一种土人参无菌苗的炼苗移栽方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物的组织培养、育种繁殖和栽培等领域，具体指一种土人参无菌苗的炼苗移栽方法，能提高土人参无菌苗的移栽成苗率。
【背景技术】
[0002]土人参(Talinum paniculatum)，又名土洋参、假人参、人参菜、参草、土高丽参等，是马齿苋科多年生的草本植物。根、叶均可食用，可炒、可做汤、可涮、可炖，药蔬兼用。土人参的叶中，草酸含量较高，富含钙、磷、铁、抗坏血酸、硫胺素等营养成分;其根类似人参，含有糖类物质，可以炖汤或泡酒;嫩叶、嫩梢可食用，也可凉拌、炒食，味道鲜嫩。土人参也是一味极好的中草药，具有滋补强壮作用，能补气血、助消化、生津止渴、健脾润肺、止咳、治咳痰带血、调经等，被誉为“南方人参”，美食家认为“土人参补胜似人参”，其开发利用潜力很大，越来越受到人们的关注，土人参的功能基因和育种是其研究的重要内容。
[0003]功能基因和育种等研究过程中，组织培养是很重要的手段，但是，组织培养的土人参无菌苗在驯化炼苗时，由于茎叶嫩而脆，清洗培养基的过程中很容易折断茎叶；同时，用珍珠岩等普通的办法驯化炼苗，容易导致嫩苗缺水或染病死亡，成苗率较低，一般在50%左右，而且，相对弱小的土人参无菌苗(I厘米高度以下)，更加难以炼苗成功。并且，常规的炼苗移栽操作过程较慢而复杂，耗费时间和人力较多，存在不利于土人参的育种繁殖和栽培的问题。
【发明内容】
[0004]—种土人参无菌苗的炼苗移栽方法，具体包含以下步骤。
[0005]I)无菌土壤的准备
用0.5毫米直径网孔的筛子筛过的细小土壤，其细小土壤的粘性泥土体积和细沙体积比为:0.2 <粘性泥土体积:细沙体积< 10，加入蒸馏水，直到土壤湿润但无积水流出为止，然后高压灭菌，冷却至25°C备用。
[0006]2)无菌土壤的添加
用无菌镊子将以上灭菌的土壤，轻轻加入已生根的土人参无菌苗的培养瓶中，其培养瓶中的土人参无菌苗植株高于5毫米即可;边加土壤，边轻轻震动培养瓶，使土壤均匀覆盖培养基，土壤厚度约5毫米，轻轻盖上瓶盖，瓶内与瓶外有约0.5毫米的缝隙相通，即瓶盖外边缘与瓶口内壁有0.5毫米缝隙。
[0007]3)光照培养
置于2000Lux白光下，光照12小时，黑暗12小时，温度20-25°C，连续培养10天，这十天内，每天观察土壤的湿润程度，如果土壤表层部分干燥至变为白色，就补充蒸馏水至湿润即可，土壤中不要有积水。1天后，打开瓶盖，继续置于2000LUX白光下，光照12小时，黑暗12小时，温度20-25°C，连续培养7天，这7天内，每天观察土壤的湿润程度，如果土壤表层部分干燥至变白色，就补充蒸馏水至湿润即可，土壤中不要有积水。
[0008]4)无菌苗移栽与管理
经过上述培养后的无菌苗直接连同培养基和添加的无菌土壤，像移栽普通种子发芽所得的幼苗一样，保护根系，移栽到地里，移栽深度为培养基上覆盖I厘米左右厚的土壤，露出叶片，慢慢浇水至排水沟流水为止，盖上遮阳度大于70%的遮阳网，遮阳网高度离地0.3-0.4米，15天后可以去掉遮阳网，无菌苗就长成了室外经得起风吹雨打的小苗了，成苗率90%以上。
[0009]本发明与现有技术相比，具有以下的优点和效果:
I)由于不需要清洗培养基，土人参无菌苗的根茎叶不会受到机械损伤;而且，加入培养瓶的细小土壤给无菌苗的生长提供了部分无机盐，并保持培养基水分，促进新根向土壤中生长，产生根毛，形成较发达的根系。
[0010]2)瓶内与瓶外有约0.5毫米的缝隙相通，可以使得土人参无菌苗有较多的二氧化碳和氧气吸收，培养室空间的杂菌进入瓶内的机会较少，同时使得瓶内维持在85%左右的相对湿度，与炼苗前90%以上相比，相对湿度明显降低，加大了无菌苗的蒸腾作用，促进叶片气孔产生、新根生长;同时，2000LUX的较强光照，增强嫩茎叶的光合作用，使得植物生长健壮，增强抗逆能力，经过10天，完成无菌苗从相对密闭的培养瓶到与外界少量空气相通的炼苗过渡阶段。
[0011]3)开瓶炼苗7天，保持加入土壤湿润而无积水，加大了无菌苗和外界的空气的接触面积，同时加入的无菌土壤除了保湿、提供无机盐的作用外，使得原来培养基和外界空气隔绝，培养基不容易滋生杂菌，不容易长霉菌或其他病菌，无菌苗慢慢变成较老的幼苗，顺利完成无菌苗适应较大蒸腾面积的炼苗过渡阶段。
[0012]4) 土人参无菌苗连同培养基和添加的无菌土壤一起移栽，保护了根系的完整性；盖上遮阳度大于70%的遮阳网，遮阳网高度离地0.3-0.4米，保持土壤的湿度和适度的光照；而且，加入的土壤和大量浇水，使得原培养基的糖类、大量元素等充分稀释，不容易产生根腐病等疾病，顺利完成无菌苗适应较大蒸腾面积到完全适应露天栽培土壤的炼苗过渡阶段，保证了很高的成苗率。
[0013]5)上述每一个炼苗过渡阶段都紧密联系，循序渐进，巧妙地应用土壤无机盐、水分、光照、温度、湿度、空气等无菌苗生长的条件，遵循了无菌苗到露天苗生长过程中根毛发育、根系发育、气孔发育、叶片表皮细胞细胞壁加厚等炼苗发育规律。而且减少一道清洗培养基转入炼苗盘的工序，节约了时间和人力资源，降低了生产成本，提高炼苗成功的效率(50%提升到90%以上)。
[0014]6)减少一道清洗培养基转入炼苗盘的工序，避免了清洗培养基时水资源的浪费和培养基作为垃圾的污染。
[0015]7)本发明同样适应野百合、长寿花和紫萁等植物无菌苗的炼苗移栽(参见说明书附图的图1-图8)，炼苗成功率也超过90%，而且较小(如0.5-2厘米高的植株)的无菌苗也能炼苗成功，打破了野百合等许多植物无菌苗炼苗移栽过程中无菌苗必须大于一定尺度(如5厘米以上