一种基于共生关系的板栗夏块菌菌根苗的培育方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于林业经济林育苗技术领域与微生物技术领域，具体设及一种基于共生 关系的板栗夏块菌菌根苗的培育方法。
【背景技术】
[0002] 目前全国培育板栗苗均采用常规育苗技术，苗木造林后5-7年板栗树挂果，经济收 益只有板栗，单位面积经济效益来源单一。并且，块菌隶属于子囊菌纲(Ascomycets)块菌目 (Tubrales)块菌科（Tuberaceae)块菌属（Tuber F.H.Wigg)目前仅靠自然野生资源供应市 场。由于块菌生长的特殊性，采挖时对菌塘及生态环境造成严重破坏，使块菌产量急剧下 降，产量已远远不能满足市场需求。板栗是块菌的共生树种，为提高±地利用率，增加经济 收益，把二者有机结合，改变板栗苗木培育方法，得到板栗夏块菌菌根苗，实验研究得到一 套完整的育苗技术。
[0003] 现已有的板栗育苗技术均为常规技术，另已有的块菌苗培育方法主要用于松科植 物，主要存在W下主要问题:现有造林的板栗苗基本是没有共生菌根的普通苗，普通苗造的 板栗林未来只有地上部分收益;松科植物经济效益低。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种基于共生关系的板栗夏块菌菌根苗的培育方法，解决了 现有板栗育苗技术中存在的无共生菌根、育苗基质通气透水性差、板栗种存储难、育苗时间 长的问题。
[0005] 本发明所采用的技术方案是，一种基于共生关系的板栗夏块菌菌根苗的培育方 法，具体按照W下步骤实施：
[0006] 1)培育半无菌苗，制备得到板栗半无菌苗；
[0007] 2)接种前准备:制备接种液、配制接种基质W及准备育苗盘；
[000引3)进行夏块菌接种处理；
[0009] 4)进行接种后管理，控制基质湿度，适当通风、透气，保持一定的溫度和空气湿度； [0010] 5)菌根的检验和出栽。
[0011] 进一步地，步骤1中培育板栗半无菌苗具体为：
[0012] 1.1)市场采购新鲜、成熟的印度块菌，擦净泥沙装入自封袋，置于-18°C低溫冷冻 储藏;并选择能与块菌形成菌根、产生子实体的板栗；
[0013] 1.2)基质准备:将赔石、YC/T310-2009标准的烟草漂浮育苗基质W体积比为1:1混 合，加入适量水拌均匀，含水率约28%，即基质捏起成团，松手后散开为好;基质在121 °C、 IlOkPa的高溫高压下灭菌2小时后冷却待用；
[0014] 1.3)育苗盘及盆鉢消毒：用5%。高儘酸钟溶液浸泡2小时，取出后用无菌水冲洗= 次；
[0015] 1.4)板栗种子用水选法除去空痕后放入30%双氧水中灭菌40分钟，拱起用无菌水 冲洗后播入盛有灭菌基质的盆鉢或育苗盘中，用冷却后的开水或蒸馈水诱灌，置于溫室中 培育，制备得到板栗半无菌苗;第二年2-4月份，当板栗主根系长5-lOcm，侧根发达后开始接 种。
[0016] 进一步地，步骤2中制备接种液、配制接种基质W及准备育苗盘具体为：
[0017] 2.1)接种液的配制：果汁机用75%酒精的脱脂棉球擦拭后，用无菌水冲洗，反复3 次;成熟的块菌用自来水洗净后，再用75 %酒精的脱脂棉球擦拭干净，用无菌解剖刀削去外 皮，切成小块;放入准备好的果汁机中加入400-500ml无菌水，开启果汁机揽拌约25-30秒， 制成块菌子实体浓度为10%的抱子悬浮液，倒入已灭菌的瓶中，密封，置4°C冰箱保存备用； [001引2.2)、接种基质配制:经过高压灭菌的基质中加入适量无菌水拌匀，根据基质的体 积计算后加定量生石灰拌匀，PH值调到7.0-8.0之间，使基质捏起成团，松手后散开为好；
[0019] 2.3)、胶片及育苗盘准备:将塑胶片置入双氧水中灭菌40分钟，取出用灭菌水冲洗 干净备用；用5%。高儘酸钟溶液浸泡育苗盘及盆鉢2小时，取出后用无菌水冲洗3-5次。
[0020] 进一步地，接种处理具体为：
[0021] 3.1)、将配制好的基质平铺于经过灭菌的塑胶片上，取出板栗半无菌苗，根部置于 基质中部，使根充分伸展开；
[0022] 3.2)、用吸管吸取制备好的抱子悬浮液IOml,均匀地淋于根上包好塑胶片，塑胶片 松紧适合，使基质不会散落；
[0023] 3.3)依次放入准备好的育苗盘内，诱适量的蒸馈水，置于溫室内培养。注意水不能 诱太多，否则会冲走块菌抱子。
[0024] 进一步地，步骤4中的接种后处理具体为：
[0025] 4.1 )、诱水:培养期间用冷开水或蒸馈水诱灌，保持基质湿润；
[0026] 4.2)、溫度：夏季需遮阴处理，溫室内保持平均溫度18.64°C，最高溫度不超过32 °C，最低不低于1°C;
[0027] 4.3)、湿度:溫室内平均湿度64%，最大湿度不超过96%，最小湿度不低于34%。
[0028] 进一步地，苗木接种后1-2个月开始进行检查，主要用放大镜观察菌根的发育和形 态，感染其他杂菌的菌根苗需立即移除，W免扩大污染;第二次检验:接种后6个月，检验菌 根感染率，菌根少，或无菌根的需在2-4月份或7-8月份两个时间段进行第二次补接种;第= 次检验:菌根苗出栽前检验，选择菌根感染率达到60%，菌根发育良好，颜色鲜亮的菌根苗 到野外定植。
[0029] 本发明的有益效果是：1、通过调整育苗基质配比及PH值，改善基质通气透水性，更 适宜苗木根系生长和菌根形成及发育。
[0030] 2、改变板栗常规播种时间提高板栗出苗率，秋播板栗种子解决了板栗存储难及缩 短育苗时间。
[0031] 3、改变板栗种子处理方法节省人力、物力，种子消毒处理方法:30%双氧水浸泡40 分钟，用无菌水冲洗3-4次后直接播种，比采用机械破口及酒精擦拭节省人力及避免二次污 染。
[0032] 4、接种后通过控制育苗环境溫、光、气、湿，促进苗木菌根的生长发育，确保出栽野 外定植前菌根感染率达到60 % W上。
[0033] 本发明的培育方法中，菌根苗造林可W提高板栗造林成活率;菌根能提高板栗根 系吸收能力，促进板栗树生长发育;板栗夏块菌菌根苗最终达到地上、地下共同收益，提高 上地利用率，增加上地单位面积经济效益。
【具体实施方式】
[0034] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行详细说明。
[0035] 本发明提供一种基于共生关系的板栗夏块菌菌根苗的培育方法，具体按照W下步 骤实施：
[0036] 1、培育板栗半无菌苗；
[0037] 1.1、夏块菌(Tuber aestivum)菌种保存：市场采购新鲜、成熟的夏块菌，擦净泥沙 装入自封袋，置于-18°C低溫冷冻储藏；
[0038] 共生树种选择：选择能与块菌形成菌根、产生子实体的板栗（Castanea mollissima)；
[0039] 1.2、基质准备:将赔石、YC/T310-2009标准的烟草漂浮育苗基质W体积比为1:1混 合，加入适量水拌均匀，含水率约28%，即基质捏起成团，松手后散开为好。基质在121°C、 IlOkPa的高溫高压下灭菌2小时后冷却待用；
[0040] 1.3、育苗盘及盆鉢消毒：用5%。高儘酸钟溶液浸泡2小时，取出后用无菌水冲洗3-5 次；
[0041] 1.4、板栗种子用水选法除去空痕后放入30%双氧水中灭菌40分钟，拱起用无菌水 冲洗后播入盛有灭菌基质的盆鉢或育苗盘中，用冷却后的开水或蒸馈水诱灌，置于溫室中 培育，获得板栗半无菌苗;第二年2-4月份，当板栗主根系长5-l