一种快速增加水蛭抗凝血酶活性的养殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种快速增加水赔抗凝血酶活性的养殖方法，具体属于水赔养殖技术 领域。
【背景技术】
[0002] 水赔养殖一般采用种赔水旱相间大田垄沟式养殖和水泥池集中养殖两种模式。大 田养殖指自然产卵解化后集中育苗分池养殖或亲本与幼苗同池混合养殖式，操作步骤简 单，易于管理，但是受自然灾害影响较大，野外环境水赔天敌多，病害防治难度较大，育苗周 期长且密度小，大田养殖1至2年后直接捕拱，此种模式个体增重率很小，主要靠水赔数量的 倍增产生经济价值。水泥池集中养殖指在每年4、5月采购小个体水赔集中饲养至7、8月份停 食2个月后采收出售，此种模式没有水赔数量的增加，主要是靠个体体重的倍增产生经济效 益。W上两种方式均存在养殖周期长、生产成本高的问题，且水泥池养殖简单的停食处理对 提高水赔单位质量抗凝血酶活性的效率较低且体重损耗较大。因此提供一种养殖周期短， 能够高效、快速增加水赔抗凝血酶活性的养殖方法显得尤为必要。
【发明内容】
[0003] 为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种快速增加水赔抗凝血酶活性 的养殖方法，能够快速有效提高水赔抗凝血酶活性。
[0004] 为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
[0005] -种快速增加水赔抗凝血酶活性的养殖方法，包括W下步骤：（1)幼苗采集；（2)增 重养殖;（3)控溫停食;（4)收获。
[0006] 具体地，前述养殖方法包括W下步骤：（1)幼苗采集:收集解化后的水赔幼苗，集中 育苗20天后进行分苗处理；（2)增重养殖:将分苗后水赔幼苗置于22°C~34°C溫度下日常饲 喂2个月，快速增重；（3)控溫停食:将饲养溫度控制在30°C，恒溫停食1个月；（4)收获。
[0007] 前述养殖方法中，在步骤(2)和(3)的养殖过程中进行清洗换水，即每天用相同溫 度的洁净水清洗更换一次，同时挑出死亡水赔。
[000引前述养殖方法中，步骤(2)中养殖密度为60~80尾/L。
[0009] 前述养殖方法中，步骤(2)中日常饲喂为:每4天W仿生膜为介质投喂一次巧料。
[0010] 前述养殖方法中，所述巧料可W是牛血清、牛原血、猪血清或猪原血，也可W是体 积比为1~5:6~10(优选为2:8)的蔬菜汁与牛血清/猪血清的混合物;所述蔬菜汁可W是芹 菜汁、渡菜汁或野芹菜汁。
[0011] 进一步地，前述养殖方法中，投喂时间最好选择在上午12:00之前，有利于提高抗 凝血酶含量。
[0012] 日常饲喂时，投喂之前将水赔清洗干净，滤干水后进行喂食，进食时间控制在 30min~90min〇
[0013] 水赔进食过程中随时挑出过大的个体，W控制其单次进食量，防止胀死。
[0014] 投喂结束后将水赔和投喂容器分离，水赔清洗干净放回饲养器中存放，清洗投喂 容器，晒干备下次投喂时重复使用。
[0015] 一、溫度对水赔生长的影响试验
[0016] 1、试验目的
[0017] 通过设计不同的溫度梯度养殖水赔、记录统计水赔在各种溫度环境下生长的存活 率，分析确定水赔最适生长溫度。
[001引 2、试验内容
[0019] 2.1试验设计
[0020] (1)设置18 °C、22 °C、26 °C、30°C、34 °C、38 °C和自然环境溫度屯个等级，各溫度等级 3个重复，每个重复50尾Ig左右健康水赔苗；（2)基质：水；（3)湿度：自然条件下湿度；（4)密 度:62.5尾A; (5)试验周期:60天。
[0021] 2.2试验材料
[0022] (1)试验容器:2000mL大烧杯；（2)基质用量:800ιΛ; (3)防逃网：40目尼龙网；（4)巧 料:新鲜牛血清
[0023] 2.3试验日常管理
[0024] (1)清洗换水:每天清水清洗一遍；（2)投喂方式:仿生膜晚吸式；（3)投喂频率:4天 一次；（4)投喂时长:30min/次；（5)死亡统计:每天统计一次死亡水赔数量与重量。
[00巧]3、试验结果
[00%]由水赔的死亡数量与重量统计结果可知，生长环境溫度在20°C~30°C时，水赔增 重率较高，尤其是W3(TC条件下为最佳。
[0027]二、控溫停食对水赔抗凝血酶活性的影响
[00%]水赔体中抗凝血酶主要集中于水赔的头部，水赔体重的变化对总体抗凝血酶活性 的影响相对较小，因此，本发明主要通过水赔单位质量的抗凝血酶含量来体现水赔的抗凝 血酶活性，并采用下述方法测定水赔单位质量的抗凝血酶含量来研究控溫停食对水赔抗凝 血酶活性的影响。
[00巧]1、溶液的配制
[0030] (1 )〇. 2mol/LS径基甲基氨基甲烧溶液的配制
[0031] 取Ξ径基甲基氨基甲烧(分析纯）2.4228g，加水至1 OOmL，即为0.2mo 1/LS径基甲 基氨基甲烧溶液。
[0032] (2)0.1mol/L盐酸溶液的配制
[0033] 取浓盐酸9mL，加水至lOOOmL，即为O.lmol/L盐酸溶液。
[0034] (3)Ξ径基甲基氨基甲烧盐酸缓冲液的制备
[003引取0.2mol/LS径基甲基氨基甲烧溶液25mL与O.lmol/L盐酸溶液40mL加水至 1 OOmL充分混匀，调节pH至7.4，即得。
[0036] (4)0.5%牛纤维蛋白原凝固物记)溶液的配制
[0037] 取牛纤维蛋白原(含凝固物59%)0.085g至lOmL容量瓶中，用预先加热至37°C的Ξ 径基甲基氨基甲烧盐酸缓冲液稀释至刻度，37Γ水浴轻摇缓慢使溶(放入水浴时间不宜超 过10分钟）。
[0038] (5)凝血酶溶液的配制
[0039] 取含量为560U/支凝血酶1支，取其全部内容物至lOmL容量瓶中，用生理盐水稀释 至刻度，轻轻摇匀即为5抓/mL，盛于玻璃管中。
[0040] (6)供试品溶液的配制
[0041 ]取水赔粉末(3号筛)约Ig，精密称定，精密加入0.9 %氯化钢溶液5mL，充分揽拌，浸 提30分钟，并时时振摇，35(K)r/min离屯、，离屯、15分钟，取上清液。
[0042] 2、含量测定操作步骤
[00创 （1)精密量取上清液10化L，置于（10mm X 7 5mm)试管中；
[0044] (2)精密加入含0.5%牛纤维蛋白原的Ξ径基甲基氨基甲烧盐酸缓冲液2(K)yL，摇 匀；
[0045] (3)将试管置于水浴锅(37±0.5°C)中（用溫度计置水浴中观察测量溫度)缓缓滴 加每ImL含56单位U的凝血酶溶液(每分钟化L，边滴加边轻轻摇匀），滴加凝血酶溶液时尽量 不取出试管，W使其保持在37±0.5°C溫度中。当接近凝固时，5化分次滴加，每次滴加1~化 L，边滴加边轻摇，密切观察其是否凝固（可置试管于透光处），可用注射器针尖轻挑，看是否 有丝状物产生，若有丝状物或絮状物产生可判为已凝固。每个样品置水浴中检测的时间不 得超过30分钟。
[0046] (4)记录消耗凝血酶溶液的体积，按照下式计算其含量。
[0047]
[0048] 式中，U为每Ig含抗凝血酶活性单位，U/g; Cl为凝血酶溶液的浓度，U/mL; C2为供试 品溶液的浓度，g/mM Vi为消耗凝血酶溶液的体积，V2为供试品溶液的加入量，中和一 个单位的凝血酶的量，为一个抗凝血酶活性单位。
[0049] 分别测定增重养殖阶段结束后W及停食1个月后水赔单位质量的抗凝血酶含量， 结果如表1所示。
[0050] 表1水赔单位质量的抗凝血酶含量测定结果
[0化1 ]
[0052]由表1可知，控溫停食饲养1个月后，水赔单位质量的抗凝血酶含量有了显著的提 高。其中停食阶段溫度为30°C时，水赔单位质量的抗凝血酶含量提高