉剂的制备方法优化过程 首先，固定其它助剂，选用娃藻土、膨润土、白炭黑、轻质碳酸I丐、高岭土填料，按照上述 方法配制可湿性粉剂，测定其悬浮率（中国人民共和国国家标准GB/T14825-2006)、润湿 时间（中国人民共和国国家标准GB/T5451-