一种提高白羽肉鸡商品代种蛋能量储备的孵化方法
【技术领域】
[0001]本发明属于畜牧业家禽孵化与饲养技术领域，涉及一种提高白羽肉鸡商品代种蛋 能量储备的孵化方法。
【背景技术】
[0002] 肉鸡是卵生动物，其胚胎发育脱离母体且在一个封闭的环境下进行。常规孵化条 件下，在21天的孵化期中肉鸡胚胎发育所需的能量和营养仅依靠种蛋中贮存的营养物质提 供的。研究表明，孵化第1周，鸡胚发育所需的能量主要依靠胚蛋中1 %碳水化合物提供 (Moran Jr ·Ε·T· ,Poultry Science,2007,86(5) :1043-1049);随后，卵黄中的脂肪酸（约占 卵黄鲜重的33%)氧化供能成为主要的能量供应方式(Noble R.C.and Cocchi M.Progress in Lipid Research，1990,29(2) :107-140)，与此同时部分脂肪酸代谢物和氨基酸代谢物 通过糖异生途径在肝脏中合成葡萄糖，活化的葡萄糖分子在糖原合酶的催化下合成糖原， 储存于鸡胚的肝脏和肌肉中，以供出壳时利用(Donaldson W.E. ,Feedstuffs,1995,67:16-17)。可见，鸡胚生长发育所需能量主要来自卵黄中的脂肪酸，胚胎对孵化过程中的能量供 应非常敏感，充足的能量供应是保证孵化成功的关键因素。然而，孵化后期鸡胚能量消耗巨 大，此时能量缺乏（如糖原储存不足）易导致胚胎死亡以及出壳后弱雏鸡苗的高发生率，给 肉鸡孵化场和养殖场造成经济损失。因此，采取早期营养措施调控胚胎及雏鸡能量储备对 促进鸡胚发育和早期生长具有重要意义。
[0003] -般早期营养调控措施是采用出壳后尽早饲喂的方式，但因受限于管理、运输等 因素而在实际生产中难以广泛应用，且难以在孵化期进行营养调控。胚蛋注射营养素或活 性物质（In ?νο feeding，I0F)是一种调控家禽早期营养继而影响后期生长的有效技术手 段。IOF技术可以定量化地进行外源营养物质的注射，从而解决孵化后期鸡胚营养供应不足 问题，保障胚胎发育。
[0004] 应用IOF技术时必须注意注射液体的体积大小。鸡蛋内部结构的组成是相对固定 的，注射液体体积过大会由于局部分压改变或胚胎结构的破坏而影响胚胎发育;体积过小， 则达不到效果。Uni Z.等(2005)应用IOF技术给第17.5天胚胎注射ImL碳水化合物和HMB营 养液，发现孵化率仅为87% (Poultry Science，2005，84(5): 764-770); Zhai W·等(2011)报 道碳水化合物营养液注射体积超过〇.7mL时会显著降低鸡胚的孵化率至80% (Poultry Science，90(6): 1295-1301)。因此，研究探索既可以提高能量储备，又不会降低孵化效率的 注射液体积显得十分必要。
[0005] 选择合理的营养素是通过IOF技术解决胚胎发育后期能量不足的另一关键因素。 Uni Z.等(2005)通过注射麦芽糖、蔗糖、葡聚糖等多糖和β-羟基-β-甲基丁酸盐的混合营养 液，尽管也可在一定程度上提高鸡胚肝脏中肝糖原的含量，但是其营养液的配方复杂、推广 应用难度大，且从理论上讲，胚胎期肉仔鸡的消化道发育不完善，还不能分泌足够麦芽糖酶 等消化酶将多糖水解成单糖吸收，因此我们认为其研究结果存在较大的争议。
【发明内容】
[0006] 本发明针对白羽肉鸡孵化后期易于出现能量储备不足而影响胚胎发育的特点，配 制含有葡萄糖和一水肌酸的专用营养液，以胚蛋注射技术(In ovo feeding, I0F)为手段而 建立的一种提高白羽肉鸡商品代种蛋孵化后期胚胎能量储备的孵化方法。
[0007] 本发明的目的可通过如下技术方案实现：
[0008] 一种提高白羽肉鸡商品代种蛋能量储备的孵化方法，在白羽肉鸡商品代种蛋的孵 化后期通过胚蛋注射灭菌的每毫升含60~65mg葡萄糖和10~15mg-水肌酸的注射用营养 液体，并按原来孵化条件继续孵化至出壳。
[0009] 其中所述的注射用营养液体优选通过如下方法配制：称取氯化钠8.5g，溶解于的 蒸馏水中，用容量瓶定溶至1L，配制成0.85%的生理盐水;再称取60~65g葡萄糖和10~15g 的一水肌酸，充分溶解于IL 0.85%的生理盐水中，配制成每毫升含60~65mg葡萄糖和10~ 15mg-水肌酸的注射用营养液体。
[0010] 本发明方法优选在白羽肉鸡商品代种蛋的孵化后期通过胚蛋注射灭菌的每毫升 含62.5mg葡萄糖和15mg-水肌酸的注射用营养液体，并按原来孵化条件继续孵化至21日龄 出壳。
[0011] 本发明所述方法进一步优选在白羽肉鸡商品代种蛋孵化期第17.5天通过胚蛋注 射0.4mL灭菌的每毫升含62.5mg葡萄糖和15mg-水肌酸的注射用营养液体，并按原来孵化 条件继续孵化至21日龄出壳。
[0012] 胚蛋注射营养液的实施方法更进一步优选如下:在孵化期第17.5天，在气室正上 方钻一小孔，吸取〇. 4mL所述的注射用营养液体，注射位置从胚蛋气室顶端正上方垂直进针 2.50cm，将0.4mL注射液全部一次性注入羊膜腔，立即采用石蜡溶液密封注射针孔，所有胚 蛋在0.5-lh内完成注射。
[0013] 所述的孵化方法优选:孵化温度为37.6 ± 0.1°C，相对湿度60 %，每1.5h翻蛋一次， 角度270°，第19天停止翻蛋、落盘。
[0014] 孵化过程中优选于孵化第10天第一次照蛋，去除无精蛋和死胚蛋;于孵化的第17 天第二次照蛋，去除死胚蛋;第二次照蛋后完成后进行所述的胚蛋注射。
[0015] 本发明的有益效果是：
[0016] 应用IOF技术时必须注意注射液体的体积大小。本发明中，我们通过大量的前期预 试验结果获知〇.4mL为不会降低肉鸡孵化率的安全注射剂量。葡萄糖是动物细胞最直接的 能量来源，对于快速补充能量具有重要的意义。本研究团队前期预试验结果表明，葡萄糖注 射量超过80mg时鸡胚的死亡率高达43.0%、孵化率仅为57.0 %。表明，葡萄糖注射剂量过 高，快速吸收入血会引发高血糖症，造成鸡胚死亡。然而，单独注射低剂量的葡萄糖对促进 鸡胚能量储备效果又不理想。肌酸(Creatine)是天然存在于动物肌肉等组织中用于合成储 能物质磷酸肌酸（CrP)的重要原料，是骨骼肌ATP合成的后备保证。一水肌酸（Creatine monohydrate，CMH)是肌酸最主要的添加剂形式。本发明研究表明在肉鸡孵化的特定时间段 (第17.5天)注射含特定用量(0.4mL)和浓度范围的葡萄糖和CMH的营养液不会降低肉仔鸡 的孵化率，但可显著提高鸡胚肝脏中以肝糖原为主的能量物质储备和胸肌中以肌酸和磷酸 肌酸为主的能量物质储备，并可持续到1日龄;此外，还可以显著提高19.5胚龄鸡胚和1日龄 肉仔鸡高卵黄存留率，显著提高了肉仔鸡出壳早期的生长速度，提高生产效率。而单独注射 葡萄糖或CMH均效果均不理想。
[0017] 本发明通过IOF技术注射低浓度的葡萄糖与CMH混合营养液可成功提高鸡胚肝脏 和胸肌中的能量储备，且营养液的配方简单、价格低廉，应用本发明的方法可有效解决孵化 后期因鸡胚能量消耗巨大而引起的能量缺乏和孵化率低的问题，具有重要的实践意义和应 用价值。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
[0019] 实施例1营养液的配制
[0020] 称取氯化钠8.5g，溶解于的蒸馏水中，用容量瓶定溶至1000 mL，配制成0.85%的生 理盐水。称取3.1258葡萄糖、0.75 8的一水肌酸(010〇，分别充分溶解于5〇1^0.85%的生理 盐水中，配制成每毫升含62.5mg葡萄糖的注射营养液和每毫升含15mg CMH的注射营养液； 再称取3.125g葡萄糖和0.75g的CMH，充分溶解于50mL 0.85%的生理盐水中，配制成每毫升 含62.5mg葡萄糖和15mg CMH的注射营养液。将配制成的所有注射营养液和剩余的生理盐水 于121°C高压灭菌15min，冷却后放于无菌封口袋中保存，备用。使用前置于37.5°C的恒温水 浴中加热。
[0021] 实施例2胚蛋注射技术的实施
[0022] 1)鸡胚孵化条件
[0023]孵化器的消毒:孵化器推荐使用南京恒信孵化设备有限公司生产的HXC-5型微电 脑全自动孵化控制器，使用前用水洗净，再向孵化器内壁全面喷洒1%浓度的新洁尔灭消毒 液或新洁尔灭原液加水50倍，最后用沾消毒液的抹布将各处，包括每个角落擦干擦净，晾干 备用。
[0024] 650枚爱拔益加(AA)肉鸡商品代种蛋(购自江苏京海禽业集团有限公司，蛋重范围 58-62g，平均蛋重60.65g)，入孵前检查种蛋，去除破壳蛋、