一种乌芝子实体的培养方法
【技术领域】
[0001 ]本发明具体设及一种乌芝子实体的培养方法。
【背景技术】
[0002] 随着人类社会的发展，人类"崇尚自然，回归自然"的呼声越来越高，人们对天然药 物和天然保健品的社会需求日益增涨。食药用真菌W其多方面的生物活性和安全无毒副作 用而备受青睐，挖掘新的食药用菌资源并进行人工驯化栽培，已成为食药用真菌行业研究 热点。灵芝作为"药用菌之王"，其保健、药用功效早已得到世界的认可。"灵芝"其实是人们 对灵芝科不同灵芝种属的一个统称，广义的灵芝包括灵芝科属的很多种类。目前世界上已 有超过25种野生灵芝生长的记载，但是已商业化利用的不足10%，绝大部分的野生灵芝资源 仍未被开发利用。假芝属是灵芝科的一个重要亚属，在灵芝科家族中占有一席之地，目前报 道假芝属有22个种，全部分布在热带、亚热带地区，其中邹盖假芝(Amauroderma rude)、乌 芝(Amauroderma rugosum)、黑假芝(Amauroderma nigr皿）已经明确具有药用价值，在抗肿 瘤、抗癌、抗氧化、消炎和提高免疫机能等方面有奇特效果<XhunweiJiaoetal，2013;Pui-Mun Qian e1:al.，2013;林杰，1996)。
[0003] 乌芝，又称假芝(Amauroderma rugosum)，为灵芝科假芝属真菌，是一种热带亚热 带地区特有的珍稀药用真菌(赵继鼎，1992;毕志树，1994)。最新的研究结果表明乌芝具有 消炎、抗氧化等作用(Pui-Mun化an etal. ,2013;吴兴亮等，2013)，在马来西亚作为一种传 统的民间中草药用于治疗神经性癒痛等有奇特效果（Y. S. Chang etal. ,2004; M.A.Azliza etal. ,2012)，在我国华南地区也有采摘、销售野生乌芝的传统习惯(黄年来， 2010;戴玉成等，2008)，不仅价格高，且常常供不应求，极具开发利用价值。由于野生乌芝生 长速度十分缓慢，产量极低，仅靠自然供给远远不能满足人们的需求，目前仍未有关于乌芝 子实体培养的有关文献报道，为此开展乌芝子实体培养十分迫切。
[0004] 目前，世界范围内对假芝属真菌驯化栽培的研究报道较少，仅少数真菌分类学者 报道了其分类位置，采摘时间、地点等（上海农科院食用菌所，1991; Pelger ,1973; Australian Fungi - A Blog,2007)。国内一些学者对皱盖假芝菌丝液体深层发酵条件（郑 用林等，2007 ;马海昇等，2007 ;夏险等，2012 ;王谦等，2005)及引种袋料栽培（张红红等， 2014)、富砸菌株筛选等做了一些报道(张晓等，2012);黄龙花等申请了 "一种皱盖假芝的人 工栽培方法"专利（【申请号】CN201310737785.6)，通过修剪、通气刺激等管理方式实现皱盖 假芝的人工栽培。但是，目前没有关于乌芝子实体培养的相关文献报道。
[0005] 乌芝(也称假芝)的子实体的生长特性与目前栽培的赤灵芝、紫灵芝等常规灵芝品 种不同，采用常规灵芝栽培管理方式不能很好的获得乌芝子实体。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种乌芝子实体的培养方法。
[0007] 本发明所采取的技术方案是： 一种乌芝子实体的培养方法，包括下列步骤： 1) 挑取乌芝纯菌丝体培养得到乌芝母种； 2) 挑取乌芝母种进行扩大摇瓶培养，得到乌芝摇瓶种； 3) 将乌芝摇瓶种进一步扩大至发酵罐中培养4-6d，得乌芝液体菌种； 4) 将乌芝液体菌种接种到乌芝培养基菌包，待菌丝长满菌包，即获得乌芝生产菌包； 5) 后熟7-15天后，将乌芝生产菌包转移至出芝房进行层架式售栽出芝管理；出芝管理 所用的栽培售不低于菌包15cm，每个菌包间隔10-12畑1，栽培售顶部及高出菌包部分用膜包 裹封住进行乌芝培养;待子实体原基形成后，继续培养，待乌芝成熟后进行采收，得到乌芝 子实体。
[000引优选的，步骤1)~步骤4)的培养条件为黑暗、24~27°C的溫度和60%-75%的空气相 对湿度。
[0009] 优选的，步骤1)~步骤3)所用的培养基，包含下列重量百分比的组分:去皮马铃馨 16%-24%、葡萄糖 1.6%-2.4%、蛋白腺0.16%-0.24%、牛肉膏0%-0.2%、憐酸二氨钟0.24%-0.36%、硫酸儀0.12%-0.18%，VBi 0.024%-0.0036%、pH7-8。
[0010] 优选的，步骤1)中的培养基中加入适量的琼脂。
[0011] 优选的，步骤3)中的培养基中还需加入适量消泡剂。
[0012] 优选的，步骤3)中，接种量为发酵罐培养液体积的8%-12%，通气量为体积比(0.8-1.2):(0.8-1.2)〇
[0013] 优选的，步骤4)中乌芝培养基菌包中的培养基，包含下列重量百分比的组分：20-25〇/〇棉巧壳、18-2?)杂木屑、18-22%玉米忍、8-12%花生壳、8-12%大豆杆、4-6%麦教、1.6-2.4〇/〇 玉米粉、4-6%咖啡渣、0.8-1.跳薦糖、0.8-1.2%碳酸巧、1.6-2.4%石灰、0.8-1.2%复合肥。
[0014] 优选的，步骤4)中乌芝培养基菌包的制作方法如下:将培养基各组分按重量称好， 加水混合均匀，薦糖溶于水中一同加入，调整基质含水量为58%-62%，pH值7-8,压制成型。
[0015] 优选的，步骤4)接种量为3%-5%，按质量百分比计。
[0016] 优选的，步骤5)中的培养条件为空气相对湿度80%-90%，提供充足氧气W及散射 光，避免阳光直射，溫度控制在25-30°C。
[0017] 优选的，步骤5)中的层架式售栽出芝管理中，栽培售顶部及高出菌包部分用一层 保鲜膜包裹。
[0018] 优选的，步骤5)中的层架式售栽出芝管理中，将封好膜的栽培售整齐摆放在栽培 架上，层距高于栽培售不少于IOcm,层架数视房间高度而定，最高一层架子距离屋顶不少于 lm〇
[0019] 优选的，步骤5)中乌芝成熟的判断标准为：当子实体边缘没有白色边，菌盖完全变 灰褐色，用力触碰、划割子实体均不再出现红色液体，再经7-10天时间让菌盖增厚，即可进 行采收。
[0020] 本发明的有益效果： 本发明根据乌芝子实体生长发育特性和研究试验，探索出人工培养乌芝子实体的方 案。本发明为人工栽培的食用菌种类增加了新的品种，为乌芝研究和商业开发奠定坚实的 基础。
[0021] 本发明采用乌芝液体菌种做生产用种，大大缩短了制种时间，液体菌种从母种到 液体菌种培养仅需20-27天，比固体制种时间缩短60%-70%。栽培菌包接种液体生产种后萌 发快，长势好，经30-40天即可长满菌包，层架式售栽出芝管理方式能很好地获得乌芝子实 体，且节省制种、栽培房间面积，高效、简单、快捷。乌芝子实体经培养50-60天左右即可采 收。利用本发明培育的乌芝子实体商品性好，生物转化率高，子实体粗多糖含量高，品质好。 本发明具有简单、高效、易于工厂化、规模化操作的特点。
[0022] 本发明提供了一种适宜于乌芝生长的菌包培养基，其中包括W下成分:棉巧壳、杂 木屑、玉米忍、花生壳、大豆杆、麦教、玉米粉、咖啡渣、薦糖、碳酸巧、石灰、复合肥。所述培养 基，专口针对乌芝生长优选设计，富含氮源、碳源、矿物质、维生素等，并充分利用农林及加 工业的下脚料，特别是咖啡渣等世界性头号消费废弃物，变废为宝，减轻对环境的压力的同 时，拓宽食用菌生产原材料来源。利用此培养基，乌芝在生长中可W获得充分的养分，生产 出的乌芝子实体商品性好，生物转化率为10%-20%，子实体粗多糖含量高(3.22%)，品质好。 相较于一般灵芝，中华寺灵芝的粗多糖仅为0.76%，南韩赤为0.75%(李蠢龙，赵蠢，吴杰， 等.中华寺灵芝引种驯化栽培及主要营养成分评价[J].时珍国医国药，2009, 20(9): 2267-2269.)O
[0023] 本发明采取层架式售式栽培技术，是驯化栽培成功因素之一。栽培售要求高于菌 包15cmW上，且在栽培售顶部及高出菌包部分用一层保鲜膜封住，层架式售式栽培技术为 乌芝子实体生长发育提供一个适合的小环境，此外，保鲜膜具有良好的透气性，不影响栽培 框内外氧气的交流，使子实体更健康的生长，获得商品性好、产量高的乌芝子实体。
[0024] 本发明首次公开了乌芝采收的判断标准为：当子实体边缘没有白色边，菌盖完全 变灰褐色，用力触碰、划割子实体均不再出现红色液体，再经7-10天时间让菌盖增厚，即可 进行采收。一般情况下，乌芝子实体生长50-60天即可发育成熟，传统的判断方法是：当子实 体边缘没有白边，菌盖完全变灰褐色时，进行采摘。但是本研究发现，虽然菌盖不再横向分 化，但是用力触碰、划割子实体仍会出现红色液体，此时采摘得到的乌芝子实体产量和品质 均未达到最佳水平。如果等待菌盖继续纵向生长，此过程中如果没有精准的时间控制和判 断方法，往往导致乌芝生长进入衰老期，获得的子实体品质反而会下降，如粗多糖的含量反 而下降，此外，商品性也会受影响，甚至会导致病虫害的发生。所W本发明经过反复实验总 结出上述标准。此时获得的子实体更加厚实，多糖等有效成分积累更多，能获得最高产量和 最佳品质。
【附图说明】
[0025] 图1为乌芝采收标准效果图； 图2为对比例1所获乌芝与本发明的对比效果图。
【具体实施方式】
[0026] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
[0027] 乌芝采集来源:①从野外采集到新鲜的乌芝子实体，通过组织分离，获得乌芝一级 试管母种;②从正规的科研单位购买、引进乌芝一级试管母种。
[0028] 实施例1 一种乌芝的培养方法，该方法步骤如下： (1)、挑取部分乌芝纯菌丝体(0.5cm2)接种到新的试管培养基中（培养基配方为:去皮 马铃馨20%、葡萄糖2%、蛋白腺0.2%、憐酸二氨钟0.3%、琼脂2%、硫酸儀0.15%，VBi 0.003%、 PH7-8)，在一定条件下（黑暗、环境溫度25± TC、空气相对湿度6